簡介:項目批準號31101022申請代碼C0709歸口管理部門收件日期國家自然科學基金國家自然科學基金資助項目結(jié)題報告資助項目結(jié)題報告資助類別青年科學基金項目亞類說明附注說明項目名稱CPK10基因調(diào)控擬南芥響應(yīng)干旱脅迫的分子機制研究負責人魏鳳菊電話03127528249電子郵件WEIFJ98GMAILCOM依托單位河北農(nóng)業(yè)大學聯(lián)系人張永升電話03127526131資助金額22(萬元)累計撥款220(萬元)執(zhí)行年限2012012014122015年01月16日填表日期國家自然科學基金委員會制(2012年)國家自然科學基金委員會制(2012年)NSFCREPORT2014VERSION1022799結(jié)題摘要結(jié)題摘要中文摘要對項目的完成情況及取得成果做簡單概述,1000字以內(nèi)中文摘要對項目的完成情況及取得成果做簡單概述,1000字以內(nèi)擬南芥CPK10參與了干旱脅迫過程中對氣孔運動的調(diào)節(jié),本課題通過串聯(lián)親和純化(TAP)技術(shù)尋找ATCPK10的互作靶蛋白,結(jié)合運用生物信息學、蛋白質(zhì)生物化學、細胞生物學等方法與技術(shù),對ATCPK10參與調(diào)控氣孔運動的分子機制進行了初步研究。首先通過構(gòu)建帶有雙標簽(FLAG和HA)的PCM1307FLAGHAATCPK10雙元表達載體,以農(nóng)桿菌介導轉(zhuǎn)化擬南芥野生型,篩選獲得穩(wěn)定表達的轉(zhuǎn)基因T3代陽性材料;進而利用TAP技術(shù)篩選ATCPK10的互作蛋白,經(jīng)質(zhì)譜分析,獲得316個蛋白,經(jīng)生物信息學分析,挑選出9個感興趣成員。通過RTPCR方法分析在干旱誘導條件下候選基因轉(zhuǎn)錄水平的表達情況,結(jié)果顯示CPK8、CAT3、HSC701受干旱誘導表達量明顯增高,推測這些成員可能參與干旱逆境。蛋白質(zhì)生化及細胞生物學實驗證實CPK10和它們之間直接互作的工作正在進行。綜合上述結(jié)果,本研究為探討CPK10調(diào)節(jié)氣孔運動的機制奠定了堅實的工作基礎(chǔ)。同時對于認識CDPK家族成員之間的關(guān)系提供了重要的啟示性線索。項目資助發(fā)表核心論文1篇,待發(fā)表兩篇。培養(yǎng)碩士生3名,其中1名已經(jīng)取得碩士學位,2名在讀。項目投入經(jīng)費22萬元,支出196858萬元,各項支出基本與預算相符。剩余經(jīng)費23142萬元,剩余經(jīng)費計劃用于本項目研究后續(xù)支出。TAP技術(shù);ATCPK10;互作蛋白;表達變化;逆境分析關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞ABSTRACTLIMITEDTO3000CHARACTERSABSTRACTLIMITEDTO3000CHARACTERSARABIDOPSISTHALIANACA2DEPENDENTPROTEINKINASE10CPK10WASINVOLVEDINREGULATIONOFSTOMATALMOVMENTSINRESPONSETODROUGHTSTRESSUSINGTANDEMAFFINITYPURIFICATIONTAPTOSCREENINTERACTINGPROTEINSCOMBINEDWITHBIOINFORMATICS,PROTEINBIOCHEMISTRYANDCYTOBIOLOGYMETHODS,THEPRELIMINARYFUNCTIONALCHARACTERIZATIONOFATCPK10INREGULATINGSTOMATALMOVEMENTSWERERESEARCHEDINTHISINVESTIGATIONFIRSTLY,THECDNAOFCPK10WASCLONEDINTOVECTORPCM1307NFLAGANDTRANSFERREDINTOARABIDOPSISPLANTSWILDTYPE,T3HOMOZYGOUSLINESWEREOBTAINEDANDTHEN,TAPMETHODSWEREAPPLIEDTOSCREENCANDIDATEPROTEINSTHATINTERACTWITHCPK10ABOUT348EXPRESSEDPROTEINSWEREOBTAINEDFROMTHEMASSSPECTROMETRYMSDATAAND9WERESELECTEDWITHCANDIDATEPROTEINSRTPCRANALYSISSHOWEDTHATCPK8、CAT3、HSC701WEREHIGHLYEXPRESSEDINRESPONSETODROUGHTSTRESS,THISRESULTDEMONSTRATEDTHATTHESECANDIDATEPROTEINSPOSSIBLYINVOLVEDINDROUGHTSTRESSTHEABOVERESULTSNOTONLYLAYASOLIDFOUNDATIONFORELUCIDATINGTHEREGULATORYMECHANISMOFATCPK10ONSTOMATALMOVEMENTSBUTALSOPROVIDESINSIGHTINTOUNDERSTANDINGTHERELATIONSHIPBETWEENCDPKSMEMBERSTHEREARE1PAPERWASPUBLISHEDUNDERTHESUPPORTOFNSFCANDTWOPAPERSWOULDHAVETOWAITTOBEPUBLISHEDONESTUDENTSHAVEOBTAINEDMASTERDEGREEANDTWOAREPURSUINGTOTALINPUTFUNDWAS220,000YUANTOTALEXPENDITUREWAS196,686YUANTHESURPLUSWILLBECONTINUETOSPENDONTHISRESEARCHNSFCREPORT2014第2頁國家自然科學基金資助項目結(jié)題報告
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上傳時間:2024-03-13
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