簡介：復旦大學碩士研究生學位論文GIRDIN及PGIRDIN對乳腺癌細胞生物學功能和乳腺癌患者預后影響的初步探索TENTATIVEEXPLORATIONOFTHEROLEOFGIRDINANDPGIRDINONBREASTCANCERCELLSANDBREASTCANCERPATIENTPROGNOSIS院系專業(yè)姓名導師導師組成員復旦大學附屬腫瘤醫(yī)院腫瘤學彭雯婷邵志敏教授胡欣副教授姚玲博士2目錄LIIIIIIIIIIIIILLLLIIIIIIIY2864074縮略詞對照表4中文摘要6英文摘要8論文前言10第一部分。11材料和方法11結(jié)果22第部分附表圖25第二部分32材料和方法32結(jié)果35第二部分附表圖37討論45參敬獻。47綜踅B50碩士期間發(fā)表接收文章57碩士期間參加學術(shù)會議和獲獎情況58努謝。59

簡介：碩士學位論文一種新型細胞壓力加載系統(tǒng)的研制及壓力對一種新型細胞壓力加載系統(tǒng)的研制及壓力對BMSCS生物學特性與軟骨向分化影響的研究生物學特性與軟骨向分化影響的研究劉巖正培養(yǎng)類別全日制學位類型學術(shù)學位一級學科專業(yè)類口腔醫(yī)學二級學科專業(yè)口腔臨床醫(yī)學研究方向口腔生物力學指導教師張副教授（副主任醫(yī)師）培養(yǎng)單位口腔醫(yī)院急診與綜合臨床科二O一三年五月第四軍醫(yī)大學THEFOURTHMILITARYMEDICALUNIVERSITY分類號R781UDC61631密級公開第四軍醫(yī)大學碩士學位論文目錄縮略語表1中文摘要2英文摘要7前言13文獻回顧141顳頜關(guān)節(jié)力學特性的研究142髁突軟骨損傷治療的研究現(xiàn)狀153力學刺激對細胞生物學效應(yīng)的研究現(xiàn)狀174細胞力學加載裝置的研究現(xiàn)狀21正文25第一部分新型多功能體外細胞動靜態(tài)正負壓加載系統(tǒng)的研制251材料252系統(tǒng)組成263系統(tǒng)的工作原理294系統(tǒng)的軟件設(shè)計295討論31第二部分壓力作用下骨髓間充質(zhì)干細胞的力學生物學響應(yīng)33實驗一SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的分離培養(yǎng)與鑒定331材料332方法343結(jié)果364討論38實驗二不同壓力條件對BMSCS增殖活性的影響391材料392方法39

簡介：NOTCH基因在無脊椎動物和脊椎動物中都廣泛存在且高度表達，并且在不同物種間都具有高度的進化保守性。NOTCH信號通路的功能復雜多樣，調(diào)控正常細胞的生長分化，決定細胞的命運，參與調(diào)控細胞生命活動的方方面面，在哺乳類動物中，NOTCH參與造血、T細胞發(fā)育、血管生成等重要生理過程，并與腫瘤形成和某些神經(jīng)系統(tǒng)疾病有密切關(guān)系。本實驗室采用TETON基因表達系統(tǒng)，建立了可動態(tài)調(diào)控NICD基因表達的PC12NOTCH1細胞系，克服了傳統(tǒng)研究方法不能準確調(diào)控細胞內(nèi)NOTCH1表達的缺點，有利于更好的研究NOTCH1對PC12細胞的作用以及其中的分子機制。自噬在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中有著重要作用，且已有研究表明NOTCH與自噬的信號調(diào)控有關(guān)。本實驗旨在PC12NOTCH1細胞系的基礎(chǔ)上研究PC12細胞內(nèi)NOTCH1基因?qū)毎麅?nèi)自噬和細胞生物學特性的影響及PI3KAKTMT通路MRNA的變化，探討可能的調(diào)控機制。目的四環(huán)素衍生物強力霉素DOX動態(tài)調(diào)控TETON基因表達系統(tǒng)PC12NOTCH1細胞中NOTCH1胞內(nèi)段NICD的表達，檢測在NOTCH1不同的表達水平上PC12細胞增殖、凋亡和細胞內(nèi)自噬水平的變化。研究NOTCH1基因?qū)毎麅?nèi)自噬和細胞生物學特的影響及PI3KAKTMT通路MRNA的變化，探討其可能的調(diào)控機制。方法1檢測PC12NOTCH1細胞內(nèi)NICD的表達復蘇PC12NOTCH1細胞，取兩代之后的細胞接種六孔板，加入四環(huán)素DOX1UGML誘導細胞內(nèi)NICD的表達。根據(jù)DOX誘導時間分為六各不同時間組分別是0H，12H，24H，36H，48H，60H。熒光倒置顯微鏡下觀察不同誘導時間組內(nèi)細胞生長形態(tài)和細胞內(nèi)綠色熒光蛋白EGFP的表達，每孔計數(shù)三個視野內(nèi)的EGFP陽性表達率，最后計算平均值，得出各誘導時間組EGFP陽性細胞百分比。消化各組細胞，上流式細胞儀測量各組細胞內(nèi)NICD的熒光表達強度，繪制DOX不同誘導時間點PC12NOTCH1細胞內(nèi)NICD表達趨勢圖。2檢測高表達NICD的PC12NOTCH1細胞周期和凋亡將PC12NOTCH1細胞接種六孔板，加入四環(huán)素DOX（1UGML）誘導NICD的表達，仍舊根據(jù)DOX誘導時間分為六各不同時間組（分別是0H，12H，24H，36H，48H，60H）。消化各時間組的細胞，上流式儀測量各時間組NICD不同的表達水平上細胞內(nèi)周期及凋亡率的變化。3PC12NOTCH1細胞自噬的檢測消化各時間組的細胞并提取蛋白質(zhì)，WESTERNBLOT檢測自噬標志蛋白LC3B，BECLIN1，ATG7，ATG5的表達。軟件分析曝光條帶灰度值并比較各時間組細胞內(nèi)自噬蛋白的表達差異。4熒光定量PCR檢測PC12NOTCH1細胞內(nèi)自噬信號通路提取各時間組細胞內(nèi)RNA，將RNA反轉(zhuǎn)錄成CDNA，熒光定量PCR檢測PI3K、AKT、MT等基因的表達，比較在不同分組間MRNA表達差異。結(jié)果1熒光表達量加入DOX誘導后，在顯微鏡下觀察PC12NOTCH1內(nèi)綠色熒光蛋白的表達量和流式細胞儀檢測熒光強度，發(fā)現(xiàn)0H組細胞未觀察到綠色熒光，隨著誘導時間的增加，從12H組，24H組再到36H組細胞中綠色熒光蛋白表達量逐漸增加，細胞熒光表達率分別為20％，55％，71％。在誘導36H時熒光表達強度和熒光表達率達到最高，之后再持續(xù)給藥誘導48H，60H時發(fā)現(xiàn)NICD熒光表達率和表達強度有所下降，但都高于0H組，熒光表達率分別為63％，59％。各誘導時間組細胞內(nèi)NICD的熒光強度都顯著高于非誘導組。2細胞周期和凋亡在PC12NOTCH1DOX非誘導細胞組中，細胞的凋亡率維持較低水平。隨著誘導時間的增加直到最大誘導時間60H組，PC12NOTCH1細胞凋亡率是逐漸升高的，60H時凋亡率達到最高，統(tǒng)計分析各誘導組與非誘導組相比都具有顯著向差異。在PC12NOTCH1DOX非誘導組細胞中，細胞的S期較高。從0H組開始隨著誘導時間的增加直到最大誘導時間60H組，PC12NOTCH1細胞周期中S期逐漸降低，60H組S期達到最低。3細胞自噬水平的變化WESTERNBLOT檢測各時間組細胞內(nèi)自噬標志蛋LC3B，BECLIN1，ATG7，ATG5的表達。應(yīng)用軟件IMAGE對曝光條帶灰度值分析得出這四種自噬蛋白的表達量先隨DOX誘導時間增加而升高到36H達到最高，說明此時細胞自噬水平達到高峰，之后再持續(xù)誘導48H，60H時發(fā)現(xiàn)灰度值呈現(xiàn)逐漸下降趨勢，但都高于0H組方差分析得，各誘導時間組細胞內(nèi)LC3B，BECLIN1，ATG7，ATG5的表達量都顯著高于非誘導組。4熒光定量PCR檢測DOX不同誘導時間組PC12細胞內(nèi)基因PI3K、AKT、MT、GADPH的表達。分析結(jié)果可得各個實驗組細胞內(nèi)PI3K、AKT、MT的表達比非誘導組明顯降低，且具有顯著差異P＜001。結(jié)論1利用強力霉素DOX動態(tài)調(diào)控TETON基因表達系統(tǒng)PC12NOTCH1胞中NOTCH1胞內(nèi)段NICD的表達，其效能與誘導時間密切相關(guān)。2隨著PC12細胞內(nèi)NICD表達量增高，PC12細胞的細胞周期受到抑制增強，細胞凋亡率逐漸升高。3PC12細胞內(nèi)NICD表達量增高，細胞內(nèi)自噬激活，其機制與PI3KAKTMT通路抑制有關(guān)。

簡介：動脈粥樣硬化AS嚴重威脅人類健康，雖然大量的流行病學資料顯示傳統(tǒng)的危險因子是動脈粥樣硬化的主要危險因素，但動脈粥樣硬化仍然有許多潛在的病因亟待探索。研究表明，病原微生物感染可能參與了動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展，感染后的炎癥反應(yīng)在動脈粥樣硬化的發(fā)生過程中發(fā)揮重要作用。有關(guān)病毒感染與AS的關(guān)系逐漸受到人們重視，血清流行病學和分子生物學的研究資料表明，HSV及其DNA序列存在于AS的病灶組織，主要見于血管平滑肌細胞SMC和內(nèi)皮細胞EC，且AS患者血清HSV的抗體陽性率明顯增高，提示HSV的感染在AS的形成和發(fā)生發(fā)展過程中可能起重要作用。迄今為止，對于HSV如何參與AS的發(fā)病機制尚缺乏深入的了解，病毒對體外靶細胞的作用可以反映病毒對體內(nèi)細胞的直接作用，研究體外情況下HSV感染血管內(nèi)皮細胞的生物學效應(yīng)，對闡明HSV的致病機制具有非常重要的意義。目前研究發(fā)現(xiàn)，HSV可通過內(nèi)皮毒性作用、損害內(nèi)皮依賴的舒張功能及影響內(nèi)皮粘附功能等方式造成內(nèi)皮結(jié)構(gòu)和功能損傷，但其潛在的基因水平的機制尚不清楚。傳統(tǒng)的RNA方法學如NTHERN斑點雜交分析一次只能研究一種基因，成本高，效率低，而新興的基因芯片技術(shù)，提供了一種基因差異表達的高通量研究工具。本實驗應(yīng)用基因芯片技術(shù)研究了HSV2對人臍靜脈內(nèi)皮樣細胞ECV304基因表達的影響，以探討HSV導致血管內(nèi)皮損傷和動脈粥樣硬化的基因機制?；谝陨显O(shè)想，擬主要觀測①感染細胞形態(tài)變化；②病毒核酸代謝、病毒抗原表達；③感染細胞基因表達方面的變化。探討以上內(nèi)容的變化特點和規(guī)律，在細胞和分子水平上闡述HSV致血管內(nèi)皮細胞的生物學效應(yīng)，為進一步揭示HSV的致病機制及其治療和預防提供一定的理論基礎(chǔ)。方法1采用HSV2感染體外培養(yǎng)的ECV304細胞，建立HSV的細胞感染模型。2對于ECV304細胞的感染模型，主要運用相差顯微鏡和電子顯微鏡觀察感染細胞的形態(tài)變化，熒光顯微鏡觀測病毒抗原的表達，噻唑藍MTT比色法檢測細胞增殖的變化，流式細胞儀測定HSV感染后的細胞凋亡狀況。3在細胞感染早期，應(yīng)用人全基因組寡核苷酸表達譜芯片篩選差異表達的基因，并利用生物學信息的手段分析這些差異基因所參與的生物過程。4選擇2個上調(diào)基因SP100基因和RPS24基因和2個下調(diào)基因RTP801基因和HNRPA1基因應(yīng)用實時定量PCR加以驗證，比較實時定量PCR和基因表達譜芯片二種檢測方法所得結(jié)果的相關(guān)性。5各項指標以均數(shù)±標準差表示，兩組均值間比較用單向方差分析ONEWAYANOVA檢驗，統(tǒng)計學處理均在計算機上用SPSS100軟件完成。P＜005表示有顯著性差異。主要結(jié)果1病毒抗原表達變化HSV2感染ECV304細胞后，細胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)片狀或顆粒性黃綠色熒光，說明ECV304細胞內(nèi)存在HSV2病毒抗原表達。2細胞增殖變化HSV2感染ECV304細胞后12H和24H，細胞的抑制率分別為186％和472％，統(tǒng)計學分析表明，病毒在不同時相對同一株細胞的抑制率均存在顯著性差異。3感染細胞形態(tài)變化HSV2感染ECV304細胞后12H，出現(xiàn)灶性細胞病變，主要為細胞逐漸變圓、變大，核變大、核膜移位，折光性差。接種后24H病變范圍呈片狀擴大，融合成多核巨細胞，染色體著邊、核破碎。48H大部分細胞脫落、多核巨細胞裂解。電鏡結(jié)果顯示，感染后12H，ECV304細胞出現(xiàn)細胞融合，典型的核染色質(zhì)濃集，分布與核膜周邊，形成花瓣形核，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增多，繞核周分布，且出現(xiàn)大而明顯的空泡，空泡內(nèi)有少量未成熟的病毒粒子。感染后24H，ECV304細胞出現(xiàn)多核巨細胞，線粒體內(nèi)嵴紊亂、斷裂，出現(xiàn)不同程度的自噬化、溶酶體化、空泡化，并可見到大量“鷹眼樣”的已包裝成熟的病毒顆粒以及正在包裝的病毒粒子。4細胞凋亡檢測經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分析，HSV2感染ECV304細胞后對照組及感染組均未見典型的細胞DNA降解梯狀條帶。經(jīng)流式細胞儀檢測，對照組及感染組均未出現(xiàn)G1峰左側(cè)的亞二倍體細胞群峰型亞G1峰，也稱凋亡峰，提示HSV2感染ECV304細胞后未發(fā)生凋亡現(xiàn)象。5基因芯片檢測通過對HSV2感染ECV304細胞后6H的對照組及感染組基因表達譜芯片檢測發(fā)現(xiàn)，每張芯片共有18775個數(shù)據(jù)為有效數(shù)據(jù)，其中共有462個基因存在顯著性表達差異，與對照組相比在實驗組中有318個基因發(fā)生了上調(diào)表達變化，144個基因發(fā)生了下調(diào)表達變化。主要包括與細胞粘附、信號傳遞、細胞分裂、DNA復制、細胞周期、炎性反應(yīng)、凋亡、離子通道、細胞受體、免疫和代謝等相關(guān)的基因。6通過生物信息學分析差異基因所參與的生物過程，結(jié)果發(fā)現(xiàn)462條差異基因共參與了237個生物過程，其中有79個生物過程具有顯著性差異P＜005。主要包括蛋白質(zhì)合成、信號傳遞、蛋白質(zhì)折疊、RNA剪接、離子通道、核糖體的合成和組裝、細胞呼吸、DNA和MRNA代謝等生物過程。與蛋白質(zhì)合成相關(guān)的RPS10、RPS20、EEF1B2、SUI1等73個基因普遍上調(diào)，WBSCR1、GARS、PARS、RPL6等7個基因普遍下調(diào)；與蛋白質(zhì)伸展和折疊相關(guān)的HSPA8、HSPE1、CCT2等8個基因上調(diào)，HSPCB、HSPCA、CCT3等9個基因下調(diào)；與細胞信號轉(zhuǎn)導相關(guān)的RPS27、CASK、APP、HINT1等12個基因上調(diào)，SCGB1A1、RHO、CELSR1等5個基因下調(diào)。7實時定量PCR結(jié)果HSV2感染ECV304細胞6H時通過實時定量PCR檢測，可以看出SP100基因和RPS24基因處理組比對照組分別升高2187和1733倍，這與基因芯片檢測結(jié)果分別為2097和2980基本一致，說明在HSV2感染ECV304的過程中SP100基因和RPS24基因的表達顯著升高。RTP801基因處理組比對照組降低0211倍，與基因芯片檢測結(jié)果03263基本一致，提示在HSV2感染ECV304的過程中RTP801基因的表達顯著降低。HNRPA1基因處理組比對照組升高1633倍，而基因芯片檢測結(jié)果為降低0380，二者結(jié)果不一致，需要進一步驗證。結(jié)論1HSV2可感染體外培養(yǎng)的ECV304細胞并導致ECV304細胞出現(xiàn)典型的細胞病變，主要引起細胞發(fā)生融合性和裂解性變化，未發(fā)現(xiàn)HSV2對ECV304細胞的誘導凋亡現(xiàn)象。2應(yīng)用基因芯片技術(shù)研究了HSV2對ECV304細胞基因表達的影響，共發(fā)現(xiàn)462條差異表達的基因，其中表達上調(diào)的基因318條，表達下調(diào)的基因144條。主要包括與細胞粘附、信號傳遞、細胞分裂、DNA復制、細胞周期、炎性反應(yīng)、凋亡、離子通道、細胞受體、免疫和代謝等相關(guān)的基因。3通過生物信息學分析差異基因所參與的生物過程，結(jié)果發(fā)現(xiàn)462條差異基因共參與了237個生物過程，其中有79個生物過程具有顯著性差異P＜005。主要包括蛋白質(zhì)合成、信號傳遞、蛋白質(zhì)折疊、RNA剪接、離子通道、核糖體的合成和組裝、細胞呼吸、DNA和MRNA代謝等生物過程。進一步分析發(fā)現(xiàn)，在這些差異基因中有多種基因可能參與了HSV致內(nèi)皮損傷、宮頸癌及動脈粥樣硬化，而其它多數(shù)首次發(fā)現(xiàn)的差異表達的基因在HSV致病機制中的作用尚不清楚。盡管如此，通過基因芯片篩選異常表達的基因，為深入研究HSV導致內(nèi)皮損傷和動脈粥樣硬化的機制提供了有價值的線索。4應(yīng)用雙鏈DNA結(jié)合SYBRGREENⅠ的實時定量PCR驗證差異基因，定量結(jié)果與基因芯片檢測結(jié)果基本一致，說明了人全基因組寡核苷酸表達譜芯片在篩選差異表達基因中具有的可靠性。通過對HSV2感染ECV304細胞的生物學效應(yīng)研究，初步發(fā)現(xiàn)了在早期感染過程中的大量差異表達基因，為進一步深入研究HSV的致病機制提供了依據(jù)。

簡介：碩士學位論文論文題目TIM3分子在胃癌髓源性抑制性細胞上的表達及其生物學功能研究生姓名朱金蓮指導教師姓名袁蘇徐專業(yè)名稱腫瘤學研究方向消化道腫瘤的基礎(chǔ)與臨床研究論文提交日期2014年3月

簡介：研究背景基質(zhì)金屬蛋白酶MMPS是細胞外基質(zhì)降解的關(guān)鍵酶大量研究顯示MMP9是與哮喘最為相關(guān)的基質(zhì)金屬蛋白酶之一同正常人相比哮喘患者肺泡灌洗液、誘導痰、和血清中MMP9的表達均顯著增加哮喘患者高表達的MMP9一方面廣泛參與到氣道炎癥過程另一方面能加速細胞外基質(zhì)的降解與沉積失衡從而加重患者的氣道重塑參與到哮喘的發(fā)病過程。氣道上皮細胞在炎癥環(huán)境下能夠分泌大量MMP9但具體機制仍未完全闡明研究顯示CXCL12CXCR4生物學軸能上調(diào)多種細胞MMP9的表達從而參與到不同的疾病過程中CXCL12CXCR4生物學軸是否會促進哮喘氣道上皮細胞分泌MMP9目前尚未見報道。目的探討CXCL12CXCR4生物學軸是否會促進哮喘氣道上皮細胞MMP9的分泌。方法本實驗擬通過體外和在體實驗兩方面驗證CXCL12CXCR4生物學軸是否會促進哮喘氣道上皮細胞分泌MMP9。首先體外培養(yǎng)人支氣管上皮細胞系16HBE并運用免疫熒光方法檢測HBE細胞CXCR4受體的表達并通過IL13體外模擬哮喘環(huán)境檢測CXCL12是否會促進HBE細胞分泌MMP9分為以下6組正常組IL13CXCL12組CXCL12組CXCL1212G5組CXCL12同型對照組CXCL12AMD3100組用WESTERNBLOT方法檢測MMP9的蛋白表達檢測CXCL12對MMP9的促進作用是否存在時間依賴性CXCL12分不同時間組0H2H4H6H12H24H刺激HBE細胞檢測MMP9的蛋白表達檢測CXCL12是否通過ERKPERK信號通路促進HBE細胞分泌MMP9CXCL12分不同時間段刺激HBE細胞0MIN15MIN30MIN45MIN1H2H4HWESTERNBLOT方法檢測ERK、PERK的變化另設(shè)置PD98059干預實驗實驗分組正常組、CXCL12組、PD98059CXCL12組WESTERNBLOT方法檢測MMP9的變化。動物實驗建立小鼠哮喘模型實驗分組正常組、哮喘組、AMD3100干預組蘇木精伊紅染色檢測小鼠氣道周圍炎癥明膠酶譜方法檢測小鼠肺泡灌洗液中MMP9的活性。結(jié)果CXCL12CXCR4生物學軸能促進哮喘氣道上皮細胞分泌MMP91CXCL12刺激組MMP9的表達明顯高于正常對照組P2CXCL12對HBE細胞MMP9分泌的促進作用呈時間依賴性2H后開始升高6H達高峰。3CXCL12與CXCR4受體結(jié)合后可通過ERKPERK信號通路促進HBE細胞MMP9的分泌。4動物實驗顯示與正常對照組小鼠相比哮喘小鼠氣道周圍炎癥明顯大量炎癥細胞浸潤而AMD3100干預組則可明顯減輕氣道周圍的炎癥反應(yīng)。5哮喘小鼠肺泡灌洗液BALF中MMP9的活性明顯高于正常對照組使用AMD3100干預后可以顯著降低哮喘小鼠BALF中MMP9的活性。結(jié)論我們的實驗結(jié)果說明CXCL12與其受體CXCR4結(jié)合后可以通過ERKPERK信號通路刺激氣道上皮細胞分泌MMP9且具有時間依賴性CXCL12對HBE細胞MMP9分泌的促進作用與IL13具有協(xié)同效應(yīng)腹腔注射AMD3100阻斷CXCL12CXCR4生物學軸后可以明顯降低哮喘小鼠的氣道炎癥反應(yīng)及肺泡灌洗液中MMP9的活性。

簡介：載體支架、種子細胞、生物活性因子已成為組織工程三大重要因素。本課題以YANG等發(fā)現(xiàn)并命名的細胞對力刺激響應(yīng)的產(chǎn)物力生長因子MECHANOGROWTHFACTMGF為生物活性因子采用靜電紡絲技術(shù)ELECTROSPINNING及相分離法制備了基于聚已內(nèi)酯POLYCAPROLACTONEPCL的含MGF的葡聚糖納米微球的纖維支架采用從人的骨髓中提取的間充質(zhì)干細胞HUMANBONEMESENCHYMALSTEMCELLSHBMSC為種子細胞從HBMSC生物學行為的差異來研究葡聚糖微球?qū)GF生物活性的保護作用。本課題主要包括以下幾方面的內(nèi)容①HBMSC原代分離培養(yǎng)及鑒定利用密度梯度離心法分離培養(yǎng)HBMSCS觀察細胞形態(tài)采用CD34、CD73、CD14、CD90和CD105抗體熒光染色后流式細胞儀檢測細胞表面標志同時檢測細胞周期狀態(tài)確定細胞純度使用脂肪分化、成骨分化誘導培養(yǎng)基誘導細胞多向分化證實細胞的多向分化潛能為后續(xù)的細胞實驗提供種子細胞支持。②MGF納米微球的制備和表征采取相分離法制備空微球和含MGF的納米微球MGFLOADEDDEXTRANGLASSYNANOPARTICLESMGFDGNS并采用場發(fā)射掃描電鏡觀察微球形態(tài)為后續(xù)電紡纖維支架做準備。③靜電紡絲材料的制備和表征采用靜電紡絲技術(shù)制備四種纖維支架分別是單純PCL溶液電紡P加200ΜGMGF水溶液于PCL溶液中攪拌均勻后電紡PMPCL溶液中加100MG葡聚糖空微球攪拌均勻后電紡PD加100MG含了200ΜGMGF的葡聚糖微球到PCL溶液中攪拌均勻后電紡PDM。并通過場發(fā)射掃描電鏡FESEM、透射電鏡TEM、傅里葉紅外光譜FTIR、比表面積及孔隙度分析儀等表征手段檢測支架的表面形貌及理化性質(zhì)。④MGF對HBMSC生物學行為的影響在P、PM、PD、PDM四種不同的纖維支架上分別種植HBMSC采用酶標儀和激光共聚焦顯微鏡CLSM觀察細胞在材料表面的增殖與遷移情況檢測材料中釋放的MGF對HBMSC生物學行為的影響。本課題研究結(jié)果表明含MGF的納米微球支架能夠顯著促進HBMSC增殖和遷移熒光實時定量PCR檢測在PDM材料上面的HBMSC中MGF高表達。此靜電紡絲納米纖維能夠較好的保護MGF的活性有望在組織工程領(lǐng)域得到應(yīng)用。

簡介：第一部分真皮來源細胞外基質(zhì)材料對細胞生長代謝影響及其機制研究背景與目的自上個世紀80年代起合成材料一直是外科醫(yī)生在修復大面積組織缺損時的首選。然而隨著醫(yī)學及生物科技的發(fā)展越來越多生物來源的材料被用于臨床不論是以人為供體還是來源于動物組織的外科支架材料正越來越頻繁地用作生物補片促進組織修復和再生。在成為成形的臨床產(chǎn)品之前生物來源的補片材料需經(jīng)過一系列嚴格的去細胞過程只保留細胞外基質(zhì)。好的生物材料在早期能同時提供良好的結(jié)構(gòu)支撐以及在修復期通過釋放各種信號指導宿主細胞有效遷移并合成并減少疤痕生成從而有效完成組織重塑以及組織再生。此實驗旨在比較幾種成形的真皮來源的醫(yī)用外科補片材料在影響細胞遷移、代謝、凋亡等過程中的作用更進一步探討經(jīng)不同方法處理過的真皮來源的細胞外基質(zhì)材料在影響宿主細胞的早期滲透及代謝重塑方面的差異為進一步實驗提供前期的理論準備。方法在這項研究中我們設(shè)計了一組體外實驗來使直接比較幾種類似的真皮來源的生物材料包括人真皮來源的ALLODERMLIFECELLBRANCHBURGNJ、豬真皮來源的MEDEMATRIXKENSEYNASHEXTONPA、經(jīng)交聯(lián)處理的豬真皮來源的PERMACOLCOVIDIENMANSFIELDMA、未經(jīng)交聯(lián)處理的豬真皮來源的STRATTICELIFECELLBRANCHBURGNJ以及高度去細胞化處理的GELFOAMPFIZERNEWYKNY。不同的材料都經(jīng)過嚴格無菌操作水合并制成材料條件培養(yǎng)液用于細胞實驗。體外實驗所用材料皆經(jīng)過充分水合并按臨床要求植入。結(jié)果數(shù)據(jù)顯示MEDEMATRIX條件培養(yǎng)液在促進細胞增殖和誘導遷移具有最大積極效應(yīng)。STRATTICE能提供最大的趨化性信號且能最大程度抑制凋亡誘導。在結(jié)構(gòu)相關(guān)性性質(zhì)檢測的一系列實驗中MEDEMATRIX顯示了最好的細胞粘附性其次是PERMACOL。只有ALLODERM和MEDEMATRIX支持細胞趨化進入最表淺的區(qū)域以內(nèi)。在雞胚絨毛膜尿囊膜試驗中MEDEMATRIX是唯一支持大量細胞浸潤的材料。結(jié)論這些結(jié)果表明生物活性和結(jié)構(gòu)屬性是生物材料在研發(fā)過程中兩個需要仔細評估的性質(zhì)。嚴格的去細胞處理有效的降低了生物材料的免疫源性從而增強了其組織相容性。材料的交聯(lián)處理在增強其抗壓強度的同時也有效抑制了細胞的浸潤。較之種屬來源生物材料的處理方法更多的影響其最終性質(zhì)。第二部分間質(zhì)來源細胞外基質(zhì)外科材料對細胞生長代謝影響及其機制研究背景與目的先進生物材料制備脫細胞細胞外基質(zhì)ECM已經(jīng)被越來越多的用于再生醫(yī)學。真皮和小腸粘膜下層是早期的細胞外基質(zhì)材料的主要供體來源組織。隨后膀胱心包膜心臟瓣膜腹膜等組織也逐漸應(yīng)用于去細胞材料補片的制備。有臨床研究報告這些新型的細胞外基質(zhì)材料有良好的臨床效果但在比較生物學特性方面特別是關(guān)于生物材料與宿主相互作用和誘導組織愈合方面這些新型材料受到了相對較少的關(guān)注。此部分實驗研究旨在比較間皮來源的去細胞生物材料與小腸粘膜下層來源及真皮來源的生物材料在影響細胞遷移、代謝、凋亡等過程中的差異作用進一步探討生物材料來源及處理方式對材料性質(zhì)的影響。方法在這項研究中我們比較了三種不同組織來源的脫細胞ECM支架材料真皮來源的ALLODERM和GELFOAM明膠海綿小腸粘膜下層來源的SURGISIS和OASIS以及和間皮來源的MESOBIOMATRIX和VERITAS通過體內(nèi)及體外實驗系統(tǒng)地評估不同生物材料的內(nèi)在生物屬性包括調(diào)節(jié)細胞代謝和招募宿主細胞遷移直接細胞粘附以及雞胚絨毛尿囊膜試驗等。結(jié)果材料條件培養(yǎng)液的數(shù)據(jù)顯示MESOBIOMATRIX、OASIS和GELFOAM明膠海綿支持細胞增殖程度優(yōu)于VERITALSURGISIS和ALLODERM。MESOBIOMATRIX提供了最強的細胞遷移和趨化性信號其次是VERITAS和OASIS。OASIS有最好的抑制細胞凋亡作用。直接粘附試驗提示MESOBIOMATRIXVERITAS和ALLODERM有兩面性。在雞絨毛膜尿囊的膜CAM測定中GELFOAM明膠海綿有最大細胞浸潤比2062±576CM2其次是MESOBIOMATRIX1565±473CM2和VERITAS1986±165CM2。ALLODERM和SURGISIS細胞浸潤率最小。結(jié)論我們設(shè)計了一個相對全面的評價脫細胞生物支架材料的系統(tǒng)。在測試材料中MESOBIOMATRIX和OASIS在誘導細胞遷移整合再生方面有自己獨特的優(yōu)勢使它們成為更有潛力的外科補片材料并為各種臨床應(yīng)用服務(wù)。更進一步的基于生物材料與的宿主組織長期作用反應(yīng)的研究將幫助完善生物材料設(shè)計的指導原則。

簡介：學校代碼10023學號200701091白細胞介素27對胰腺癌細胞生物學行為的影響及機制研究專業(yè)年級北京協(xié)和醫(yī)學院臨床醫(yī)學專業(yè)2007級姓名姚魯田導師廖泉教授北京協(xié)和醫(yī)學院臨床學院完成日期2015年06月縮略詞表

簡介：分類號密級國際十進分類號（UDC）第四軍醫(yī)大學學位論文堿性成纖維細胞因子對根尖牙乳頭干細胞堿性成纖維細胞因子對根尖牙乳頭干細胞生物學作用及機制研究生物學作用及機制研究（題名和副題名）吳家媛（作者姓名）指導教師姓名牛忠英教授倪龍興教授指導教師單位第四軍醫(yī)大學口腔醫(yī)院牙體牙髓科申請學位級別博士專業(yè)名稱口腔臨床醫(yī)學（口內(nèi)）論文提交日期201104答辯日期201105論文起止時間2008年09月至2011年04月學位授予單位第四軍醫(yī)大學堿性成纖維細胞因子對根尖牙乳頭干細胞生物學作用及機制研究堿性成纖維細胞因子對根尖牙乳頭干細胞生物學作用及機制研究研究生吳家媛學科專業(yè)口腔臨床醫(yī)學（口腔內(nèi)科學）所在單位第四軍醫(yī)大學口腔醫(yī)院導師牛忠英教授（主任醫(yī)師）倪龍興教授（主任醫(yī)師）輔導教師何文喜副教授（副主任醫(yī)師）資助基金項目資助基金項目“十一五”國家科技支撐計劃課題（2007BAI18B01）全醫(yī)藥衛(wèi)生科研基金課題06MA236軍隊十一五攻關(guān)課08G104關(guān)鍵詞詞根尖牙乳頭干細胞；堿性成纖維細胞因子；細胞增殖；細胞分化；干細胞干性；成骨成牙本質(zhì)；MAPKS信號通路中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學二O一一年四月

簡介：胚胎期造血系統(tǒng)的發(fā)育可分為兩個階段原始造血階段和永久造血階段。在胚胎首先出現(xiàn)的造血為原始造血PRIMITIVEHEMATOPOIESIS，位于胚外卵黃囊中央血島，僅產(chǎn)生原始有核紅細胞和巨核細胞，無法產(chǎn)生脾集落形成單位和長期重建造血的造血干細胞LONGTERMREPOPULATINGHEMATOPOIETICSTEMCELLS，LTRHSCS；能產(chǎn)生LTRHSC、為胚胎大部分時期的發(fā)育提供造血物質(zhì)、為生后造血系統(tǒng)提供HSCS儲備池的永久造血稍后發(fā)生。原始造血發(fā)生于卵黃囊血島已被普遍認可，但永久造血的起源部位尚存爭議。長期以來認為永久造血也是起源于胚外卵黃囊，而近10年來越來越多的證據(jù)表明永久造血起源于胚內(nèi)的主動脈旁胚臟壁PARAATICSPLANCHNOPLEURA，PAS主動脈性腺中腎區(qū)ATAGONADMESONEPHROSREGION，AGMREGION。AGM區(qū)正成為國際上造血發(fā)生發(fā)育機制、造血分化機制研究中的熱點。由于永久HSC在AGM區(qū)存留時間短、數(shù)目極為有限，加之胚體幼小、取材困難，有關(guān)研究還十分有限。MARCOSMA等報道小鼠AGM區(qū)細胞表達CKIT，AA41，MAC1和SCA1，但未對這類細胞的造血活性進一步研究。DELASSUSS等分離孕11天小鼠的AGM單個細胞，發(fā)現(xiàn)AGM區(qū)CD34CKIT細胞具有多系造血形成能力；RTPCR和基因分析發(fā)現(xiàn)AGM區(qū)CD34CKIT細胞表達紅系ΒGLOBIN和髓系MPO標志，不表達淋巴系標志CD3、THY1和Λ5，多數(shù)細胞還表達干細胞相關(guān)基因標記如AML1、PU1、GATA2和LMO2以及造血生長因子受體GCSFR。人AGM區(qū)HSCS的表型迄今未有定論，也缺乏其基因表達的研究。永久造血的發(fā)育受到兩方面因素的調(diào)控，即造血微環(huán)境及遺傳基因。AGM區(qū)細胞和脂肪細胞。1胎肝基質(zhì)細胞和胎肝MSC表面標記的檢測流式細胞儀檢測結(jié)果顯示內(nèi)皮細胞或造血細胞抗原CD31、CD34、CD45在二者表面為陰性表達，而CD29、CD44、CD105、CD106、CD166均為陽性表達；與GVHD發(fā)生相關(guān)的標記HLADR、B71CD80、B72CD86、CD40、CD40L均為陰性。間接免疫熒光檢測結(jié)果顯示人FL基質(zhì)細胞和MSC表達細胞外基質(zhì)蛋白FIBRONECTIN、ΑSMA，同時表達發(fā)育中的FL細胞即上皮細胞的標記AFP和ECADHERIN。2造血相關(guān)基因和造血生長因子MRNA的表達FL基質(zhì)細胞的RTPCR檢測結(jié)果顯示人FL基質(zhì)細胞表達造血相關(guān)基因GATA2MRNA，表達GP130、BMP4、TGFΒ1MRNA，表達IL3、IL6、SCF、FLT3L、OSM、EPO等造血生長因子MRNA，不表達TPO、MCSF、LIF等因子MRNA。FLMSC除不表達造血因子IL3MRNA外，其他表達情況與基質(zhì)細胞表達情況相同。3ELISA檢測胎肝基質(zhì)細胞和胎肝MSC培養(yǎng)上清中造血因子水平FL基質(zhì)細胞和MSC均分泌造血生長因子BMP4、TGFΒ1、EPO和IL6，且因子水平高于胎齡35天YS來源基質(zhì)細胞和軀干成纖維細胞P＜005。二者P5代細胞分泌因子的水平基本無顯著差異，而在P0、P10、P15代以基質(zhì)細胞分泌水平較高，其中各代FL基質(zhì)細胞EPO分泌水平始終高于FLMSC。4小結(jié)本研究分離培養(yǎng)FL造血期FL基質(zhì)細胞和MSC。結(jié)果顯示，人FL基質(zhì)細胞和MSC表達造血微環(huán)境細胞外基質(zhì)蛋白FIBRONECTIN、ΑSMA，同時表達發(fā)育中的胎肝細胞即上皮細胞的標記AFP和ECADHERIN，提示二者對胎肝造血期造血和肝臟發(fā)育具有重要意義。RTPCR和ELISA檢測到胎肝基質(zhì)細胞表達多種造血生長因子，有作用于中胚層調(diào)節(jié)造血細胞形成的BMP4和TGFΒ1，有作用于早期HSC和造血祖細胞的HGFSIL3、IL6、SCF、FLT3L，尚有作用于紅系的EPO表達。與FLMSC相比，同一組織來源的胎肝基質(zhì)細胞表達更多的造血因子，是胎肝造血期主要的造血微環(huán)境成分；胎肝MSC分化能力更強，可能處于發(fā)育生物學的上游階段，它即能分化產(chǎn)生VSMC形成造血基質(zhì)成分促進造血，又能進一步分化為成熟肝細胞，對造血和肝臟發(fā)育都具有不可或缺的作用。

簡介：點擊查看更多人骨髓基質(zhì)細胞的生物學特性及其分化的研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目錄中英文縮略詞對照表???????????????????L中文摘要????????????????????????2英文摘要????????????????????????4前言????????????????????????6材料與方法???????????????????????8實驗結(jié)果????????????????????????24分析與討論???????????????????????35結(jié)子各????????????????????????37參考文獻????????????????????????38附錄????????????????????????43致謝????????????????????????44綜述及參考文獻?????????????????????45獨創(chuàng)性聲明???????????????????????55溫州醫(yī)科大學碩士學位論文丙酮醛與乙二醛酶I對乳腺癌細胞相關(guān)生物學功能的影響及其機制中文摘要目的丙酮醛METHYLGLYOXAL，MG是由糖酵解產(chǎn)生的二羰基復合物，初步研究表明MG起著重要的抗腫瘤作用。乙二醛酶系統(tǒng)是MG降解的主要酶，由乙二醛酶IGLYOXALASEI，GLOD和GIYOXALASE1I，GLOII組成。在一些腫瘤中GLOI的表達是上調(diào)的。本研究主要研究了MG與GLOI干擾在乳腺癌細胞株中的生物學影響以及其潛在的機制。方法1．構(gòu)建低表達GLOI的穩(wěn)定細胞株運用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方式將質(zhì)粒SHGLOI以及SHNC轉(zhuǎn)染乳腺癌MCF．7細胞、MDAMB．231細胞、T47D細胞。REAL．TIMEPCR、WESTERNBLOT技術(shù)檢測乳腺癌細胞中GLOIMRNA、GLOI蛋白的表達變化，以及酶活性分析檢測GLOI酶活性的變化。2．在穩(wěn)定低表達細胞模型的基礎(chǔ)上進行功能實驗在MDAMB231細胞、MCF．7細胞以及T47D細胞中和低表達GLOI的MDAMB．23I細胞、MCF．7細胞以及T47D細胞中加入MG后，運用CCK8檢測其細胞活性變化，TRANSWELL小室實驗檢測細胞遷移和侵襲能力的變化，劃痕實驗檢測細胞的遷移能力，平板克隆實驗檢測細胞的克隆形成能力，管狀形成實驗檢測其形成管狀物的能力。3．在穩(wěn)定低表達細胞模型的基礎(chǔ)上進行機制研究在MDA．MB．231細胞與MCF．7細胞中和低表達GLOI的MDAMB．23L細胞與MCF7細胞中加入MG后檢測其MAPK家族成員P38、JNK與ERK家族的蛋白表達情況。同時檢測單獨和聯(lián)合作用后抗凋亡蛋白BCL2與MMP9的蛋白表達的差異。結(jié)果2

簡介：NEDD9在肝癌中的表達及其與肝癌細胞生物學特性之間關(guān)系的研究盧鵬培養(yǎng)類別全日制學位類型學術(shù)學位一級學科專業(yè)類臨床醫(yī)學二級學科專業(yè)外科學（普外）研究方向肝癌的基礎(chǔ)與臨床指導教師竇科峰教授（主任醫(yī)師）培養(yǎng)單位西京醫(yī)院肝膽胰脾外科二O一五年五月分類號R7357UDC616006密級公開第四軍醫(yī)大學博士學位論文目錄縮略語表1中文摘要3英文摘要7前言11文獻回顧13正文26第一部分NEDD9在人肝細胞癌組織中的表達及意義261材料（包括所涉及的手術(shù)切除標本、所用的試劑耗材以及設(shè)備儀器）2611試驗中所涉及的組織標本2612實驗中所用的試劑及耗材2613實驗中所用到的設(shè)備和儀器272方法2821組織標本的采集以及臨床病理資料的獲取2822RTQPCR方法分析組織細胞中NEDD9MRNA的表達水平2823WESTERNBLOT檢測組織中NEDD9蛋白的表達3024免疫組織化學染色3325讀片3426隨訪和預后評估3527統(tǒng)計分析353結(jié)果3531不同組織中NEDD9MRNA表達水平的差異3532不同組織中NEDD9蛋白表達水平的差異3633NEDD9免疫組織化學染色3634NEDD9表達水平與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系3835NEDD9表達水平與肝癌患者的術(shù)后復發(fā)以及生存預后之間的關(guān)系39

簡介：點擊查看更多沉默KLF4基因?qū)Ω涡菭罴毎飳W行為的影響及其機制的研究.pdf精彩內(nèi)容。