簡介：第三軍醫(yī)大學碩士學位論文腺病毒介導PTEN基因?qū)Y(jié)腸癌細胞生物學行為的影響姓名朱自滿申請學位級別碩士專業(yè)外科學（普外）指導教師孫念緒20050501第三軍醫(yī)入學碩士學位論文英文縮寫ADBPCMVCPEDABDMS0FBSN【APKMOIM訂ODPAGEPCRP13KPMSFPNNP卯SPTKSRRPCRSDSTBE’玎JMEDXGAL主要英文縮寫詞簡表英文全稱ADENOVIRUSBASEPAIRCYTOMEGALOVIRUSCYTOPATHICEFFECTDIAMINOBENZIDINEDIMETHYLSULFOXIDEFETALBOVINESERUMMITOGENACTIVATEDPROTEINKINASEMUPTIPLIC畸OFINFECTION345DIMENTYLFIFIAZOL2Y125DIPHMYTEWAZOLIULNBROMIDEOPTICALDENSITYPOLYACRYLAMIDEGELELECTROPHORESISPOLYMERASECHAINREACTIONPHOSPHOINOSIIDE3KINASEPHENYLMETHYLSULFONYLFLUORIDEPHOSPHATASEANDTENSINHOMOLOGUEDELETED∞CB代M的SⅡ鹼10PROTEINTYROSINEPHOSPHATASESPROTEINTYROSINEKINASESREVERSETRANSCRIPTIONPCRSODIUMDODECYLSULPHATETRIS／BORATE／EDTAELECTROPHOMSISBUTIEFN，N，N’，NTETRAMETHYLETHYLENEDIAMINE5一BROMO4一CHLORO3INDOLYLBDGALACTOSIDE中文全稱腺病毒堿基對人類巨細胞病毒細胞病變效應二氨基聯(lián)苯胺二甲基亞砜胎牛血清促細胞分裂素激活的蛋白激酶感染復數(shù)四甲基偶氮唑光密度聚丙烯酰胺凝膠電泳聚合酶鏈式反應三磷脂酰肌醇激酶苯甲磺酰氟與張力蛋白同源在LO號染色體缺失的磷酸酶基因蛋白酪氨酸磷酸酶蛋白酪氨酸激酶反轉(zhuǎn)錄PCR十二烷基硫酸鈉“IRIS／硼酸FEDTA電泳緩沖液N，N，N’，N’四甲基乙二胺5溴4氯3一吲哚一BD半乳糖苷

簡介：分類號學號學號D201178375學校代碼學校代碼10487密級密級博士學位論文乙醛脫氫酶乙醛脫氫酶1用于乳腺癌干細胞的檢用于乳腺癌干細胞的檢測及其生物學特性分析測及其生物學特性分析學位申請人學位申請人邵軍學科專業(yè)學科專業(yè)外科學（整形外科外科學（整形外科）指導教師指導教師吳毅平吳毅平教授教授答辯日期答辯日期2014年5月獨創(chuàng)性聲明獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學位論文是我個人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除文中已經(jīng)標明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。對本文的研究做出貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔。學位論文作者簽名日期年月日學位論文版權(quán)使用授權(quán)書學位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學位論文作者完全了解學校有關(guān)保留、使用學位論文的規(guī)定，即學校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)華中科技大學可以將本學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存和匯編本學位論文。保密□，在年解密后適用本授權(quán)書。不保密□。（請在以上方框內(nèi)打“√”）學位論文作者簽名指導教師簽名日期年月日日期年月日本論文屬于

簡介：樹突狀細胞DC作為機體重要的一種專職抗原遞呈細胞APC，能有效活化初始T細胞。NK細胞可通過其表面NKG2D受體結(jié)合表達于DC表面的NKG2D配體。NKDC之間的對話不僅影響天然免疫的功能，對獲得性免疫的形成、發(fā)展及結(jié)果有深遠的影響。為研究DC持續(xù)表達NKG2D配體對NK細胞免疫功能的影響，課題組前期制備了PCD86∶RAE1Ε轉(zhuǎn)基因小鼠，并完成轉(zhuǎn)基因小鼠的篩選鑒定與免疫功能的初步分析，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)NK細胞表面NKG2D下調(diào)、免疫功能低下的同時，CD4T細胞表面NKG2D表達上調(diào)。本研究擬進一步探討轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)NK細胞表面NKG2D下調(diào)的機制，并對轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)異常增多的CD4NKG2DT細胞亞群的功能及其表型特征進行深入研究。研究內(nèi)容分為2部分1PCD86∶RAE1Ε轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)NKG2D介導的NK細胞功能分析目的觀察PCD86∶RAE1Ε轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)NKG2D介導的免疫功能變化，探討體內(nèi)NK細胞NKG2D表達下調(diào)的機制。方法首先利用免疫熒光技術(shù)檢測轉(zhuǎn)基因小鼠的肝、腎、胸腺、肺、腸等組織中IAIE細胞表達RAE1Ε的情況，基于流式細胞術(shù)分析轉(zhuǎn)基因小鼠脾臟內(nèi)各免疫細胞表面RAE1Ε的表達。其次分析轉(zhuǎn)基因小鼠脾臟NK細胞的頻率及其NKG2D表達的情況，利用CD107A標記法檢測NK細胞對BAF3、BAF3RAE細胞的殺傷活性并體內(nèi)觀察轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)B16BL6MICA、B16BL6細胞生長的情況，右旋葡聚糖硫酸鈉DSS誘導腸炎發(fā)病的情況。另外，體外將轉(zhuǎn)基因小鼠DC細胞、血清分別與正常小鼠NK細胞共培養(yǎng)，觀察NK細胞表面NKG2D表達的變化。最后檢測轉(zhuǎn)基因小鼠CD4T、CD4NKG2DT細胞的頻率，觀察CD4NKG2DT細胞膜表面是否表達TGFΒ，并將CD4NKG2DT細胞與正常小鼠NK細胞共培養(yǎng)，檢測NK細胞NKG2D的表達。結(jié)果轉(zhuǎn)基因小鼠胸腺、腸道組織、肝臟內(nèi)檢測到IAIE與RAE1Ε共表達的細胞，脾臟CD11C、CD11B、CD19、GR1細胞上調(diào)RAE1Ε的表達，而NK11、CD3細胞無RAE1Ε的表達。與對照小鼠相比，轉(zhuǎn)基因小鼠脾臟NK細胞的頻率無明顯變化，但NKG2D表達下調(diào)至中等程度水平，NK細胞殺傷BAF3RAE細胞的活性下降，而殺傷BAF3細胞的能力無明顯變化。轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)B16MICA細胞的生長速度快于對照小鼠，而B16細胞的生長速度在2種小鼠間無明顯區(qū)別。DSS處理的轉(zhuǎn)基因小鼠延緩了腸炎的發(fā)病。轉(zhuǎn)基因小鼠來源的DC細胞體外刺激NK細胞5天后，上調(diào)NK細胞功能，而對NKG2D的表達無明顯影響。轉(zhuǎn)基因小鼠來源的血清對NK細胞表達NKG2D無影響。轉(zhuǎn)基因小鼠脾臟CD4T細胞頻率無明顯變化，而CD4NKG2DT細胞的頻率明顯上調(diào)。CD4NKG2DT細胞膜表面表達TGFΒ，與NK細胞共培養(yǎng)后下調(diào)NKG2D的表達。結(jié)論PCD86∶RAE1Ε轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)出現(xiàn)異常增多的CD4NKG2DT細胞，其分泌TGFΒ介導NK細胞下調(diào)表達NKG2D，并下調(diào)NKG2D介導的免疫功能。2PCD86∶RAE1Ε轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)CD4NKG2DT細胞的生物學特性研究目的深入分析CD4NKG2DT細胞的效應功能及表型特點，探討CD4NKG2DT細胞體外和體內(nèi)的誘生機制，并初步鑒別CD4NKG2DT細胞與經(jīng)典調(diào)節(jié)型T細胞TREG、TH17細胞的生物學特點。方法首先觀察正常小鼠CD4T細胞過繼輸入至小鼠體內(nèi)，其細胞表面NKG2D表達的變化。其次，通過胞內(nèi)細胞因子法流式細胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)基因小鼠、CT26細胞荷瘤小鼠、對照小鼠體內(nèi)CD4NKG2DT細胞分泌IL10、TGFΒ、FASL、IFNΓ的情況并將CD4NKG2DT細胞與CD4NKG2DT細胞、CD8T細胞共培養(yǎng)，觀察其抑制效應性T細胞增殖的情況觀察CD4NKG2DT細胞胞漿內(nèi)顆粒酶B、穿孔素的表達，及其殺傷靶細胞活性。另外，檢測CD4NKG2DT細胞表面CD44、CD62L的表達分析該細胞的活化狀態(tài)，檢測其表面CD69、CD127、CD25、IAIE、NKG2DL、CD28、CD152的表達?；隗w外細胞實驗，觀察不同刺激劑誘導CD4T細胞表面NKG2D的表達，并觀察不同刺激劑對CD4NKG2DT細胞分裂的影響基于小鼠體內(nèi)B16MICA、B16細胞荷瘤實驗，體內(nèi)觀察腫瘤細胞表面MICA的表達對CD4NKG2DT細胞的影響。最后檢測CD4NKG2DT細胞表達FOXP3、CD223、CD39，分泌IL17A和RΓT的轉(zhuǎn)錄情況，以與TREG和TH17細胞相鑒別。結(jié)果正常小鼠CD4T細胞輸入轉(zhuǎn)基因小鼠后，明顯上調(diào)了NKG2D的表達。轉(zhuǎn)基因小鼠、CT26荷瘤小鼠體內(nèi)的CD4NKG2DT細胞表達FASL、高分泌TGFΒ、IL10，體外可抑制CD4NKG2DT細胞和CD8T細胞增殖，胞漿內(nèi)無顆粒酶、穿孔素分泌，無細胞毒活性，低分泌IFNΓ。CD4NKG2DT細胞以效應記憶型細胞為主，高表達CD69、CD25、IAIE、NKG2DL等活化分子。NKG2D在CD4T細胞的誘導表達主要與TCRCD3信號及NKG2DL的持續(xù)刺激有關(guān)，MICA陽性腫瘤細胞荷瘤小鼠體內(nèi)CD4NKG2DT細胞的頻率明顯高于MICA陰性腫瘤細胞荷瘤小鼠。CD4NKG2DT細胞胞漿內(nèi)無FOXP3轉(zhuǎn)錄，細胞表面無CD223表達，高水平表達CD39分子。另外，CD4NKG2DT細胞可中等程度分泌IL17A，胞漿內(nèi)低水平轉(zhuǎn)錄核因子RΓT。結(jié)論PCD86∶RAE1Ε轉(zhuǎn)基因小鼠、CT26荷瘤小鼠體內(nèi)均出現(xiàn)一群CD4NKG2DT細胞，該T細胞亞群主要分泌IL10、TGFΒ和SFASL，發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能。CD4NKG2DT細胞是不同于TREG細胞的一種調(diào)節(jié)CD4T細胞亞群。MICA陽性腫瘤個體內(nèi)誘生的CD4NKG2DT細胞可能參與了腫瘤免疫逃逸過程。

簡介：中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院碩士學位論文人非小細胞肺癌吉西他濱耐藥細胞系的建立及其生物學特性研究姓名王偉霞申請學位級別碩士專業(yè)腫瘤學指導教師劉曉晴20060530軍事醫(yī)學科學院碩士學位論文人非小細胞肺癌吉西他濱耐藥細胞系的建立及其生物學特性研究摘要目的選擇對非小細胞肺癌一線化療藥物吉西他濱敏感的人非小細胞肺癌細胞系，以吉西他濱為誘導藥物，初步探討不同誘導方法對人非小細胞肺癌吉西他濱耐藥細胞系建立的影響、人TH細胞肺癌吉西他濱耐藥細胞系的生物學特性以及人非小細胞肺癌吉西他濱耐藥細胞系敏感藥物對其的作用。方法以目前常用的兩種誘導方法“高濃度間歇誘導”和“藥物濃度遞增誘導”為依據(jù)，模仿臨床用藥方式，設計了“吉西他濱臨床血漿峰濃度間歇誘導”、“吉西他濱2／3臨床血漿峰濃度間歇誘導”、“吉西他濱臨床血漿峰濃度沖擊與逐步增加劑量相結(jié)合誘導”和“吉西他濱2／3臨床血漿峰濃度沖擊與逐步增加劑量相結(jié)合誘導”4種誘導方法；根據(jù)MTT法檢測結(jié)果，從不同病理類型人非小細胞肺癌細胞系中篩選出吉西他濱敏感細胞系人肺腺癌細胞系A549和人肺大細胞癌細胞系NCIH460，以非小細胞肺癌的一線化療藥物吉西他濱為誘導藥物，采用如上所述4種方法進行誘導，在誘導的不同時問段觀察其形態(tài)學特征、耐藥指數(shù)、耐藥譜、生長曲線及倍增時間、細胞周期和DNA含量等指標，并對結(jié)果進行分析，初步判定4種誘導方法對人非小細胞肺癌吉西他濱耐藥細胞系建立的影響；在此過程中，還檢測了其非小細胞肺癌相關(guān)腫瘤標志物的表達情況，并分別從DNA、MRNA和蛋白水平研究其生物學特性；最后，從人TH細胞肺癌吉西他濱耐藥細胞系的耐藥譜中選擇敏感藥物初步研究其對人非小細胞肺癌吉西他濱耐藥細胞系生物學特性的作用。結(jié)果成功建立了人TH細胞肺癌吉西他濱耐藥細胞系A549／GEM包括A5491一L／GEM、A54912／GEM、A54921／GEM和H46THZ／GEM和H460／GEM包括H46012／GEM、H46FFZDGEM和H46022／GEM，其耐藥指數(shù)依次為38277、7263、115297、25679、1644、129783、8695。倒置光學顯微鏡下可見A549細胞呈梭形，大小一致；NCLH460細胞呈多邊形，大小一致；而產(chǎn)生耐藥性的細胞形態(tài)各異，大小不一，且體積明顯增大，透光性減弱。進一步研究發(fā)現(xiàn)，耐藥細胞系均產(chǎn)生了不同范圍、不同程度的多藥耐藥性，其生物學特性差一1

簡介：分類號密級國際十進分類號（UDC）第四軍醫(yī)大學學位論文凋亡抑制基因凋亡抑制基因CFLIP的RNA干擾對骨肉瘤干擾對骨肉瘤細胞株細胞株MG63生物學活性的影響生物學活性的影響（題名和副題名）張小平（作者姓名）指導教師姓名周勇教授（主任醫(yī)師）指導教師單位第四軍醫(yī)大學唐都醫(yī)院骨科申請學位級別碩士專業(yè)名稱外科學（骨外）論文提交日期201104答辯日期201105論文起止時間2008年10月至2011年04月學位授予單位第四軍醫(yī)大學凋亡抑制基因凋亡抑制基因CFLIP的RNA干擾對骨肉瘤干擾對骨肉瘤細胞株細胞株MG63生物學活性的影響生物學活性的影響研究生張小平學科專業(yè)外科學（骨外）所在單位第四軍醫(yī)大學唐都醫(yī)院骨科導師周勇教授（主任醫(yī)師）輔導教師楊彤濤副教授（副主任醫(yī)師）資助基金項目資助基金項目自選課題關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞骨肉瘤CFLIPRNA干擾增殖凋亡中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學二O一一年四月

簡介：目的神經(jīng)干細胞移植治療腸神經(jīng)元缺陷性疾病是一種潛在的、具有臨床應用前景的根治方法腸神經(jīng)干細胞ENTERICNEURALSTEMCELLSENSCS可能是合適的移植干細胞源本研究從胎大鼠消化道分離培養(yǎng)神經(jīng)干細胞并與中樞神經(jīng)系統(tǒng)來源的神經(jīng)干細胞CENTRALNERVOUSSYSTEMDERIVEDNEURALSTEMCEILSCNSNSCS進行增殖和分化特性比較研究為開展進一步腸神經(jīng)干細胞的移植應用提供依據(jù)方法1采用改良的ENSCS培養(yǎng)液以反復傳代法從胚胎20天SD大鼠提取神經(jīng)干細胞2進行NESTIN、TUI1、GFAP和SMA免疫熒光化學染色以確定分離培養(yǎng)的細胞是否為ENSCS3同時從同一胞胎鼠分離培養(yǎng)ENSCS和CNSNSCS分別比較兩者的神經(jīng)球生長情況4CCK8測定的兩種神經(jīng)干細胞增殖速度5流式細胞儀測定、比較兩種神經(jīng)干細胞TUJ1、GFAP、NESTIN、RET染色陽性細胞比例結(jié)果1培養(yǎng)第35天見細胞貼壁生長第67天貼壁細胞出現(xiàn)神經(jīng)球樣結(jié)構(gòu)第910天懸浮生長的腸神經(jīng)球形成2通過我們使用的ENSCS培養(yǎng)液及分離培養(yǎng)方法培養(yǎng)的細胞陽性表達NESTIN能分化成為表達TUJ1的神經(jīng)元和表達GFAP的神經(jīng)膠質(zhì)細胞以及表達SMA的平滑肌細胞確認為ENSCS3ENSCS早期呈貼壁生長神經(jīng)球生長速度慢于CNSNSCS但神經(jīng)球表面常有長的突起并相互連接成網(wǎng)絡狀4兩種神經(jīng)干細胞傳代培養(yǎng)第三天CCK8測定ENSCS的細胞增殖速度要慢于CNSNSCSP0056流式細胞儀測定兩種干細胞GFAP陽性細胞比例分別為217﹪和225﹪P0057流式細胞儀測定兩種干細胞NESTIN陽性細胞比例分別為108﹪和108﹪P0058流式細胞儀測定兩種干細胞RET陽性細胞比例分別為14﹪和70﹪P005結(jié)論1通過我們使用的ENSCS培養(yǎng)液及分離培養(yǎng)方法能夠培養(yǎng)出腸神經(jīng)干細胞2培養(yǎng)的細胞陽性表達NESTIN能分化為表達TUI1的神經(jīng)元、表達GFAP的神經(jīng)膠質(zhì)細胞和表達SMA陽性的的平滑肌細胞確認為腸神經(jīng)干細胞3ENSCS細胞增殖速度慢于CNSNSCS4ENSCS分化為神經(jīng)元的比例與CNSNSCS類似5ENSCS分化為神經(jīng)膠質(zhì)細胞的比例與CNSNSCS類似6ENSCS中表達RET陽性的細胞比例要低于CNSNSCS

簡介：分類號密級UDC編號學位論文香煙對人皮脂腺細胞生物學活性影響及其機制的研究STUDYONTHEEFFECTSOFCIGARETTESMOKEONBIOLOGYOFHUMANSEBOCYTESANDITSMECHANISMS指導教師姓名鞠強、宋寧靜主任醫(yī)師安徽醫(yī)科大學上海皮膚病臨床學院申請學位級別碩士專業(yè)名稱皮膚病與性病學提交論文日期20140313論文答辯日期20140522學位授予單位和日期安徽醫(yī)科大學答辯委員會主席張學軍評閱人曾抗、柏冰雪2014年5月

簡介：目的免疫組織化學法檢測病理性瘢痕和周圍正常皮膚組織中成纖維細胞CD90表達情況；采用組織塊法原代培養(yǎng)建立病理性瘢痕成纖維細胞模型；使用免疫細胞化學法、免疫熒光雙標記法結(jié)合激光掃描共聚焦顯微鏡，檢測體外培養(yǎng)的病理性瘢痕和正常皮膚成纖維細胞中CD90表達情況，并分析CD90表達和成纖維細胞增殖、合成、收縮等功能的相關(guān)性。方法1取手術(shù)切除的瘢痕疙瘩4例、增生性瘢痕12例、正常皮膚瘢痕邊緣16例標本，組織切片HE染色進一步證實臨床診斷后，分為瘢痕疙瘩組、瘢痕疙瘩周圍正常皮膚組、增生性瘢痕組、增生性瘢痕周圍正常皮膚組。2免疫組織化學SABC法檢測不同組別中成纖維細胞的CD90表達情況。3每組標本中選取特異性較強的組織塊各三例，原代培養(yǎng)這四種不同組織來源的成纖維細胞，通過觀察細胞形態(tài)和增殖周期，檢測體外培養(yǎng)的三種成纖維細胞生長活性差異。4經(jīng)過3次傳代、自然純化后得到性質(zhì)穩(wěn)定的成纖維細胞，凍存后復蘇傳13代，制成細胞爬片，免疫細胞化學SABC法染色檢測CD90的表達情況。5間接法免疫熒光雙重標記CD90和Ⅰ型膠原蛋白、CD90和KI67、CD90和ΑSMA每株細胞，激光共聚焦顯微鏡下觀測細胞并攝像后，通過計算每系成纖維細胞CD90、Ⅰ型膠原蛋白、ΑSMA的熒光值和KI67陽性細胞百分比，檢測成纖維細胞中四種蛋白的表達情況。6統(tǒng)計分析CD90表達與其他3種蛋白表達的相關(guān)性。7共聚焦多通道、多層次掃描單個成纖維細胞，分析CD90和ΑSMA表達的關(guān)系。結(jié)果1免疫組織化學染色顯示4例瘢痕疙瘩組織及其周圍正常皮膚中未發(fā)現(xiàn)CD90陽性成纖維細胞，而12例增生性瘢痕組織中7例有較多肥大的CD90陽性成纖維細胞，增生性瘢痕周圍正常皮膚中也有少量體積較小的CD90陽性細胞。2組織塊法原代培養(yǎng)建立了性狀穩(wěn)定的病理性瘢痕成纖維細胞模型。3免疫細胞化學染色顯示體外培養(yǎng)不同組織來源的細胞株均表達CD90。4免疫熒光雙重標記結(jié)合共聚焦掃描熒光定量發(fā)現(xiàn)增生性瘢痕來源成纖維細胞的CD90表達強于正常皮膚的P005。5統(tǒng)計學分析未發(fā)現(xiàn)體外培養(yǎng)的各組成纖維細胞CD90表達和ΑSMA、Ⅰ型膠原蛋白、KI67具有相關(guān)性。6單細胞共聚焦掃描發(fā)現(xiàn)CD90和ΑSMA具有共區(qū)域表達和表達趨勢較一致的特點。結(jié)論1增生性瘢痕中，CD90表達陽性的成纖維細胞可能是瘢痕增生的特異表型。2組織塊法原代培養(yǎng)可以建立病理性瘢痕成纖維細胞的體外模型。3增生性瘢痕來源的成纖維細胞存在CD90多量表達的特異表型。4單個瘢痕成纖維細胞CD90和ΑSMA有共區(qū)域表達的特點和一致的表達趨勢，二者可能有一定的協(xié)同關(guān)系。

簡介：南昌大學醫(yī)學院碩士學位論文野生型XPD轉(zhuǎn)染對膽管癌細胞生物學行為影響姓名王振杰申請學位級別碩士專業(yè)內(nèi)科學指導教師朱水山20100501摘要結(jié)論野生型XPD基因可以抑制膽管癌細胞的生長，XPD基因可抑制CYCLINDL、CMYC基因的表達，增2HP53基因表達。關(guān)鍵詞膽管癌，QBC939細胞，XPD，CMYC，CYCLINDL，P53，細胞周期111

簡介：背景下腰痛LOWBACKPAINLBP是臨床常見疾病是導致勞動力喪失的主要原因之一現(xiàn)在一致認為椎間盤退變性疾病DEGENERATIVEDISCDISEASEDDD是引起LBP最常見的原因。有報道發(fā)現(xiàn)80％的人一生當中都曾發(fā)生過LBP如此高的發(fā)病率給國家和社會帶來了嚴重的經(jīng)濟損失。目前治療DDD的方法包括保守治療和手術(shù)治療。保守治療屬對癥治療以減輕和緩解疼痛為目的不能解決椎間盤INTERVERTEBRALDISCIVD退變導致的生物學喪失問題因此并不能從根本上解決疼痛的根源。手術(shù)治療主要包括髓核摘除術(shù)和脊柱融合術(shù)。手術(shù)治療旨在解除突出的椎間盤組織的機械壓迫作用從而達到解除疼痛的目的但其也因未能恢復IVD的生物學性能遠期效果并不好且常因內(nèi)固定的使用而加速相鄰節(jié)段椎間盤退變從而發(fā)生新的問題。隨著科學技術(shù)的日新月異特別是近年來逐漸出現(xiàn)了多種IVD移植和人工椎間盤置換技術(shù)這些技術(shù)一定程序上改善了臨床治療的效果但這些技術(shù)也沒有從根本上解決或者逆轉(zhuǎn)IVD的生物學功能仍然存在許多并發(fā)癥和缺陷?，F(xiàn)在認為理想的治療DDD的方法是既能緩解疼痛癥狀又能恢復IVD的結(jié)構(gòu)和生理功能遠期效果好復發(fā)率低。隨著基礎醫(yī)學特別是干細胞研究的迅速發(fā)展基于干細胞的治療手段已成為治療DDD最有希望前途的手段之一。近年來應用組織工程技術(shù)對退變椎間盤進行再生和修復的研究取得了一些成績尋求以提高所構(gòu)建的組織工程椎間盤的生物學活性為目的的新型種子細胞來源成為一項重要的任務。當前多項研究證實人退變纖維環(huán)、髓核組織中存在具有多向分化潛能的干細胞。此外在我們的前期工作中課題組從人退變軟骨終板中亦分離出類似于MSC的干細胞這些細胞經(jīng)誘導可以向骨、軟骨、脂、肌方向分化且體外實驗結(jié)果顯示出比BMMSCS更強的成軟骨能力。本研究旨在前期研究的基礎上從人退變椎間盤中分離、擴增纖維環(huán)細胞、髓核細胞、軟骨終板細胞經(jīng)瓊脂糖懸浮培養(yǎng)法篩選后并探討纖維連接蛋白篩選的效能所獲取的干細胞克隆與來自同一個體的BMMSCS進行初步的細胞生物學特性比較作為種子細胞分別構(gòu)建組織工程髓核進一步比較上述四種干細胞在動物體內(nèi)的髓核再生和椎間盤的修復能力。目的通過體內(nèi)、外實驗對NPSCS、AFSCS、CESCS與BMMSCS的生物學特性進行檢測與比較初步探討四種干細胞在細胞形態(tài)、增殖活性、表面標記物和體外向三系分化的能力以及作為組織工程種子細胞在組織工程應用上的生物學特性差異以期尋找一種新的、可應用于組織工程學的種子細胞為組織工程椎間盤的構(gòu)建甚至臨床的應用治療提供良好的種子細胞來源。方法從因患腰椎間盤退變性疾病行椎間盤摘除植骨融合術(shù)中收集符合納入標準的標本。將手術(shù)中最先切除出來的AF組織經(jīng)副教授以上職稱經(jīng)驗豐富的術(shù)者確認后收入AF標本盒隨后兩次切除組織予以舍棄其后切除的標本經(jīng)術(shù)者確認為NP時裝NP標本盒刮除的CEP裝入CEP盒植骨前取髂骨時接5ML骨髓以上標本再在解剖顯微鏡下清理異物雜質(zhì)如韌帶、肌肉及脂肪等再次分離AF、NP及CEP運用機械酶消化法獲取AF細胞、NP細胞和CEP細胞。BMMSCS運用PERCOLL液梯度分離法獲取。獲得的IVD來源的三種細胞經(jīng)體外擴增至第2代時第2代細胞經(jīng)瓊脂糖懸浮培養(yǎng)法篩選并初步探討FIBONECTIN差別粘附法的篩選效果挑選取單細胞形成的克隆進行體外擴增擴增后的細胞進行流式細胞術(shù)檢測干細胞標志物、多向分化能力進行干細胞的鑒定。同樣經(jīng)誘導向骨、軟骨及脂三系分化的不同干細胞經(jīng)RTPCR及組織學檢測分析尋找不同干細胞向不同細胞系分化能力的差異性。將不同干細胞復合藻酸鹽體外構(gòu)建組織工程髓核培養(yǎng)1、7、14及28天后進行支架細胞增殖檢測、DNA和SGAG含量檢測最后行SEM檢測尋找差異性。另外所獲細胞經(jīng)CFDASE熒光染料標記后植入纖維環(huán)穿刺抽髓核抽吸法制造的椎間盤退變動物模型體內(nèi)于術(shù)后第1、3及6月后進行MRI和X線檢測評估IVD的退變情況并在第6月處死動物進行目標椎間盤的組織學檢測評估。鑒于在前兩部分實驗中發(fā)現(xiàn)四種不同干細胞中CESCS具有最強的體外成骨及成軟骨能力復合藻酸鹽構(gòu)建的組織工程髓核也具有良好的生物學性能。此外已有大量研究發(fā)現(xiàn)BMMSCS具有良好的體內(nèi)成骨效應常常作為種子細胞來探討用于橫突間植骨融合的應用研究并顯示出了良好的應用前景。因此我們特將CESCS與BMMSCS一起復合多孔羥基磷灰石植入新西蘭大白兔兩側(cè)橫突間術(shù)后2月時間內(nèi)進行X線、三維CT及MICROCT檢測及組織學評估探討兩種不同干細胞間的成骨效應差異分析和評估橫突間融合的融合效率差異。數(shù)據(jù)應用SPSS130軟件作統(tǒng)計學處理定量結(jié)果采用配對T檢驗、單因素方差分析和重復測量的單因素方差分析進行統(tǒng)計分析P結(jié)果1來自同一個體的AFSCS、NPSCS、CESCS與BMMSCS形態(tài)上類似呈成纖維細胞樣外觀但仍存在細小差別AFSCS最細長BMMSCS最寬大而CESCS尺寸最短NP居中四種干祖的體外增殖能力沒有顯著差異在體外實驗觀察中經(jīng)PCR及半定量分析CESCS成骨和成軟骨能力最強AFSCS和BMMSCS居中兩者沒有顯著差異而NPSCS最弱BMMSCS成脂能力最強NPSCS次之CESCS和AFSCS最弱流式細胞術(shù)結(jié)果表明AFSCS和CESCS的CD105表面標志物均值呈中強表達低于95而NPSCS略低于95四組干細胞的其它標志物的表達滿足ISCT對間充質(zhì)干細胞的定義標準四種干細胞體外構(gòu)建的組織工程髓核培養(yǎng)結(jié)果表明CESCS與BMMSCS組中合成和分泌的SGAG與DNA含量最高NPSCS次之AFSCS最弱組織工程髓核中的細胞增殖無顯著差異組織工程髓核的SEM結(jié)果表明各干細胞皆與支架粘附較好在28天后能分泌大量的ECM其中CESCS最多BMMSCS次之NPSCS居中AFSCS最弱。2AFSCS、NPSCS、CESCS與BMMSCS復合藻酸鹽植入椎間盤退變的動物模型體內(nèi)通過術(shù)后的檢測分析CESCS藻酸鹽復合物相對其余三組細胞具有最強的髓核再生和椎間盤修復能力BMMSCS藻酸鹽和NPSCS藻酸鹽居中而AFSCS藻酸鹽最弱。3CESCS與BMMSCS與HA復合進行兔腰椎橫突間植骨對比中兩組干細胞復合HA皆能達到橫突融合增強脊柱的穩(wěn)定性CESCS相對BMMSCS具有更強的體內(nèi)成骨能力多孔羥基磷灰石在應用于腰椎橫突間植骨融合實驗時抗折性較差需要加以改進以適應一定的抗折性要求。結(jié)論1體外比較實驗中CESCS具有最強的成骨和成軟骨能力AF和BMMSCS居中NPSC最弱。2CESCS顯示了用于構(gòu)建組織工程髓核的優(yōu)秀的生物學特性在體內(nèi)或體外都可以作為一種具有優(yōu)越性能的種子細胞應用于髓核組織工程領(lǐng)域發(fā)揮干細胞的潛能。3初步實驗結(jié)果表明相比較BMMSCSCESCS具有更強的體內(nèi)成骨能力。此外CESCS能夠作為一種優(yōu)秀的種子細胞用于腰椎橫突間融合通過提高融合率和增強成骨效應達到增加脊柱穩(wěn)定性的作用。

簡介：點擊查看更多人膝骨關(guān)節(jié)炎患者關(guān)節(jié)液中納米細菌檢測及其對軟骨細胞生物學形狀的影響和機制探討.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：粘液表皮樣癌是口腔中常見的涎腺惡性腫瘤占涎腺惡性腫瘤30﹪左右而且區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高低分化型粘液表皮樣癌的復發(fā)率高達60﹪78﹪患者5年生存率只有017﹪目前臨床上治療仍以手術(shù)治療、放射治療和化學治療為主因此有必要探索新的治療方法通過補充或替代體內(nèi)基因的缺陷或不足治療人類疾病的基因治療方法是腫瘤治療的新途徑是當今醫(yī)學研究中有前景的研究之一由于涎腺屬于外分泌腺位置表淺其解剖特點特別適于基因治療OHTA等在1996年首先披露在人染色體3P142區(qū)域利用外顯子捕捉法得到了一個CDNA序列長約11KB的新基因該基因?qū)儆贖ITHISTIDIRIAD組氨酸三聚體超家族編碼一個168KDA蛋白質(zhì)且含有脆性斷裂位點FRA3B故命名為脆性組氨酸三聚體FRAGILEHISTIDINETRIADFHIT粘液表皮樣癌細胞系MEC1是該教研室建立的永生化細胞系來源于腮腺粘液表皮樣癌低分化型組織具有高成瘤性和轉(zhuǎn)移性該研究圍繞FHIT基因在口腔惡性腫瘤細胞系MEC1細胞、舌癌TCA8113細胞及其衍生細胞系M3MSPTBTBT1細胞口底鱗癌HSC2細胞中的缺失及人正常FHIT基因轉(zhuǎn)染對人粘液表皮樣癌MEC1細胞體外生物學特性的影響及在裸鼠體內(nèi)成瘤的抑制作用研究結(jié)果表明脂質(zhì)體真核表達載體基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng)是安全、簡便、有效的基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng)將人正常FHIT基因轉(zhuǎn)染MEC1細胞在體外及動物體內(nèi)均能有效抑制MEC1細胞的增殖力并能提高MEC1細胞的分化程度脂質(zhì)體真核表達載體介導人正常FHIT基因為轉(zhuǎn)染粘液表皮樣癌的基因治療提供了理論和實驗依據(jù)

簡介：重慶醫(yī)科大學碩士學位論文成骨生長肽對成骨細胞在種植體表面相關(guān)生物學特性的研究姓名孟琳申請學位級別碩士專業(yè)口腔臨床醫(yī)學指導教師王璐20080501重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文結(jié)論在本實驗條件下，OGP在10叫0_LO’7MOL／L濃度范圍內(nèi)能促進鈦片表面成骨細胞的增殖和分化活動，并且有各自的最大有效濃度。關(guān)鍵詞成骨生長肽，成骨細胞，種植體3

簡介：點擊查看更多低強度脈沖式超聲波對三維培養(yǎng)兔關(guān)節(jié)軟骨細胞、基質(zhì)的生物學效應及相關(guān)基因研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：第三軍醫(yī)大學博士學位論文人外泌汗腺腺上皮細胞的生物學特性及體外重建汗腺的實驗研究姓名雷霞申請學位級別博士專業(yè)皮膚病與性病學指導教師伍津津20060501第三軍醫(yī)大學博士學位論文英文縮寫3DAACHAKT／PKBAPSATPBSACA2】ICKCLSMDABDMEMD’NECMEDL’AEGFEMAERKFBFBSFGFHEHGFPBS11CBAKSFMLN英文縮寫一覽表英文全稱THREEDIAMENSIONSABSORBANCEACETYLCHOLINECHLORIDEPROTEINKINASEBAMMONIUMPERSULFATEADENOSINETRIPHOSPHATEBOVINESERUMALBUMININTRACELLULARCALCIUMCONCENTRATIONCYTOKCRATINCONFOCALLASERSCANNINGMICROSCOPEDIMETHYLAMINOAZOBENZENEDULBECCO’SMODIFIEDEAGLE’SMEDIUMDEFINEDTRYPSOGENINHIBITOREXTRACELLULARMATRIXETHYLENEDINITRILOTCTRAACEFICACIDEPIDERMALGROWTHFACTOREPITHELIALMEMBRANEANTIGENEXTRACELLULARSIGNALREGULATEDKINASEFIBROBLASTFETALBOVINESERUMFIBROBLASTGROWTHFACTORHEMATOXYLINEOSINHEPATOCYTEGROWTHFACTORPHOSPHATEBUFFERSOLUTIONINHIBITORAOFRBKERATINOCYTESERUMFREEMEDIUMLAMININ中文全稱三維’吸收率氯化乙酰膽堿蛋白激酶B過硫酸銨三磷酸腺苷牛血清白蛋白胞內(nèi)鈣濃度細胞角蛋白一激光共聚焦顯微鏡二甲氨基偶氮苯DMEM培養(yǎng)基特定的胰酶抑制劑細胞外基質(zhì)乙二胺四乙酸表皮生長因子上皮膜抗原細胞外信號調(diào)節(jié)激酶成纖維細胞胎牛血清成纖維細胞生長因子蘇木素伊紅染色肝細胞生長因子磷酸鹽緩沖液NFRB抑制蛋白Q無血清角質(zhì)形成細胞培養(yǎng)基層粘連蛋白