簡介：點擊查看更多人破骨細胞形成抑制因子-骨保護素基因克隆、重組表達和初步的生物學活性研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：第四軍醫(yī)大學博士學位論文HPV16E6/E7對人角質(zhì)形成細胞的生物學特性及其生長調(diào)控因子的影響姓名馬翠玲申請學位級別博士專業(yè)皮膚病與性病學指導教師劉玉峰200051第四軍醫(yī)大學博士學位論文HPVL6E6／E7基因?qū)θ私琴|(zhì)形成細胞的生物學特性及其生長調(diào)控因子的影響摘要隊乳頭瘤病毒HPV是小DNA病毒，主要感染人的上皮細胞，可誘導皮膚粘膜的多種增生性損傷，目前至少鑒定出有70種以上HPV亞型，特定的HPV亞型易感染特定的解剖部位。約有35型HPV與生殖道感染有關且可通過性傳播。多數(shù)HPV感染的結果是慢性的良性增生，少數(shù)類型與生殖器惡性腫瘤有關，其中HPVL6型是與宮頸上皮內(nèi)腫瘤及鱗狀細胞癌相關的最常見類型。HPVL6在體外可以引起小鼠成纖維細胞系的惡性轉(zhuǎn)化及人角質(zhì)形成細胞的永生化，但永生化細胞并無裸鼠致瘤性。HPVE6／E7基因在病毒轉(zhuǎn)化過程中起重要作用，E6、E7可能通過分別與P53和PRB結合，改變其腫瘤抑制作用誘導細胞永生化，但是其它一些主要的細胞生長調(diào)節(jié)基因也是E6、E7作用的目標，HPVE6／E7引起細胞永生化的機理仍然不清楚。有報道永生化細胞的細胞周期蛋白表達異常，但是正常細胞向永生化或惡性轉(zhuǎn)化過程中，尤其是病毒感染早期細胞生長調(diào)節(jié)改變的研究較少。HPV體外轉(zhuǎn)染細胞為研究病毒和細胞基因之間的相互作用機理以及細胞的生長調(diào)節(jié)異常與癌變的關系方面提供了一個理想模型。／為了探討HPVL6E6／E7基因?qū)θ私琴|(zhì)形成細胞生長及其調(diào)控因子的影響，我們從“HPVL6E6／E7轉(zhuǎn)染人角質(zhì)形成細胞”、“轉(zhuǎn)染細胞的生物學特征觀察”和“HPVL6E6／E7對人角質(zhì)形成細胞生長及其調(diào)控因子的影響”等方面進行了實驗研究。倍果顯示、1．人角質(zhì)形成細胞感染表達HPVL6E6／E7重組逆轉(zhuǎn)錄病毒后，形成G418抗性克隆，通過傳代培養(yǎng)獲得多個能長期培養(yǎng)的角質(zhì)形成細胞，其中來自三個轉(zhuǎn)化克隆的細胞體外培養(yǎng)20代以上；2．HPVL6E6／E7轉(zhuǎn)染的人角質(zhì)形成細胞表達角蛋白、細胞間形成橋粒結構，證實其來源于表皮角質(zhì)形成細胞。經(jīng)細胞基因組SOUTHERN印跡分析證實E6／E7基因已整合至轉(zhuǎn)化的人角質(zhì)形成細胞中，核酸原位雜交、WESTERN印跡實驗和HPVL6E6／E7抗原間．2．

簡介：我們對人胎胰NIP的生物學特性做了深入分析在前人工作的基礎上對NIP的培養(yǎng)和體外誘導條件進行了摸索和改進并對由NIP分化產(chǎn)生的類Β細胞的生理功能及其對糖尿病模型動物的治療效果進行了評價我們首次發(fā)現(xiàn)NIP表達ABCG2明確了NIP具備干祖細胞特性首次觀察了NIP的體內(nèi)增殖和分化行為并發(fā)現(xiàn)NESTIN在胃腸腺等其它內(nèi)分泌前體細胞的表達和分布并對NESTIN與DNES譜系發(fā)生的可能關系提出了初步設想該研究是對成體干細胞理論和哺乳動物胰腺發(fā)生相關研究的有益補充為1型糖尿病的細胞替代治療提供了理論和實驗基礎有助于進一步理解中間絲蛋白與細胞狀態(tài)的密切關系并對深入探討DNES內(nèi)分泌細胞的譜系發(fā)生具有一定的參考價值

簡介：臍血已被證明是重要的造血干祖細胞來源深入研究臍血生物學特性、體外調(diào)控及機制對拓寬臍血造血干細胞移植的臨床應用范圍有極其重要的意義隨著新的細胞分化抗原不斷問世單克隆抗體技術和分選技術的不斷進步使尋找更好的造血干細胞表面標志成為可能該課題從不同的側面對以上內(nèi)容進行了初步研究第一部分臍血CD34細胞中端粒酶活性及其亞單位的表達和意義第二部分FLT3和CKIT在臍血CD34細胞中的表達及意義第三部分臍血CD34造血干祖細胞體外擴增實驗研究第四部分SCF、FL和TPO聯(lián)合抗凋亡機制研究第五部分臍血AC133造血細胞功能特性初步探討

簡介：江蘇大學碩士學位論文嗅黏膜神經(jīng)干細胞及嗅鞘細胞生物學特性的體外研究姓名王超申請學位級別碩士專業(yè)內(nèi)科學指導教師崔國興20100607江蘇大學碩士學位論文神經(jīng)干細胞培養(yǎng)基，貼壁細胞中出現(xiàn)大量的圓球形細胞，該細胞有聚集生長的特點。大約培養(yǎng)7天后出現(xiàn)半貼壁的神經(jīng)球，呈鳥巢狀。免疫熒光染色發(fā)現(xiàn)貼壁細胞中存在較多的NESTIN和CDL33染色陽性的圓形細胞，NESTIN主要分布于該細胞的細胞質(zhì)，CDL33主要分布于細胞膜，半貼壁的神經(jīng)球也陽性表達NESTIN和CDL33。2以2％瓊脂糖懸浮培養(yǎng)的神經(jīng)干細胞以神經(jīng)球的方式旺盛增殖，傳代后的神經(jīng)球形態(tài)規(guī)則，大小較均勻，界限明顯。免疫熒光染色和免疫印跡均證明懸浮培養(yǎng)的第4代神經(jīng)球經(jīng)6小時快速貼壁后，仍然陽性表達NESTIN和CDL33。3使用含細胞因子的培養(yǎng)液作用貼壁的神經(jīng)干細胞24小時后，部分細胞向四周發(fā)出細長的突起，突起之間相互交織成網(wǎng)。免疫熒光染色發(fā)現(xiàn)，這些多突起細胞的胞體和細長突起均含神經(jīng)絲和酪氨酸羥化酶，免疫印跡也證明了這一點。4．體外擴增經(jīng)過三次差速貼壁純化的嗅鞘細胞，可得到大量梭形雙極細胞，細胞排列規(guī)則，形態(tài)一致，呈魚群樣。免疫熒光染色顯示，第L代和第10代的嗅黏膜嗅鞘細胞均陽性表達GFAP、S100和P75NTR，且兩代細胞間無差異。5．第L代嗅黏膜嗅鞘細胞與第LO代嗅鞘細胞均能表達各種神經(jīng)營養(yǎng)素、神經(jīng)肽Y和血管內(nèi)皮生長因子，且各因子第1代的表達水平均高于第LO代。研究結論1．通過大鼠嗅黏膜神經(jīng)干細胞的體外分離與篩選實驗，我們從嗅黏膜中獲得了陽性表達神經(jīng)干細胞分子標志的半貼壁神經(jīng)球。這

簡介：目的骨形成蛋白具有誘導未分化間充質(zhì)細胞向成骨細胞、成軟骨細胞分化促進新骨形成的作用隨著研究的深入發(fā)現(xiàn)骨形成蛋白家族不僅具有誘導成骨功能還具有調(diào)控胚胎發(fā)生發(fā)育、營養(yǎng)神經(jīng)及調(diào)控某些腫瘤的發(fā)生與生長的作用由于其具有廣泛的生物學活性特別是在骨損傷治療等方面所顯示的良好應用前景人們將關注點集中在利用骨形成蛋白進行基因治療的研究中初步研究結果已顯示出了誘人前景本研究利用腺病毒感染種類廣泛不整合宿主細胞基因、無潛在的致突變性且較易獲得高滴度病毒、轉(zhuǎn)染效率高等特點以復制缺陷型腺病毒為載體構建了含人骨形成蛋白2基因HBMP2的重組腺病毒表達載體并轉(zhuǎn)染人胚肺成纖維細胞觀察成纖維細胞被重組腺病毒表達載體轉(zhuǎn)染后在成骨活性方面的影響為后續(xù)體內(nèi)實驗研究奠定基礎結論采用體外連接技術成功構建了含HBMP2基因的重組腺病毒表達載體且體外連接技術較傳統(tǒng)的同源重組方法簡便并避免了在同源重組過程中產(chǎn)生增殖性腺病毒的可能同時體外實驗見人胚肺成纖維細胞在轉(zhuǎn)染重組腺病毒后細胞形態(tài)發(fā)生改變、恢復了功能活動WESTERNBLOT、堿性磷酸酶染色及體外礦化均為陽性體外實驗證實在轉(zhuǎn)染含HBMP2基因的重組腺病毒表達載體后人胚肺成纖維細胞向成骨細胞表型轉(zhuǎn)變具有了骨形成的能力本實驗的成功完成為后續(xù)HBMP2基因治療的應用研究奠定了堅實的基礎

簡介：第二軍醫(yī)大學博士學位論文來源于人樹突狀細胞的新型癌基因樣小G蛋白RABJ的生物學功能研究姓名陳濤涌申請學位級別博士專業(yè)免疫學指導教師曹雪濤20040501第二軍醫(yī)大學博士學位論文新型癌基因樣小G蛋白RABJCDKNPCNEEGFPDGFVEGFEGFRPDGFRFCSTNFQPMAPSDAGSCFSV40U‘RTKCKIIDNAPKGFPRFPLPTGPMSFGMCSFLL一4SGPSESLSCYCLINDEPENDENTKINASENUCLEARPORECOMPLEXNUCLEARENVELOPEEPIDERMALGROWTHFACTORPLATELETDERIVEDGROWTHFACTORVASCULARENDOTHELIALGROWTHFACTOREGFRECEPTORPDGFRECEPTORFETALCALFSERUMTUMORNECROSISFACTORAPHORBOLMYRISTATEACETATEPHOSPHATIDYLSERINEDIACYLGLYCEROLSTEMCELJFACTORSIMIANVIRUS40LARGETANTIGENRECEPTORTYROSINEKINASECASIENKINASEIIDNADEPENDENTPROTEINKINASEGREENFLUORESCENCEPROTEINREDFLUORESCENCEPROTEINISOPROPYLBETADTHIOGAIACLOPYRANOSJDEPHENYLMETHYLSULFONYLFLUORIDEGRANULOCYTEMONOCYTECOLONYSTIMULATINGFACTORINTERLEUKIN4SPERMATOGONIAPRIMARYSPERMATOCYTEEARLYSPERMATIDSLATESPERMATIDS細胞周期蛋白依賴激酶核孔復合體核膜表皮生長因子血小板源生長因子血管內(nèi)皮細胞生長因子表皮生長因子受體血小板源生長因子受體胎牛血清腫瘤壞死因子A佛波酯磷脂酰絲氨酸二脂酰甘油干細胞因子猿猴病毒40大T抗原受體酪氨酸激酶酪蛋白激酶DNA依賴的蛋白激酶綠色熒光蛋白紅色熒光蛋白異丙基硫代一BD半乳糖苷苯甲基磺酰氟粒細胞單核細胞集落刺激因子白細胞介素4精原細胞初級精母細胞早期精子細胞晚期精子細胞2

簡介：河北醫(yī)科大學學位論文使用授權及知識產(chǎn)權歸屬承諾本學位論文在導師或指導小組的指導下，由本人獨立完成。本學位論文研究所獲的研究成果，其知識產(chǎn)權歸河北醫(yī)科大學所有。河北醫(yī)科大學有權對本學位論文進行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學位論文主要內(nèi)容相關的論文，第一署名單位為河北醫(yī)科大學，實驗材料、原始數(shù)據(jù)、申報的專利等知識產(chǎn)權均歸河北醫(yī)科大學所有。否則，承擔相應的法律責任。研究生簽字膏禾導師簽章圳簪級差易河北醫(yī)科大學研究生學位論文獨創(chuàng)聲明本論文是在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標注等內(nèi)容外，文中不包括其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，指導教師對此進行了審定。本論文由本人獨立撰寫，文責自負。研究生簽字衷泰煢參蠊加日ILILLLLILLIILL11111FLIILY1901620目錄中文摘要1英文摘要4研究論文瘦素、BDNF及其受體TRKB在人結直腸癌細胞中的表達與生物學意義前言8月IJ舌8材料與方法9結果14附圖16附表17討論23結論27參考文獻27綜述瘦素、BDNF腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子與人結直腸癌關系的研究進展31致謝J42個人簡歷43

簡介：為尋找人類皮膚研究合適的動物模型，科學家們研究了多種動物的皮膚，發(fā)現(xiàn)豬的皮膚在解剖、生理等方面與人類皮膚最為接近。但由于普通商品豬遺傳背景不清晰，個體差異大，生長速度快，不適于用作實驗動物。巴馬香豬是我國獨特的小型豬種之一，體型小，操作容易，遺傳穩(wěn)定，個體差異小，是一種理想的實驗動物。但其缺乏與人的比較醫(yī)學生物學系統(tǒng)基礎資料，制約了巴馬香豬在醫(yī)學生物學中的應用。無細胞真皮作為一種有效的臨床用生物材料，具有重要的臨床應用價值。但國內(nèi)目前僅有人無細胞真皮產(chǎn)品面世，且價格昂貴。隨著國家人體器官移植技術臨床應用管理暫行規(guī)定的正式實施，人組織器官的應用將面臨來源、倫理、法律等一系列問題，而且還具有傳染HIV、HBV等血液傳播性疾病的危險。因此，以標準化實驗用小型豬無細胞真皮替代人無細胞真皮具有良好的應用前景。為了推廣巴馬香豬在醫(yī)學生物學中的應用，評估巴馬香豬作為人皮膚模型動物在創(chuàng)傷修復領域的應用價值，同時為了開發(fā)巴馬香豬皮膚來源的異種移植生物材料，本課題從比較醫(yī)學的角度，對巴馬香豬與人皮膚對比進行了組織學結構、免疫組化反應特點、超微結構、皮膚膠原蛋白理化特性等的系統(tǒng)研究；同時，制備了巴馬香豬無細胞真皮，與人無細胞真皮對比進行了安全性有效性評價，以期利用巴馬香豬無細胞真皮替代人無細胞真皮而應用于創(chuàng)傷修復領域，為其產(chǎn)品研發(fā)形成基礎，同時也進一步比較巴馬香豬皮膚與人皮膚在應用特性方面的相似性。全文主要結果及結論如下1本課題對巴馬香豬皮膚的組織學結構、免疫組化反應特點、超微結構、膠原蛋白理化特性等進行了系統(tǒng)研究，發(fā)現(xiàn)巴馬香豬的皮膚結構除汗腺結構與人不同外，其它結構及其特點與人極為相似。其4月齡小型豬皮膚發(fā)育程度最接近于成人皮膚，各層厚度及結構都與成人皮膚相似。上述研究結果表明，巴馬香豬可作為研究人類皮膚的模型動物。巴馬香豬在皮膚厚度、分層、真表皮的高低起伏的連接方式、發(fā)達的淺表血管系統(tǒng)以及皮膚的超微結構都與人類皮膚相似；皮膚中所含細胞種類和成纖維細胞、血管內(nèi)皮朗格罕細胞、肥大細胞的密度也與人類皮膚相近；具有與人類Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原、層本課題受國家十五重點科技攻關項目資助，項目編號2004BA717B03粘連蛋白、纖維連接蛋白、中間絲相關蛋白相似的抗原決定簇，可與抗人血清發(fā)生交叉反應，且分布特點與人類皮膚相似；真皮中主要的胞外基質(zhì)構成成分Ⅰ型膠原的結構及理化特性也幾乎與人類Ⅰ型膠原相同。但巴馬香豬皮膚中的汗腺為頂泌汗腺，而人類皮膚中主要為外泌汗腺；另外，巴馬香豬皮膚中的色素細胞在身體的不同部位差異很大；巴馬香豬皮膚缺乏與抗人CD34、ICAM1、S100等抗體對應的抗原決定簇。2優(yōu)化了無細胞真皮的制備方法，制備了巴馬香豬無細胞真皮，對其與人無細胞真皮對比進行了生物學特性與安全性有效性評價研究。對巴馬香豬與人無細胞真皮對比進行了胞外基質(zhì)的種類和分布、微生物學檢測、致敏實驗、淋巴細胞增殖實驗、細胞毒性實驗、組織學相容性實驗、單純無細胞真皮移植實驗以及結合大鼠自體皮的復合移植實驗等實驗研究。實驗結果表明，巴馬香豬無細胞真皮與人無細胞真皮的形態(tài)結構、抗原性、生物相容性、血管化速度及動物實驗效果無顯著差異，顯示巴馬香豬無細胞真皮可望替代人無細胞真皮應用于創(chuàng)傷修復領域。經(jīng)025％胰酶4℃處理過夜，05％TRITONX100室溫振蕩處理12H制備而成的巴馬香豬無細胞真皮，具有如下特點成功去除了引起強烈免疫排斥反應的表皮和細胞成分，完整保留了基底膜，與抗原性有關的胞外基質(zhì)結蛋白和波形蛋白也得到有效的去除；保留了Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原、Ⅳ型膠原、纖維連接蛋白等與細胞粘附、生長相關的胞外基質(zhì)；具有與人無細胞真皮相似的無菌、無致敏反應、生物相容性好、抗原性低、血管化速度快等優(yōu)良的生物學特性；將其與大鼠自體刃厚皮復合植入大鼠創(chuàng)面后，巴馬香豬無細胞真皮與人無細胞真皮組的移植皮片存活率、創(chuàng)面收縮率相似，且與大鼠同種無細胞真皮組的移植皮片存活率和創(chuàng)面收縮率無明顯差異，未引發(fā)明顯的免疫排斥反應。表明巴馬香豬無細胞真皮可望替代人無細胞真皮應用于創(chuàng)傷修復領域。

簡介：中南大學碩士學位論文LRRC4IGC2結構域?qū)δX膠質(zhì)瘤U251細胞生物學功能和基因表達譜影響的初步研究姓名甘凱申請學位級別碩士專業(yè)病理與病理生理學指導教師李桂源20050601侵襲能力的影響，發(fā)現(xiàn)LRRC4野生型和LRRC4一IGC2缺失突變體均能明顯降低癌細胞的侵襲能力，說明IGC2結構域不是該基因影響癌細胞侵襲能力的結構基礎。通過與包含268個細胞因子及其受體基因的EDNA微陣列進行雜交實驗，發(fā)現(xiàn)了一些LRRC4及LRRC4．AIGC2基因過表達后上調(diào)和下調(diào)的細胞因子及其受體基因，并選擇部分重要基因進行RTPCR驗證。這些基因很多與神經(jīng)生長、發(fā)育、分化和營養(yǎng)相關，提示我們LRRC4基因可能參與了腦組織的生長和發(fā)育等。另外我們發(fā)現(xiàn)LRRC4的IGC2結構域可能參與了細胞信號通路WNTJNK通路，LRRC4基因很可能通過IGC2結構域參與JNK通路調(diào)控腫瘤細胞的極性分化。這些結果為我們以后的工作提供了重要的線索。關鍵詞LRRC4，IGC2，缺失突變體，CDNA微陣列

簡介：目的建立糖尿病老年鼠和健康老年鼠骨髓基質(zhì)干細胞MSCS在不同血糖微環(huán)境下分離和培養(yǎng)擴增的方法并研究MSCS在不同血糖微環(huán)境下的生物學特性為更好的利用MSCS作為種子細胞治療多種疾病提供實驗基礎方法通過密度梯度離心、貼壁篩選法分離培養(yǎng)SD老年鼠MSCS測定其接種貼壁率在倒置顯微鏡下連續(xù)觀察細胞的形態(tài)變化利用MTT法測定MSCS生長曲線臺盼蘭染色法測定其細胞活力并利用流式細胞術測定細胞周期和表面標記物結果貼壁率、生長曲線經(jīng)SPSS130統(tǒng)計分析均顯示NL、NH優(yōu)于DH、DLP005而NL優(yōu)于NHP005DL優(yōu)于DHP005細胞活力、細胞周期經(jīng)方差分析顯示NL、NH、DH、DL之間有明顯差異P001而細胞的形態(tài)及細胞表面標記物NL、NH、DH、DL均無明顯差異結論第1代P1及第3代P3指標整體顯示健康組生物學特性優(yōu)于糖尿病組而且低糖組優(yōu)于高糖組

簡介：CDAK細胞是抗CDMCAB和IL2活化的、具有較強細胞毒活性的免疫效應細胞常用于腫瘤的過繼免疫治療該研究中利用PLIL2SN逆轉(zhuǎn)錄病毒載體向CDAK細胞內(nèi)轉(zhuǎn)移入IL2基因轉(zhuǎn)入的IL2基因得到表達表達的IL2可彌補CDAK細胞對IL2的消耗和自分泌IL2的不足增強CDAK細胞的生物學功能CDB信號途徑是T細胞活化所需的協(xié)同刺激信號利用抗CDMCAB與CDAK細胞活化第一信號抗CDMCAB協(xié)同可增強CDAK細胞活化的潛能尤其增強CDCDT細胞的活化CD信號的活化可增強CDAK細胞轉(zhuǎn)導IL2基因的表達但在CD信號活化的基礎上導入的IL2基因?qū)DAK細胞的功能無明顯影響該實驗中對CDAK細胞的轉(zhuǎn)導及CD協(xié)同活化對其功能的研究為今后更好地應用CDAK細胞于過繼免疫治療打下了一定的基礎

簡介：分類號UDC辛卞科技大挈博士學位論文人CCLO基因?qū)Ψ伟┘毎飳W行為影響的研究申請人姓名指導教師學科專業(yè)研究方向論文起止時問鐘聲徐永健教授呼吸內(nèi)科肺癌2004，3，～20063同濟醫(yī)學院研究生部二OO六年四月華中科技大學同濟醫(yī)學院博士學位論文人CCL0基因?qū)Ψ伟┘毎飳W行為影響的研究中文摘要第一部分CCLO在非小細胞肺癌NSCLC中的表達及其與癌細胞凋亡的關系目的研究CCIO蛋白在非小細胞肺癌NSCLC中的表達并觀察其與癌細胞凋亡的關系。方法采用免疫組化技術檢測CCIO在43例NSCLC及20例肺良性疾病組織石蠟標本中的表達，并借助HPIAS一1000圖像系統(tǒng)對結果進行分析。應用TUNEL技術檢測其中的43例NSCLC癌細胞的凋亡并分析其與CCIO表達的相關性。結果CCIO在NSCLC中的表達為4651％20／43，明顯低于肺良性病變組織850％PO05；CCIO表達陽性肺癌組織細胞凋亡指數(shù)AI為5585士17822％，CCLO表達陰性肺癌組織細胞凋亡指數(shù)AI為28565士13990％，癌細胞凋亡指數(shù)AI與NSCLC中CCIO蛋白的表達有顯著相關性RS一002LL，PO05。結論。NSCLC中CCIO的表達下調(diào)，NSCLC細胞的凋亡的與CCIO的表達下調(diào)密切相關關鍵詞非小細胞肺癌CCIO；凋亡第二部分構建及鑒定人CCLO基因真核細胞表達載體

簡介：哈爾濱醫(yī)科大學碩士學位論文人肺腺癌ANIP973CDDP耐藥細胞系的建立及生物學特性分析姓名張長海申請學位級別碩士專業(yè)腫瘤學指導教師陳公琰20070501哈爾濱醫(yī)科大學碩士學位論文3ESTABLISHMENTOFAHUMANLUNGADENOCARCINOMADRUGRESISTANCECELLLINEANIP973CDDPANALYSISOFITSBIOLOGICALPROPERTIESABSTRACTOBJECTIVETOESTABLISHAHUMANLUNGADENOCARCINOMAMULTIDRUGRESISTANTCELLLINEANIP973CDDPTOSTUDYITSBIOLOGICACTERISTICSMETHODSTHEHUMANLUNGADENOCARCINOMAMULTIDRUGRESISTANTCELLLINEA973CDDPWASESTABLISHEDBYINDUCINGHUMANLUNGADENOCARCINOMACELLLINEANIP973WITHSTEPWISEINCREASINGCONCENTRATIONSOFCISPLATINWHICHUSEDTOBETHEFIRSTLINECHEMOTHERAPEUTICDRUGFLUNGCACERTHECELLGROWTHCURVETHEDOUBLINGTIMEWEREDETERMINEDBYCOUNTINGCHANGESINCELLULARMPHOLOGYULTRASTRUCTUREWEREOBSERVEDUNDERINVERTEDMICROSCOPESCANNINGELECTRONMICROSCOPERESPECTIVELYTHECELLCYCLESWEREDETERMINEDBYFLOWCYTOMETRYTHECHEMOSENSITIVITIESOFANIP973CDDPANIP973TOCISPLATINIRINOTECANGEMCITABINEDACARBAZINEETOPOSIDENAVELBINEPHARMUBICINISOFOSFAE5FLUOURACILWERETESTEDIC50MEASUREDBYMTTRESULTSTHEHUMANLUNGADENOCARCINOMAMULTIDRUGRESISTANTCELLLINEANIP973CDDPWASESTABLISHEDSUCCESSFULLYF24MONTHSITSBIOLOGICACTERISTICSWERE1THECELLMPHOUSOFA973CDDPCELLSWEREMEIRREGULARTHANA973CELLSTHEREWASSIGNIFICANTDIFFERENCEINULTRAMICROSTRUCTUREWHILEOBSERVEDBYTHEINVERTEDMICROSCOPESCANNINGELECTRONMICROSCOPE2THERATESOFCELLPROLIFERATIONOFANIP973CDDPANIP973CELLLINESWERENOSIGNIFICANTLYDIFFERENT3CELLCYCLEDISTRIBUTIONOFANIP973CDDPHADCHANGEDCOMPAREDWITHPARENTALCELLSFROMFLOWCYTOMETRYTHEPERCENTAGEOFCELLSING0G1PHASEDECREASEDTO5218WHILETHEPERCENTAGEOFCELLSINSPHASEINCREASEDTO2860THEPERCENTAGEOFANIP973ING0G1SPHASEWERE661137RESPECTIVELYP005THEREWASNOCHANGESING2MPHASEOFTHETWOCELLLINES4THE

簡介：目的和意義應用生物信息學及克隆表達的方法對乳酸桿菌表層粘附蛋白進行篩選和鑒定，并通過抗體封閉及競爭粘附的手段對目的蛋白的粘附作用作進一步的驗證。根據(jù)腸上皮細胞模型CACO2細胞在單獨使用致病性大腸桿菌EPEC感染，加用乳酸桿菌或粘附蛋白后的生物學功能改變的不同，包括單層細胞的完整性和通透性、緊密連接TIGHTJUNGTION，TJ蛋白、FACTIN、ERK、PERK的表達差異，闡述乳酸桿菌及粘附蛋白對腸上皮細胞緊密連接蛋白及其生物學功能的調(diào)控機制。研究方法1、運用生物信息學及克隆表達的方法鑒定和篩選乳酸桿菌表層粘附蛋白；2、通過同EPEC競爭粘附腸上皮細胞，結合抗體封閉的手段驗證目的蛋白的粘附作用；3、采用免疫熒光、WESTERNBLOT方法觀察EPEC、乳酸桿菌或粘附蛋白對腸上皮細胞緊密連接TJ相關蛋白CLAUDIN1蛋白、OCCLUDIN蛋白、JAM1蛋白、ZO1蛋白分布變化的影響；FITCPHALLOIDIN染色觀察細胞骨架FACTIN的表達變化；4、用MILLIPEERS電阻儀測定單層細胞跨膜電阻值TER的變化；用高效液相色譜法HPLC測定甘露醇溶液的透過率間接反映單層細胞的通透性；5、結合ERK表達水平的改變，分析乳酸桿菌對腸上皮TJ蛋白的調(diào)控機制6、所有數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標準差表示，P005提示差異有統(tǒng)計學意義，采用SPSS130版統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。結果1、通過乳酸桿菌同腸上皮黏蛋白的粘附特性，對乳酸桿菌表層粘附蛋白作篩選及鑒定，運用質(zhì)譜分析、分段表達克隆及WESTERNBLOT找到粘附蛋白整合膜蛋白IMP，其粘附域位置是IMP的第二段氨基酸序列的455755；2、通過抗體封閉，在同EPEC的競爭黏附實驗中進一步證實該段黏附蛋白對黏附有重要作用；2、堿性磷酸酶染色驗證了腸道上皮樣細胞CACO2具有明顯的細胞極性。免疫膠體金及電鏡觀察證實相鄰上皮細胞間的頂端存在緊密連接結構；3、EPEC感染可使相鄰CACO2細胞間TJ結構遭到破壞，TJ相關蛋白CLAUDIN1蛋白，OCCLUDIN蛋白，JAM1蛋白，ZO1蛋白的表達亦減少，細胞骨架受損，然而腸上皮細胞ERK的磷酸化水平隨緊密連接蛋白水平的降低而升高；而乳酸桿菌和表層粘附蛋白處理后可以減輕EPEC引起的TJ結構及相關蛋白的破壞，ERK的磷酸化水平卻降低明顯；4、EPEC感染CACO2細胞后，單層細胞的TER值降低和甘露醇的透過率隨時間延長而升高；而經(jīng)乳酸桿菌和表層粘附蛋白處理后，TER值恢復且甘露醇的透過率降低。結論植物乳酸桿菌CGMCCNO1258表層黏附蛋白為整合膜蛋白，且該蛋白的粘附區(qū)域位于其第二段氨基酸序列中。乳酸桿菌依賴于粘附蛋白可以同EPEC競爭粘附腸上皮細胞CACO2，進而可以抑制EPEC的感染后引起的腸道單層上皮完整性、細胞間緊密連接結構和細胞內(nèi)骨架的破壞，其具體調(diào)控機制和ERK途徑密切相關。