簡介:思想的跨越理性的回歸,學科核心素養(yǎng)的提出及其對生物學教學的可能影響,解凱彬KBXIESINACOM盱眙江蘇20161229,生物學課程標準修訂的概況,1、高中生物課程標準與小學科學課程標準同時修訂,,2、小學科學課程標準修訂的亮點(1)向下延伸至1、2年級(2)強調“少而精”(3)教學要求關注學生的“深入理解”(4)除了物質、生命、地球空間技術外增加了“技工”的內容,,3、高中生物學課程標準的主要變化(1)提出了“學科核心素養(yǎng)”(2)課程內容“少而精”成為課程理念(3)以概念層級的形式描述內容標準(4)引入了全新的評價方式,,聯(lián)系2011年版的義務教育生物學課程標準的變化,不難得出結論在生物學領域,小學初中高中課程內容標準的涉及是循序漸進和連貫一致的,,可以預期的是義務教育生物學課程標準即將沿著高中生物學課程標準修訂的方向展開新的修訂,學科核心素養(yǎng)的提出是教育思想的一次跨越,關鍵詞科學素養(yǎng)核心素養(yǎng)學科核心素養(yǎng),科學素養(yǎng)指公眾對科學所了解的程度。通常包括對科學的本質、目標和一般局限的認識,以及對更為重要的科學思想和方法的理解與認同??茖W素養(yǎng)包括三個維度對科學原理和方法的理解(科學過程)對重要科學術語和概念的理解(科學知識)對科學技術的社會影響的意識和理解(科技作用),,核心素養(yǎng),生物學科核心素養(yǎng),1生命觀念“生命觀念”是指對觀察到的生命現(xiàn)象及相互關系或特性進行解釋后的抽象,是人們經過實證后的觀點,是能夠理解或解釋生物學相關事件和現(xiàn)象的意識、觀念和思想方法。學生應該在較好地理解生物學概念的基礎上形成生命觀念,如結構與功能觀、進化與適應觀、穩(wěn)態(tài)與平衡觀、物質與能量觀等。能夠用生命觀念認識生物的多樣性和統(tǒng)一性,形成科學的自然觀和世界觀,指導探究生命活動規(guī)律,解決實際問題。,,①以概念建構為基礎,又高于概念本身②是研究生命科學的基本思想方法③世界觀在生命科學領域的體現(xiàn)④對知識目標提出了更高的要求,2理性思維“理性思維”是指尊重事實和證據(jù),崇尚嚴謹和務實的求知態(tài)度,運用科學的思維方法認識事物、解決實際問題的思維習慣和能力。學生應該在學習過程中逐步發(fā)展理性思維,如能夠基于生物學事實和證據(jù)運用歸納與概括、演繹與推理、模型與建模、批判性思維等方法,探討、闡釋生命現(xiàn)象及規(guī)律,審視或論證生物學社會議題。,,①凸顯了生物學理科屬性②是一種基本習慣和技能③是從事科學工作的基本范式④學會理性對待現(xiàn)實社會問題,3科學探究“科學探究”是指能夠發(fā)現(xiàn)現(xiàn)實世界中的生物學問題,針對特定的生物學現(xiàn)象,進行觀察、提問、實驗設計、方案實施以及結果的交流與討論的能力。在探究中,樂于并善于團隊合作,勇于創(chuàng)新。,,①研究生命科學的基本方法②概念建構最直接的方式③公民生存和參與社會活動的重要能力,4社會責任“社會責任”是指基于生物學的認識,參與個人與社會事務的討論,作出理性解釋和判斷,嘗試解決生產生活問題的擔當和能力。學生應能夠以造福人類的態(tài)度和價值觀,積極運用生物學的認識、理解和思想方法,關注社會議題,參與討論并作出理性解釋,辨別迷信和偽科學;形成生態(tài)意識,參與環(huán)境保護實踐;主動向他人宣傳健康生活和關愛生命等相關知識;結合本地資源開展科學實踐,嘗試解決現(xiàn)實生活問題。,,①參與個人與社會事務的理性判斷和決策②關注和解決生產生活的實際問題③形成正確的人生觀(生命觀、生態(tài)觀、生活觀),,學科核心素養(yǎng)的提出是學科教學思想向公民教育思想的一次跨越,從三維目標到核心素養(yǎng)的四個維度的意義并非說明三維目標是錯誤的,而是對三維目標的一種發(fā)展,課程內容標準的表述體現(xiàn)出一種理性的回歸,,目前的內容標準,,即將公布的內容標準,生物學概念生物學核心概念(大概念)生物學重要概念生物學次位概念,概念的保存時間,生物學核心概念(大概念)40年生物學重要概念40月生物學次位概念40周,,1、概念教學的要求提升(概念與知識的區(qū)別)2、重視構建完善的知識網絡3、體現(xiàn)了“少而精”的課程理念(學科化與去學科化妥協(xié)的結果)4、改進學習方式(概念的建構是主動學習的結果),,強調概念教學是對課程改革的反思,是一種理性的回歸我們的課程改革在基本社會體制保障不健全的情況下不應盲目模仿國外的所謂先進經驗,而放棄我們長期以來形成的優(yōu)勢但是,重走老路是對這種回歸的極端錯誤的理解是歷史的倒退,核心素養(yǎng)的提出對生物教學的可能影響,1、更強調思維品質的訓練2、課程目標的融合3、教與學方式的改變4、學習要求的進一步提升,,未來課堂教學可能的特點1、知識的再現(xiàn)遠不能達到教學要求2、自主、合作、探究依然會是教學的主題3、概念教學策略滲透到每一節(jié)課4、重視跨學科概念的建立5、校本課程開發(fā)必將成為熱點6、教師面臨嚴峻考驗,,海爾蒙特提出了什么樣的假設植物體積累的物質來自土壤海爾蒙特實驗的結果是什么植物體增重約80KG,土壤重量減少約01KG海爾蒙特的直接結論是什么植物體積累的物質主要不來自土壤海爾蒙特的推論(間接結論)是什么植物體積累的物質主要來自水,節(jié)外生枝,假如土壤減少的重量也約為80KG,能不能說明植物積累的物質主要來自土壤,這個問題給了我們什么樣的啟示,海爾蒙特實驗忽略了什么為什么,忽略空氣和陽光等因素對實驗的影響,最初的問題回答了嗎,實驗五1804年,瑞士索緒爾實驗,植物體內積累的物質到底來源于哪里,結論植物體利用CO2和H2O合成有機物并放出氧氣。,,思考題,1、請和你的同學討論交流你對于人類對光合作用探究歷程的感悟和體會2、光合作用中產生的有機物就僅僅是糖類嗎(不僅僅回答是否,而且要說出理由),,經典再現(xiàn),,,結論,DNA的復制是“半保留復制”,DNA復制的具體過程又是如何發(fā)生的呢,,請簡要復述DNA復制的過程解旋復制(互補配對)盤旋纏繞DNA復制需要哪些條件模板、DNA解旋酶、原料、DNA聚合酶、能量等,,,DNA復制真的這么簡單嗎,,謝謝,
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簡介:第19章分子生物學常用技術--4學時分子雜交、PCR、基因測序蛋白質研究技術雙向電泳,酵母雙雜交基因轉移與基因剔除含RNA干擾第20章基因工程--4學時第21章基因診斷與基因治療--4學時,第四篇分子生物學技術與應用,,第十九章,分子生物學常用技術,分子生物學技術能幫助我們干什么,揭示生物大分子DNA、RNA、蛋白質的結構與功能DNA水平基因序列分析、拷貝數(shù)和染色體定位RNA水平定量分析、基因表達產物的可變剪接分析蛋白質水平蛋白質定量、定位、功能細胞與整體水平基因在活體中的功能目的了解疾病發(fā)生的規(guī)律,提供治療與預防手段,我們需要了解和掌握哪些基本技術,基本技術核酸測序、印跡、雜交、體外擴增技術蛋白質電泳與印跡、組學技術、相互作用綜合技術基因工程技術轉基因生物與基因敲除技術應用技術基因診斷基因治療,MOLECULARHYBRIDIZATION利用已知核酸序列探針/PROBE檢測與其互補的未知核酸序列用途確認核酸序列間同源性對特定核酸序列進行定量自核酸混合體中辨認特定核酸序列,第一節(jié)核酸分子雜交,一、基本原理,變性DENATURE復性RENATURE雜交HYBIRIDIZATION,,,核酸變性,在特定變性因素作用下,DNA雙螺旋解離的過程破壞氫鍵與疏水作用可導致變性熱變性高溫可使核酸變性,溫度高于90℃時任何核酸雙鏈都將變性酸堿變性PH11時核酸將變性,DNA使用堿變性,RNA則不可化學試劑變性能夠破壞氫鍵的化學試劑如尿素或甲酰胺可使核酸變性,變性溫度,TMMELTINGTEMPERATURE,解鏈溫度或變性溫度影響變性溫度的因素溶液的離子強度變性溫度與離子強度正相關,低鹽利于變性DNA分子的GC含量GC%=TM-693224,核酸復性,變性的DNA單鏈相互識別并結合,恢復其天然雙螺旋結構的過程復性類似與化學反應,需要一定反應時間,影響DNA復性速度的因素,DNA分子的濃度濃度高,復性快DNA分子的長度長片段復性速度慢DNA分子的復雜性重復序列復性速度快不同物種C0T曲線比較人類基因組C0T曲線,二、核酸探針,PROBE用于測定未知核酸片段的已知序列探針為DNA或RNA,可以為單鏈或雙鏈探針必需經過標記放射性標記或非放射性標記,1探針有哪些種類,DNA探針常規(guī)探針利用基因組DNA序列或CDNA序列合成的探針,一般為雙鏈,也可制備成單鏈RNA探針高靈敏度探針一般是通過體外轉錄而來,均為單鏈寡核苷酸探針OLIGONUCLEOTIDE用于點突變檢測人工合成的短序列20NT,可自由選擇序列,2標記物有哪些,標記物的要求高度的靈敏性足以檢測到極微量的核酸序列高度的特異性足以在大量非特異性序列中檢測到特異的靶序列標記物的種類放射性同位素RADIOISOTOPE非放射性標記物NONRADIOACTIVELABEL,放射性同位素,特點靈敏度最高的標記物,足以檢測到飛克級微量的核酸序列G→MG→ΜG→NG→PG→FG常用的放射性同位素,放射性標記的核苷酸單體,DNTPORNTP5’OR3’P32LABELLING,非放射性標記物,特點安全且易于存放,但靈敏度與特異性均不及放射性同位素地高辛通過地高辛抗體結合并檢測生物素結合親和素/鏈親和素AVIDIN/STREPTAVIDIN化學發(fā)光物質通過紫外激發(fā)或化學反應而發(fā)光電子密度標記物金等重金屬,3如何檢測雜交信號,同位素標記物蓋革計數(shù)器、液體閃爍計數(shù)器放射自顯影AUTORADIOGRAPHY,如何檢測雜交信號,非放射性標記物酶聯(lián)免疫技術ENZYMELINKEDIMMUNOASSAY化學發(fā)光CHEMILUMINESCENCE,三、如何對核酸探針進行標記,1缺口平移,NICKTRANSLATION適用于標記雙鏈DNA控制DNASEI的用量,可以控制探針的長度,2非放探針的酶促標記,生物素或地高辛標記的核苷酸單體通過酶促反應可以參入探針,3非放探針的化學標記,利用光敏基因經可見光照射直接與核酸結合,四、如何進行雜交,樣品DNAORRNA吸附于支持物尼龍膜、硝酸纖維膜、載玻片等與標記的探針雜交封閉液封閉后雜交,雜交爐中進行緩沖液清洗控制溫度與變性劑濃度顯色放射自顯影/酶聯(lián)顯色,五、雜交有哪些不同的方式,斑點雜交DOTHYBRIDIZATIONSOUTHERN印跡雜交SOUTHERNBLOTNORTHERN印跡雜交NORTHERNBLOTWESTERNBLOTTING不是雜交原位雜交INSITUHYBRIDIZATION反NORTHERN印跡雜交REVERSENORTHERNBLOT基因芯片/DNA微陣列GENECHIP/DNAMICROARRAY,DOTHYBRIDIZATION,將核酸樣品直接點在雜交膜上與探針進行雜交特點簡便但特異性不高可探測核酸含量,但無法得知分子大小,SOUTHERNBLOT,EDWINSOUTHERN創(chuàng)立的方法電泳技術與雜交結合,可顯示靶DNA序列的長度可進行毛吸管轉移、真空轉移與電轉移,,,電泳,轉膜,雜交,NORTHERNBLOT,類似于SOUTHERN印跡雜交的方法,用于RNA檢測,INSITUHYBRIDIZATION,原位雜交特定MRNA的組織細胞分布,FISH,FLUORESCENCEINSITUHYBRIDIZATIONFISH特定基因的染色體定位,反NORTHERN雜交與DNA芯片,反NORTHERN雜交將探針DNA片段固定在雜交膜上,利用標記物標記的RNA進行雜交,第二節(jié)聚合酶鏈式反應,PCR,POLYMERASECHAINREACTION在體外選擇性擴增特定DNA片段的高效手段70年代有人提出PCR的設想,因缺乏寡核苷酸的合成手段和適合的酶而無法進行1984年KARYMULLIS發(fā)明PCR,并因此獲得1993年的諾貝爾化學獎全自動的熱循環(huán)儀和多種PCR衍生技術使其成為重要的科學研究手段,一、PCR的基本原理,在體外,以特定引物引導,通過DNA聚合酶選擇性擴增特定區(qū)域變性DENATURE退火ANNEAL延伸EXTENSION,DNA的體內復制,引物酶,引物酶,DNA的體內復制,DNA聚合酶,DNA聚合酶,DNA的體內復制,DNA加熱解鏈,模板DNA,,,,引物1,引物2,引物1,引物2,TAQ酶,TAQ酶,第1輪結束,第2輪開始,72℃,,,,,,,,,,,,TAQ,TAQ,TAQ,,TAQ,55℃,,,,,,,,,,第2輪結束,模板DNA,第1輪擴增,第2輪擴增,第3輪擴增,第4輪擴增,第5輪擴增,第6輪擴增,理想拷貝數(shù)2NN循環(huán)次數(shù)實際拷貝數(shù)1XNX平均效率,約為085N循環(huán)次數(shù),,,,,,重復13步2530輪,目的DNA片段擴增100萬倍以上,DNA雙螺旋,DNA單鏈與引物復性,新鏈延伸,,,,,DNA的體外擴增,熱循環(huán),DNA解鏈,,PCR反應體系4種DNTP混合物各200ΜMOL/L引物各0105ΜMOL/L模板DNA01~2ΜGTAQDNA聚合酶25UMG215MMOL/L,DNA的體外擴增,PCR技術的特點,高度的靈敏性理論上經20循環(huán)可將目的基因片段擴增220=1000000倍高度的特異性利用引物與模板的特異性配對,可保證擴增的特異性一對20堿基長引物的多樣性為440=1024應用的廣泛性目前已經成為分子生物學研究必不可少的手段操作的簡便性不需要復雜的設備和繁瑣的流程,二、做PCR要有什么條件,酶TAQDNA聚合酶模板DNA可以為基因組DNA或CDNA引物人工合成的寡核苷酸片段DNTP聚合反應的核苷酸單體緩沖液包含特定的PH、離子強度和MG2反應程序變性、退火、延伸組成的循環(huán)儀器DNA熱循環(huán)儀,或稱PCR儀,DNA聚合酶催化的聚合反應,,DNTP,1什么是耐熱DNA聚合酶,早期PCR曾使用DNA聚合酶I在高溫時發(fā)生變性,每一循環(huán)都需要重新添加酶延伸反應溫度為37℃,非特異性太多目前常用TAQDNA聚合酶純化自嗜熱水生菌THERMUSAQUATICUS可耐受95℃高溫,最適反應溫度為72℃左右,TAQDNAPOLYMERASE,在7075℃范圍活性最佳,每秒可延伸150NT95℃時的半衰期為40MIN按變性時間1MIN計,能滿足30循環(huán)的反應TAQ酶具有5’→3’聚合活性和5’→3’外切活性不具備校讀活性,錯誤率為210-4左右錯誤合成的DNA片段可以作為模板,循環(huán)數(shù)越多,最終擴增產物錯誤率越高只能用于檢測,不適合基因克隆,有保真性的耐熱DNA聚合酶嗎,PFUDNAPOLYMERASE常用的高保真耐熱DNA聚合酶有5’→3’外切活性錯誤率約110-6適應于基因克隆,2如何設計寡聚核苷酸引物,引物PRIMER是PCR反應必備的前提,對PCR產物類型、長度和反應的特異性具有決定作用PCR需要兩條引物,引物決定擴增范圍和擴增片段長度,引物設計原則,引物長度一般為1530核苷酸引物太短影響雜交體的穩(wěn)定和特異性引物太長隨機匹配序列增多,特異性反而下降GC含量一般為40%60%應充分考慮退火溫度ANNEALINGTEMPERATUREGC含量低,退火溫度低,易出現(xiàn)非特異GC含量高,非特異性結合也會增加引物解鏈溫度粗略計算公式引物的解鏈溫度TM=4G+C+2A+T,引物設計原則,引物自身不應該存在鏈內互補序列,以防止出現(xiàn)發(fā)卡結構,兩條引物間、同一引物的分子間不應存在互補序列出現(xiàn)互補易導致引物二聚體的出現(xiàn),影響擴增效率,引物設計原則,避免引物與非特異序列間的同源性引物的3,末端必須與模板完全互補,5,末端允許添加非配對序列5,末端允許添加非匹配序列,如酶切位點,5’,3’,3如何選擇DNTP和緩沖液,DNTP是聚合反應的底物常規(guī)使用濃度02MMEACH探針標記時,可使用同位素或非放標記的DNTP緩沖液特定的PH和離子強度MG2+濃度一般為15MMPCRMIX預制的便捷反應體系,4用什么做模板DNA,PCR的模板TEMPLATE可以是基因組DNA或CDNA逆轉錄PCRREVERSETRANSCRIPTIONPCRRTPCR在利用DNA為模板進行擴增時純化比較簡單血液、病原體、體外培養(yǎng)細胞、甚至病理標本經簡單處理后均可直接進行PCR擴增RNA樣品一般要經過嚴格純化,并逆轉錄未經純化的RNA不穩(wěn)定,無法進行逆轉錄反應體系中如存在DNA,將對RNA擴增產生干擾,6如何設計反應程序,PCR的循環(huán)數(shù)理論上2025即可滿足擴增需要,但實際循環(huán)數(shù)一般為2535過多循環(huán)后到達平臺期,繼續(xù)延長循環(huán)數(shù)無效,模板濃度高時平臺期出現(xiàn)早,模板濃度低時平臺期出現(xiàn)晚,應根據(jù)模板濃度調節(jié)循環(huán)數(shù),反應程序的關鍵是退火溫度,退火溫度提高退火溫度有助于提高反應的特異性退火溫度過高將導致引物與模板無法配對,影響擴增效率反應的退火溫度主要取決于引物序列,三、我們能用PCR做什么,自PCR技術創(chuàng)立以來,經近20年的發(fā)展,在基本PCR技術基礎上產生了多種PCR的衍生技術,應用于各種不同的目的基因克隆或亞克?。蚬こ烫囟ɑ虮磉_量的分析基因突變的檢測--基因診斷病原體特征性序列的鑒定--基因診斷定點誘變--第4節(jié)DNA序列測定--第3節(jié),最常用的PCR是RTPCR,RTPCRREVERSETRANSCRIPTIONPCR以MRNA為模板先進行逆轉錄,再進行PCR為什么要以MRNA為模板MRNA無內含子,克隆的基因可在原核表達MRNA的量代表了基因的表達水平,如何利用RTPCR檢測基因表達水平,定量PCRQUANTITATIVEPCRPCR產物的量與起始的模板量有關利用PCR對模板DNA或CDNA進行定量測定定量PCR一般用于特定基因MRNA水平的檢測RTPCR可用于基因表達水平檢測需設定內部參照物REFERENCEGENE,如GAPDH、ACTIN、18SRRNA等穩(wěn)定表達基因定量是相對的,一般是不準確的,為什么說RTPCR定量是不準確的,指數(shù)擴增期,產物量與模板量成正比進入平臺期,產物量不能再反應模板量不同樣品進入平臺期的循環(huán)數(shù)不同,難以選擇測定的時間節(jié)點,有精確定量方法嗎,實時熒光定量PCRREALTIMEPCR以產物量到達一定閾值所需要的循環(huán)數(shù)為定量標準需要對PCR產物的生成量進行動態(tài)監(jiān)控,,如何進行產物量的實時檢測,需要熒光標記探針與兩側PCR引物探針標記有報告熒光與粹滅熒光反應過程中探針被降解,報告熒光顯色可通過熒光定量PCR儀進行實時監(jiān)控,巢式PCR可以提高擴增效率和特異性,NESTEDPRIMERPCR內外兩套引物分兩輪進行擴增在克隆一些低豐度基因時可以采用,經過兩輪PCR擴增,具有更高的靈敏度四條引物均與模板匹配,因此增加了特異性,可以利用多對引物進行多重PCR,多重PCRMULTIPRIMERPCR多組引物同時進行的PCR,可大幅度降低PCR反應的工作量,可以在組織切片上進行原位PCR,原位PCRINSITUPCR在組織切片或細胞涂片上進行的PCR方法主要用于特定基因表達水平的原位分析組織切片經過固定、蛋白酶和DNASE消化后進行RTPCR擴增,SEQUENCING基因結構分析的最基本方法主要方式化學降解法酶法SANGER法/雙脫氧鏈末端終止法二代/三代測序技術,第三節(jié)基因測序,適用于寡核苷酸片段測序的方法基本反應GDMSG/A哌啶T/C肼低鹽C肼高鹽,一、化學降解法,SANGER在1977年建立的方法,也稱酶法測序DNA序列測定的最常用方法,二、雙脫氧末端終止法,在反應體系中加入2’,3’DDNTP,由于其沒有3’OH而不能與下一個核苷酸相連,于是DNA鏈的合成便終止。,SANGER法測序,模板單鏈→單雙鏈均可酶KLENOW→耐熱DNA聚合酶標記同位素標記→熒光標記電泳平板電泳→毛細管電泳4泳道→單一泳道,酶法測序的自動化程度越來越高,二代測序技術NEXTGENERATIONSEQUENCING1天完成全基因組測序羅氏、SOLEXA、ABI等公司各有不同技術利用微珠或芯片實現(xiàn)大通量,邊合成邊測序三代測序技術NEXTNEXTGENERATIONSEQUENCING3分鐘完成全基因組測序基于納米微孔的單分子測序技術,二代測序與三代測序技術,第四節(jié)DNA定點誘變技術自學),目前主要用PCR方法進行定點誘變也可進行突變基于的全合成,第五節(jié)RNA干擾技術,學習基因工程之后,在基因剔除技術部分介紹,第六節(jié)生物芯片,生物芯片BIOCHIP基于微電子技術和生物信息技術建立的高度集成化的生物樣本分析方法生物芯片是后基因組時代的利器生物芯片有哪些種類DNAMICROARRAYPROTEINMICROARRAYANTIBODYMICROARRAYCHEMICALCOMPOUNDMICROARRAYTISSUEMICROARRAY,什么是基因芯片技術,基因芯片GENECHIP,一種高通量的核酸雜交方法,又稱DNA微陣列DNAMICROARRAY將大量探針固定與固相支持物,與標記的待測樣品進行雜交的方法AFFYMETRIX公司已經將GENECHIP注冊,如何制作基因芯片,CDNA芯片CDNA片段以顯微打印的方式固定于固相支持物表面,集成度較低原位合成芯片以激光蝕刻技術直接合成寡核苷酸探針,集成度可達105點陣/CM2以上,基因芯片能幫助我們干什么,基因表達譜芯片GENEEXPRESSIONPROFILE基因表達的大通量分析SNP芯片SINGLENUCLEOTIDEPOLYMORPHISM單核苷酸多態(tài)性的大通量檢測微小RNA芯片MIRNA分析MICRORNA甲基化芯片分析基因組甲基化狀態(tài)CHIPCHIPCHROMATINIMMUNOPRECIPITATION分析DNA與蛋白質的相互作用,芯片的主要工作流程,選擇與購買芯片準備樣品標記樣品雜交檢測雜交信號分析處理結果,第七/八節(jié)蛋白質分析方法,蛋白質的定量分析ELISAENZYMELINKEDIMMUNOSORBENTASSAYWESTERNBLOT蛋白質的定位免疫組織化學熒光蛋白的活細胞定位蛋白質相互作用的研究蛋白質功能的研究蛋白質組學技術,PROTEOMICS,蛋白質組與蛋白質組學對特定組織細胞總蛋白的整體性研究,蛋白質組學研究的目的什么,解讀基因組基因組編碼了多少基因蛋白表達比研究RNA表達深入了一步蛋白功能超過1/3的蛋白質功能不明確蛋白質修飾糖基化、磷酸化、酶解等蛋白質定位SUBPROTEOME蛋白蛋白相互作用互作是功能的基礎,蛋白質組學的核心技術是什么,1975年,雙向電泳技術建立1990年,更新的EDMAN降解法用于微量蛋白質測序,靈敏度達到PMOL級質譜技術使蛋白測序靈敏度達到FMOL級基因組計劃提供了大量的生物信息雙向電泳+質譜+生物信息分析,等電聚焦+SDSPAGE,雙向電泳技術,雙向電泳,等電聚焦+SDSPAGE,雙向電泳的優(yōu)點與缺陷,優(yōu)點比單向電泳有更高的分辨率缺點與解決辦法無法檢測低豐度蛋白分組檢測無法檢測大分子量或脂溶性蛋白酶解電泳圖譜解讀困難自動化分析、DIGE,DIFFERENCEGELELECTROPHORESISDIGE,MASSSPECTROMETRY,肽質譜MS分析混合多肽只能確定氨基酸組成,不能分析序列氨基酸質譜分析單一肽的氨基酸序列串聯(lián)質譜TANDEMMASSSPECTROMETRY,MS/MS可以分析氨基酸序列通過與數(shù)據(jù)庫比較確認肽的來源,MS與MS/MS,如何進行蛋白蛋白相互作用的分析,酵母雙雜交YEASTTWOHYBRIDIZATION噬菌體展示文庫PHAGEDISPLAYLIBRARY免疫共沉淀COIMMUNOPRECIPITATIONFRETFLUORESCENCERESONANCEENERGYTRANSFER,YEASTTWOHYBRIDIZATION,蛋白質相互作用的篩查方法以特定蛋白為釣餌,篩選其相互作用蛋白,如何利用蛋白質組學方法進行功能分析,蛋白質芯片抗原-抗體鑒定蛋白質相互作用鑒定蛋白質與小分子相互作用代謝組學檢測酶活性蛋白質功能的高通量分析,本章的主要內容是什么,通過本章學習了解了哪些核酸和蛋白質研究方法什么是分子雜交分子雜交的探針是什么怎樣進行標記分子雜交有哪些基本方式什么是PCR基本原理是什么PCR反應體系是由什么組成的,本章的主要內容是什么,什么是RTPCR能用來干什么如何利用PCR進行核酸的定量分析什么是基因芯片什么是蛋白質組學核心方法是什么如何進行蛋白質相互作用的研究,
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