簡介：點擊查看更多人巨細胞病毒立刻早期蛋白(HCMV IE2)與Myocardin在心肌肥厚中的協(xié)同作用.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：對流感藥物的疏忽引發(fā)了全球性的藥物短缺問題。目前市場上只有2種主要的流感藥物。同時，對禽流感的擔(dān)心，促使各國政府采取了相應(yīng)的藥物儲備措施，結(jié)果導(dǎo)致流感藥物的需求變得更加緊張。不過這也帶來了一個積極的結(jié)果流感藥物研究領(lǐng)域開始復(fù)蘇。自從1983年確定了流感病毒神經(jīng)氨酸酶NA的晶體結(jié)構(gòu)及其與天然底物唾液酸的共晶結(jié)構(gòu)以來，流感病毒NA抑制劑的研究，尤其是其唾液酸類似物的研究取得了突破性進展。對晶體結(jié)構(gòu)的了解允許人們進行分子模擬研究，進而設(shè)計開發(fā)高效、高選擇性的抑制劑。而定量構(gòu)效關(guān)系研究是藥物設(shè)計的一種重要方法，它對于設(shè)計和篩選生物活性顯著的藥物以及闡述藥物的作用機理等具有指導(dǎo)作用。本文綜述了流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑和定量構(gòu)效關(guān)系方法的研究進展；利用2DQSAR和3DQSAR技術(shù)對流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑進行了定量構(gòu)效關(guān)系研究和計算機輔助藥物設(shè)計；實現(xiàn)了對部分目標化合物的成功合成，以期得到具有較高生物活性的新型抗流感藥物小分子結(jié)構(gòu)。本文的主要內(nèi)容和研究成果如下1運用分子距離矢量MEDV和三維全息原子場作用矢量3DHOVAIF這兩種描述子結(jié)合逐步線性回歸SMR、多元線性回歸MLR建模技術(shù)分別對兩個神經(jīng)氨酸酶抑制劑樣本體系進行結(jié)構(gòu)表征和建模分析。通過對建模結(jié)果進行對比發(fā)現(xiàn)運用3DHOVAIF所建模型，相對于MEDV所建模型不論是在估計能力還是預(yù)測能力都較理想。初步說明描述子MEDV相對于3DHOVAIF不適用于神經(jīng)氨酸酶抑制劑的結(jié)構(gòu)表征。2進一步運用3DHOVAIF描述子和逐步線性回歸SMR、多元線性回歸MLR建模技術(shù)對40個嘧啶類抑制劑體系進行了結(jié)構(gòu)表征和建模分析，通過變量篩選和回歸分析最終得到了得到了5變量的定量構(gòu)效關(guān)系模型，建模結(jié)果為R0923，SD1146，R2CV0679，SDCV1513?？梢钥闯鲈撃Ｐ途哂辛己玫姆€(wěn)定性和預(yù)測能力。從而進一步說明3DHOVAIF描述子能夠準確描述神經(jīng)氨酸酶抑制劑的結(jié)構(gòu)信息，適用于該類分子的結(jié)構(gòu)表征。3為了深入分析3DHOVAIF對流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑樣本集的表達和建模性能，采用優(yōu)化算法將123個含氮雜環(huán)類抑制劑樣本分為兩部分，即訓(xùn)練集和測試集各為100和23個樣本。利用3DHOVAIF對100個神經(jīng)氨酸酶抑制劑進行結(jié)構(gòu)表征，然后采用逐步回歸對變量進行篩選后，運用偏最小二乘技術(shù)建立模型。結(jié)果復(fù)相關(guān)系數(shù)R2，交互校驗的復(fù)相關(guān)系數(shù)Q2和模型的均方根誤差分別為R20705，SD0936，Q20657，并對文獻中23個藥物和設(shè)計的36個化合物進行了活性預(yù)測，說明該模型對內(nèi)部樣本活性的估計能力和對外部樣本活性的預(yù)測能力均較好。表明三維全息原子場作用矢量能較好表征該類分子結(jié)構(gòu)信息值得進一步推廣應(yīng)用。4在36個設(shè)計化合物的活性預(yù)測值中，嘧啶類衍生物和環(huán)己烯類衍生物均表現(xiàn)出較高的生物活性，從中篩選出六個嘧啶類衍生物即4羥基2巰基6甲基嘧啶、6甲基24二羥基嘧啶、4羥基2甲氧基6甲基嘧啶、4羧基24二羥基嘧啶、4羧基2甲氧基6羥基嘧啶和4羧基2乙氧基6羥基嘧啶進行了實驗室合成、純化和結(jié)構(gòu)測定，并對4羥基2甲氧基6甲基嘧啶的合成工藝進行了優(yōu)化。這對下一步的抗流感活性測試和藥物的篩選均具有十分重要的意義。

簡介：第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文HIF1Α及MDR1MIRNA重組慢病毒干擾體系逆轉(zhuǎn)結(jié)腸癌細胞多藥耐藥的研究姓名丁震宇申請學(xué)位級別博士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師梁后杰20080501第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文方法1、通過免疫組織化學(xué)染色及免疫熒光雙標染色技術(shù)觀察結(jié)腸癌組織標本中HIF一10【與PGP的表達和分布情況，了解二者在結(jié)腸癌組織中表達的關(guān)系及與腫瘤分期、淋巴轉(zhuǎn)移等臨床病理參數(shù)的關(guān)系。2、采用免疫細胞化學(xué)染色及RTPCR技術(shù)分別在常氧及低氧培養(yǎng)條件下檢測四種結(jié)腸癌細胞株中HIF一10T與MDRL／PGP的表達變化情況，初步探討腫瘤低氧微環(huán)境對HIFLA及MDRL／PGP表達的影響及二者表達的變化關(guān)系。3、設(shè)計合成分別針對靶基因HIF一1Q與MDRL的各2組PREMIRNA干擾序列，構(gòu)建帶有報告基因EMGFP的PCDNATM62一GW／EMGFPMIRHIF一10【及PCDNATM62一GW／EMGFPMIRMDRL兩套干擾質(zhì)粒，雙酶切及測序鑒定質(zhì)粒構(gòu)建成功后，應(yīng)用脂質(zhì)體LIPOFECTAMINEⅢ2000分別介導(dǎo)兩套MIR干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染LOVO細胞，經(jīng)殺稻瘟菌素篩選穩(wěn)定陽性克隆，利用半定量RTPCR技術(shù)檢測兩種干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后相應(yīng)目的基因MRNA表達抑制情況，分析其干擾效果及兩種靶基因可能的作用關(guān)系，從而在備選的4組PREMIRRNA干擾序列中挑選出分別針對靶基因HIF一10T與MDRL干擾效果最佳的1組進行下游MIR慢病毒表達載體的構(gòu)建。4、選取上一部分鑒定出的干擾效果最佳的兩組MIR干擾質(zhì)粒，應(yīng)用GATEWAY重組反應(yīng)技術(shù)構(gòu)建分別針對靶基因HIF一10T與MDRL的兩套MIR慢病毒表達克隆PLENTI6／V5一GW／EMGFPMIRHIF一1U與PLENTI6／V5一GW／EMGFPMIRMDR1，應(yīng)用脂質(zhì)體LIPOFECTAMINE。M2000介導(dǎo)法，共轉(zhuǎn)染VIRAPOWERTM混和慢病毒包裝質(zhì)粒體系入293FT細胞產(chǎn)毒，產(chǎn)毒上清經(jīng)感染NIH／3T3細胞進行滴度測定。而后將HIF1A與MDRL兩套MIR重組慢病毒干擾體系分別感染LOVO細胞，經(jīng)殺稻瘟菌素穩(wěn)定篩選后，利用半定量RTPCR及WESTERNBLOT技術(shù)分別檢測干擾后HIF一10T與MDRL基因MRNA及蛋白的表達變化情況，并進一步在蛋白水平分析兩種基因可能存在的作用關(guān)系。5、采用三維培養(yǎng)的方法分別建立穩(wěn)定感染HIF一1Q或MDRLMIR重組慢病毒及親本LOVO細胞的多細胞球MCS培養(yǎng)體系，經(jīng)低氧培養(yǎng)處理，模擬體內(nèi)腫瘤細胞微環(huán)境，以建立體外經(jīng)低氧誘導(dǎo)的LOVOMCS耐藥模型，并采用流式細胞術(shù)分別檢測各組LOVOMCS的細胞周期分布情況；隨后利用WESTERNBLOT技術(shù)檢測HIFLOT及MDRLMIR慢病毒干擾體系在低氧誘導(dǎo)的LOVOMCS水平對相應(yīng)目的基因的沉默效果并與常氧培養(yǎng)的正常LOVOMCS中目的基因蛋白表達情況作比較。6、應(yīng)用MTT法檢測親本LOVOMCS分別在常氧培養(yǎng)及低氧處理后對ADR、VCR、5一FU和CPT11四種藥物化療敏感性的變化，并在低氧誘導(dǎo)的LOVOMCS多藥耐藥模

簡介：點擊查看更多小柴胡加減方對流感病毒感染小鼠免疫調(diào)節(jié)作用及其對肺組織的保護作用.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：點擊查看更多jn219抗人巨細胞病毒機理研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：山東大學(xué)博士學(xué)位論文慢病毒介導(dǎo)的HIF1Α基因沉默對不同P53狀態(tài)纖維肉瘤細胞放、化療乏氧抵抗的影響及作用機制研究姓名郝靜申請學(xué)位級別博士專業(yè)血液病學(xué)（腫瘤放射治療）指導(dǎo)教師于金明20070515山東大學(xué)博士學(xué)位論文慢病毒介導(dǎo)的HIFLCT基因沉默對不同P53狀態(tài)纖維肉瘤細胞放、化療乏氧抵抗的影響及作用機制研究博士研究生郝靜導(dǎo)師于金明專業(yè)；血液學(xué)腫瘤放射治療中文摘要乏氧為實體腫瘤中較普遍的現(xiàn)象和微環(huán)境最重要的特征之一，包括急性乏氧和慢性乏氧，其產(chǎn)生主要與與腫瘤無限制生長、氧耗增加、血供不足及腫瘤組織血管發(fā)育不良等有關(guān)。研究表明，乏氧與腫瘤放射治療抵抗、藥物抵抗及不良預(yù)后密切相關(guān)，其中乏氧誘導(dǎo)因子．1ⅡHYPOXIAINDUCIBLEFKTOR．1A，HIF．1A作為最重要的轉(zhuǎn)錄因子，可介導(dǎo)多種包括與促血管生成、糖酵解、抗凋亡等基因的表達，阻斷其信號傳導(dǎo)途徑成為目前靶向治療的熱點【HL。由于腫瘤內(nèi)部存在著復(fù)雜的微環(huán)境．基因的交互作用，HIF．1A作為克服乏氧所致的放、化療抵抗的靶點是否依賴于腫瘤的基因背景尚不清楚。特別是近年來，研究表明HIF．1A和P53存在著重要的交互作用【5刪，由于HIF．1D見于70％以上的腫瘤原發(fā)及轉(zhuǎn)移病灶，P53突變見于50／O以上的腫瘤3T,551，HIF．1A與不同功能狀態(tài)的P53之間的相互作用其潛在的病理生理學(xué)意義應(yīng)具有普遍性，對腫瘤HIF．1A靶點治療的影響意義重大。HIF．1由HIF．1A和HIF1LJ亞基構(gòu)成的異二聚體。HIFLIJ，又稱為芳烴受體核轉(zhuǎn)位蛋白ARYLHYDROCARBONRECEPTORNUCLEARTRANSLOCATOR,ARNT，在正常與乏氧情況下均持續(xù)表達。HIF．1作用主要由HIF．1A的表達和活性決定的，其調(diào)控主要發(fā)生在轉(zhuǎn)錄后蛋白水平上，受到微環(huán)境中氧濃度的精細調(diào)控。正常氧分壓下，HIF．1A與抑癌基因VHLVONHIPPELLINDAU結(jié)合。通過泛素蛋白酶途徑被迅速降解，半衰期僅有5MINS，故可作為急性乏氧標記物。而乏氧狀態(tài)下，HIF．1ET蛋白表達顯著增加，降解被阻斷，與H_IF．1B結(jié)合形成HIF．1，并被轉(zhuǎn)移入細胞核內(nèi)，調(diào)控下游基因的表達。盡管臨床資料顯示HIF．1N表達與實體腫瘤不良預(yù)后、放化療抵抗有關(guān)，但目前對HIF．1Ⅱ在腫瘤放、化療抵抗中是否及如何發(fā)揮作用結(jié)論不一致，體外實驗選擇的細胞株P(guān)53狀態(tài)不同可能是其中一重要因素。目前僅MOILER【13】的研究探討了HIF一1表達下調(diào)對放療敏感性的影響與P53的關(guān)系，結(jié)果表明抑制HIF．I可降低而不是提高體外放射敏感性，且該作用依賴于P53正常功能狀態(tài)。相反，P53表達缺失的細胞株HIF．1的表達與放射敏感性

簡介：第一部分兔抗豬內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒P15E多克隆抗體的制備研究背景和目的豬器官、組織和細胞作為臨床移植的供體源具有廣泛和良好的應(yīng)用前景，可緩解臨床器官移植的器官相對短缺也可為臨床治療1型胰島素依賴型糖尿病，帕金森病、亨廷頓病和癲痛病等頑固性神經(jīng)疾患提供一種治療方法。豬肝細胞也可作為豬肝細胞型生物人工肝的生物成分治療急性爆發(fā)性肝炎肝功能衰竭和終末期肝功能衰竭的過渡性措施。自DRCLIVEPATIENEEBIOTRANSPLANTXNC首席科學(xué)家1997年報道豬內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒PCINEENDOGENOUSRETROVIRUS，PERV感染體外培養(yǎng)人源細胞以來，豬異種移植或豬肝細胞型生物人工肝治療過程中可能發(fā)生PERV種間傳播的潛在危險引起眾多學(xué)者的廣泛關(guān)注。PATIENCE等首先證實至少有三種PERV亞型在體外培養(yǎng)能夠感染人源細胞，TAKEUCHI和MARTIN等也證實PERV可以感染體外培養(yǎng)的人源細胞株。1998年，DENNERJ等報道逆轉(zhuǎn)錄病毒的一個結(jié)構(gòu)蛋白即跨膜蛋白P15E是一個活性成分，在體內(nèi)和體外可以抑制免疫反應(yīng)P15E的檢測可以作為檢測PERV表達及其是否具有感染性的一個診斷指標。國內(nèi)及國際抗體市場上并未見應(yīng)用于檢測PERVP15E的特異性抗體，本研究在國外報道的PERVP15E抗原位點的基礎(chǔ)上，設(shè)計并制作了兔抗豬PERVP15E多克隆抗體，該抗體用于檢測PERVP15E在蛋白方面的表達水平具有很高的靈敏度及特異性。該抗體的研發(fā)，對檢測臨床器官移植和豬肝細胞型生物人工肝中PERV的表達和傳播具有重要意義。方法根據(jù)文獻報告獲得了PERVP15E抗原表位E1和E2蛋白序列，再根據(jù)其蛋白序列反推獲得了P15EE1和E2的核酸序列。P15E核酸序列最小長度317BP，為增強其抗原性以及表位的完整性，我們將P15E前方100BP核酸序列一起擴增，通過PCR擴增方法擴增得到了P15E編碼區(qū)序列，然后將其連接到PGEX4T1載體上，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21DE3中，再通過自身誘導(dǎo)法誘導(dǎo)表達重組質(zhì)粒的融合蛋白通過割膠回收純化融合蛋白。免疫新西蘭大白兔制備多克隆抗體，WESTERNBLOT和ELISA檢測抗體活性和滴度。結(jié)果兔抗豬PERVP15E多克隆抗體可以特異性檢測P15E抗原蛋白以及豬腎細胞系PK15中P15E蛋白的表達，而人腎細胞系HEK293中則檢測不到該蛋白表達，證實本抗體特異性強。ELISA檢測兔抗豬PERVP15E多克隆抗體滴度效價達到了1100，000。結(jié)論本研究所獲得的兔抗豬PERVP15E多克隆抗體不僅效價高，而且特異性強，可以作為檢測臨床器官移植和豬肝細胞型生物人工肝中PERV表達和傳播的重要工具。

簡介：蘇州大學(xué)碩士學(xué)位論文反復(fù)短暫性腦缺血發(fā)作對認知功能累積性損傷的臨床研究姓名何川申請學(xué)位級別碩士專業(yè)精神病學(xué)與精神衛(wèi)生學(xué)指導(dǎo)教師吳愛勤20080501反復(fù)短暫性腦缺血發(fā)作對認知功能累積性損傷的I臨床研究中文摘要于BA組，而BA組的DST成績低于IC組。5直線回歸方程顯示IC組MMSE總分和P300潛伏期隨發(fā)作次數(shù)變化的斜率大于BA組。結(jié)論1TIA患者存在抽象思維、注意、短時記憶、執(zhí)行操作功能等方面的認知功能損害2TIA所導(dǎo)致的認知功能損害不會隨著神經(jīng)系統(tǒng)缺損癥狀同步緩解，而呈稽延性損害，隨著發(fā)作次數(shù)的增加，各次TIA所引起的認知損害呈現(xiàn)累積效應(yīng)。3TIA發(fā)作可能成為老年認知功能減退的重要病因，老年認知功能減退和老年癡呆癥AD之間密切相關(guān)，TIA也可能和AD之間存在著一定的病因?qū)W聯(lián)系。4頸內(nèi)動脈TIA發(fā)作后在操作執(zhí)行能力、語言功能、計算力和注意力、抽象思維等方面的認知功能損害比較突出，而基底動脈11A僅在短時記憶、即刻回憶的損害較明顯，頸內(nèi)動脈TIA后總體認知功能狀況隨發(fā)作次數(shù)增加而損害的程度高于基底動脈TIA，頸內(nèi)動脈TIA發(fā)生認知功能損害的易感性更高。關(guān)鍵詞短暫性腦缺血發(fā)作認知功能P300MCI累積性損害Ⅱ作者何川指導(dǎo)老師吳愛勤

簡介：本實驗用DV2感染真皮微血管來源的HMEC1和來源于人臍靜脈內(nèi)皮細胞的ECV304細胞株，檢測DV2在兩種內(nèi)皮細胞中的增殖規(guī)律，病毒感染后細胞表面整合素的表達及功能的變化，以及細胞表面的整合素在DV2感染中的作用，探討DV2感染與VEC相互作用的分子機制。主要的實驗結(jié)果如下1DV2感染可以上調(diào)整合素Β在HMEC1和ECV304細胞中的表達首先，采用流式細胞技術(shù)，檢測DV2感染的HMEC1及ECV304細胞表面的整合素Β和Β的表達，樣品的平均熒光強度代表了整合素的表達量。在整合素Β的檢測中，HMEC1感染后24HR，感染組平均熒光強度略高于對照組，隨著感染時間的延長，樣品的平均熒光強度逐漸增加，在感染后72HR達到峰值，是對照組的254倍P在HMEC1中的表達。整合素Β的表達量于感染前后沒有明顯變化。ECV304細胞感染后，整合素Β和Β呈現(xiàn)了與HMEC1相似的變化趨勢。用感染復(fù)數(shù)MOI為1的病毒量感染HMEC1時，上清中的病毒量于感染后72HR達峰值，為1610PFUML。這與感染后整合素Β高表達的時相點一致，提示DV2對細胞的感染可能誘導(dǎo)了整合素Β的表達。同時，我們用實時定量REALTIMERTPCR的方法檢測整合素Β的MRNA水平。利用2的分析方法分析，整合素Β的MRNA水平在DV2感染HMEC1后逐漸升高，在感染后72HR達到峰值，是對照組的1448倍P的表達。我們的結(jié)果與RAYMOND等在漢坦病毒的研究結(jié)果一致，RAYMOND等研究發(fā)現(xiàn)致病性漢坦病毒可以選擇性抑制整合素Β直接介導(dǎo)的內(nèi)皮細胞移行，流式細胞分析顯示整合素Β的表達量明顯升高。其原因目前尚不清楚，但我們知道整合素Β是細胞表面的一種糖蛋白受體，通過與細胞外基質(zhì)的親和力的變化，控制細胞的粘附和移行。整合素Β3正常的生理功能的發(fā)揮有賴于這種受體與配體結(jié)合解離的平衡。所以兩種出血熱病毒均可引起整合素Β的表達量升高，而臨床上卻表現(xiàn)為出血、血漿滲出，這一看似矛盾的現(xiàn)象可能是由于整合素Β過量表達，引起了細胞粘附與移行這一平衡的紊亂，造成血管通透性變化所致。DV2感染上調(diào)整合素的表達對整合素Β功能的影響有待進一步研究。對于DV2感染后整合素表達上調(diào)的分子機制，我們也做了初步的研究。蛋白質(zhì)的MRNA水平高，一般由兩方面因素決定，一是啟動子活性增強，轉(zhuǎn)錄水平增高；二是MRNA降解減緩，導(dǎo)致的MRNA半衰期的延長。對于前者比較容易確定，本實驗即用整合素啟動子系列報告基因載體PGL31K和PGL313K，檢測DV2感染后整合素表達上調(diào)是否由于整合素啟動子活性增強，轉(zhuǎn)錄水平增高造成的。3次獨立實驗的結(jié)果顯示，無論是ECV304細胞還是VERO細胞，DV2感染后各時相點，整合素啟動子的活性均沒有明顯的變化。那么整合素表達量的變化，可能是病毒感染導(dǎo)致的MRNA降解減緩，MRNA半衰期的延長造成的，其中具體的作用機制還需要進一步證明。2免疫熒光染色顯示HMEC1中整合素Β與DV2的E蛋白共存用整合素Β的單克隆抗體與DV2E蛋白的抗體對DV2感染后的HMEC1進行免疫熒光雙染色。未感染的HMEC1用整合素Β的單克隆抗體染色，呈現(xiàn)較弱的熒光。感染后24HR熒光的強度無明顯變化，隨著感染時間的延長，整合素Β抗原的熒光強度逐漸增強，在感染后48HR和72HR，細胞均呈現(xiàn)較強的熒光。整合素Β抗原主要分布在核周和細胞膜上，與細胞內(nèi)的DV2E蛋白抗原有明顯的共存。利用ECV304細胞，實施相同的感染實驗，所得結(jié)果與HMEC1一致。整合素Β抗原在感染前后的熒光強度沒有明顯變化，提示整合素Β可能與DV2的感染過程密切相關(guān)。3阻斷整合素ΑVΒ的功能可部分的抑制DV2進入HMEC1和ECV304細胞本實驗先用整合素Β，ΑV，ΑVΒ的功能阻斷抗體分別可以抑制30％38％的DV2進入HMEC1。100ΜGML的FN和VTN的阻斷效率分別為32％和23％N3。整合素Β的功能阻斷抗體，牛血清白蛋白BSA以及正常小鼠的IGG1在相應(yīng)的濃度下均未出現(xiàn)阻斷效果。利用ECV304細胞，實施相同的感染進入阻斷實驗，所得結(jié)果與HMEC1一致。提示整合素Β在DV2進入細胞的過程中可能發(fā)揮比較重要的作用。4可溶性整合素ΑVΒ可以有效的阻斷DV2進入HMEC1和ECV304細胞為進一步證明整合素ΑVΒ在介導(dǎo)DV2進入內(nèi)皮細胞中的特異性作用，在實施DV2感染實驗之前，先用可溶性的整合素ΑVΒ或ΑVΒ與病毒孵育?？扇苄缘恼纤卅Β可以有效的阻斷DV2的感染，其阻斷作用具有劑量依賴特性。在25ΜGML的濃度下，僅出現(xiàn)部分阻斷作用，當(dāng)濃度達到10ΜGML時，阻斷率幾乎可達100％。而可溶性整合素ΑVΒ5在10ΜGML的濃度時僅僅可以阻斷約23％的病毒感染N3。BSA則幾乎沒有阻斷作用。結(jié)果提示整合素ΑVΒ可能特異性的與DV2相互作用，從而阻斷病毒感染細胞。5RNA干擾方法下調(diào)整合素Β的表達，可降低DV2的感染率為進一步證實整合素ΑVΒ是否為DV2進入宿主細胞所必需的，我們用RNA干擾的方法下調(diào)整合素Β的表達。構(gòu)建特異性針對人整合素Β的干擾質(zhì)粒P1262和P1932，轉(zhuǎn)染ECV304細胞后48HR用流式細胞計數(shù)法檢測瞬時轉(zhuǎn)染的干擾效果轉(zhuǎn)染干擾質(zhì)粒的細胞平均熒光強度均比對照組轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒PSLIENSER有明顯下降，提示本次構(gòu)建的干擾質(zhì)粒確實可以降低整合素Β的表達水平。在此基礎(chǔ)上，我們通過G418，篩選了低表達整合素Β的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株。經(jīng)過2輪篩選，共得到5個細胞克隆，其中轉(zhuǎn)染P1262的有兩株G6，F(xiàn)8，轉(zhuǎn)染P1932的有三株91，F(xiàn)10，G10，流式細胞計數(shù)顯示G6中整合素Β的表達水平下降最為明顯，僅為對照組的38％。我們將G6克隆命名為ECVΒ。利用上述細胞株進行DV2感染實驗，與對照組相比，在ECVΒ中，DV2的感染率下降了89％，提示整合素Β可能是DV2進入ECV304細胞所必需的。6在CHOK1細胞中重建整合素Β受體可以提高DV2的感染率CHOK1是來源于中國倉鼠卵巢上皮的細胞系，常用于異源整合素的表達。用DV2感染CHOK1細胞后不同時相點取培養(yǎng)上清，進行病毒滴度測定，發(fā)現(xiàn)病毒在CHOK1中的增殖滴度較低，最高滴度為16510PFUML。而ECV304細胞或VERO細胞，在相同的感染條件下，DV2的最高滴度可達13410PFUML和110PFUML。本實驗將表達人整合素Β的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染CHOK1細胞，用G418篩選單克隆細胞，通過流式細胞檢測，建立了穩(wěn)定表達整合素Β的CHOK1細胞。利用該細胞株進行感染實驗，觀察了人整合素Β穩(wěn)定表達的CHOK1對DV2易感性的變化。與轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的對照組CHOK1細胞相比，發(fā)現(xiàn)DV2進入穩(wěn)定表達整合素Β的CHOK1細胞株的病毒量有所增高，增高的比例與整合素Β的表達增高趨勢基本一致，進一步說明了整合素ΑVΒ在DV2感染過程有重要作用。CHOF8細胞是所篩選到的整合素Β表達最高的細胞克隆，感染后0HR進入細胞中的病毒為510PFU，而相同的感染條件下進入ECV304細胞或VERO細胞的病毒可達510PFU。因此認為，整合素Β是DV2進入內(nèi)皮細胞所必需的蛋白，但不是惟一的蛋白，若要確定還有哪些蛋白參與了DV2進入內(nèi)皮細胞的過程，尚需要進一步研究。綜合上述結(jié)果，DV2感染可以誘導(dǎo)整合素Β高水平的表達，整合素Β的表達上調(diào)可能有助于病毒進入宿主細胞。本實驗的結(jié)果為揭示整合素Β在DV感染的病理過程中的作用提供了重要的理論基礎(chǔ)。對于整合素Β與病毒蛋白的結(jié)合位點以及DV2感染上調(diào)整合素Β的分子機制還有待進一步研究。

簡介：復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文提高重組桿狀病毒表達系統(tǒng)的表達量和特異性的研究姓名張靜申請學(xué)位級別碩士專業(yè)微生物學(xué)指導(dǎo)教師鐘江20060527復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文提高重組桿裝病毒的表達量和特異性的研究摘要重組昆蟲桿狀病毒表達系統(tǒng)RECOMBINANTBACULOVIRUSEXPRESSIONSYSTEM在昆蟲細胞中由于具有表達量高，不易形成包涵體，有一定的轉(zhuǎn)錄后修飾等優(yōu)點，已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于真核蛋白的表達。起初，人們以為桿狀病毒只能感染昆蟲鱗翅目家族的成員，然而在1983年VOLKMAN和GOLDSMITH首次發(fā)現(xiàn)了桿狀病毒也可以進入脊椎動物細胞。這一革命性的報道從此揭開了桿狀病毒作為哺乳動物細胞基因轉(zhuǎn)移載體的研究?，F(xiàn)在已有的文獻證明桿狀病毒可以感染多種哺乳動物細胞，尤其是對肝細胞具有較強的偏好性。其具體的進入途徑雖然還不是十分明了，不過研究顯示是和細胞非特異性的胞吞作用相關(guān)。桿狀病毒作為哺乳動物細胞基因轉(zhuǎn)移的載體有很多獨特的優(yōu)點。譬如安全性好，不能復(fù)制傳代；對外源基因的容量大，其核衣殼至少可以容納LOOKB的外源基因；毒副作用小，即使在高MOI感染時也不會引起細胞毒性。鑒于桿狀病毒對于肝細胞較高的感染率，一些試圖將桿狀病毒改造成肝細胞特異性基因表達載體的研究已有所報道。例如在重組桿狀病毒表達框中引入肝癌細胞特異性甲胎蛋白AFP的啟動子和增強子，以此將外源基因選擇性的導(dǎo)入肝癌細胞中。但是桿狀病毒作為真核細胞基因轉(zhuǎn)移的載體還有一些自身無法克服的缺點。如在哺乳動物細胞中不能復(fù)制，引入的外源基因表達量不高等問題。本試驗設(shè)計的目的就在于改造重組桿狀病毒表達載體，以期能提高外源基因的表達量。實驗選用了AFP增強子ENHANCER和HS4絕緣子INSULATOR兩個調(diào)控元件，以及綠色熒光蛋白GFP報告基因來構(gòu)建重組桿狀病毒。其中綠色熒光蛋白表達框為CMV和P10雙啟動子。雙啟動子便于在昆蟲細胞中篩選重組病毒。選用AFPENHANCER一方面是為了維持其肝癌細胞特異性另一方面是為了提高GFP的表達。選用HS4INSULATOR是因為本實驗室已有的研究發(fā)現(xiàn)通過添加和表觀遺傳學(xué)修飾相關(guān)的酶的化學(xué)抑制劑可以提高重組桿狀病毒在哺乳動物細胞中的表達量。而

簡介：本研究從面孔呈現(xiàn)模式、面孔刺激方位、面孔種族特征三個方面，分別選取其各自有代表性的層面設(shè)計出三個實驗，目的在于揭示面孔識別中的某些特性，研究場認知方式對面孔識別的影響。實驗一通過對三種呈現(xiàn)模式全臉既包括外部特征又包括內(nèi)部特征、外部特征臉和內(nèi)部特征臉的比較，研究在不同呈現(xiàn)模式下，不同場認知方式的被試識別面孔的差異。實驗二通過對兩種刺激方位正立和倒立面孔的比較，研究不同場認知方式的被試在識別正立、倒立面孔時的差異。實驗三把目標面孔分為東方人面孔和西方人面孔兩類，結(jié)合被試的性別、場認知方式，比較其在面孔識別中的差異。

簡介：APROJECTREPORTONTHETRANSLATIONCHAPTERFIVEBYZHANGJINGUNDERTHESUPERVISIONOFASSOCIATEPROFESSORZHANGHONGXIAMSWANGXIAOMEIATHESISSUBMITTEDINPARTIALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTSFORTHEDEGREEOFMASTEROFTRANSLMIONANDINTERPRETATIONINTHESCHOOLOFFOREIGNSTUDIESOFANHUIUNIVERSITYMAY，2015摘要本文是一篇翻譯項目報告。翻譯項目的原文選自于威廉克羅夫特與D艾倫克魯斯所著的認知語言學(xué)COGNITIVELINGUISTICS，CROFTCRUSE，2004一書。該書主要介紹了認知語言學(xué)的基本原則和基本方法。譯者選取了該書第五章“多義詞意義邊界的識解”這一主題章節(jié)來進行翻譯實踐活動，并在此基礎(chǔ)上完成項目報告。作為一本學(xué)術(shù)著作，原文文本明顯屬于信息型文本。對于信息型文本的翻譯，首先要注重的是保持原文和譯文在語義上的對等。因此在本次翻譯實踐過程中，譯者翻譯工作的重點是如何正確完整地以中文傳達出與原文相同的概念。為了解決這一問題，譯者在翻譯實踐過程中選取了諾德的文本分析模式作為理論指導(dǎo)，首先確定此次翻譯活動的類型屬于工具型翻譯，翻譯目標是保證譯文和原文實現(xiàn)語義上的對等。在結(jié)合實例的基礎(chǔ)上運用了詞類轉(zhuǎn)譯法、增詞法和減詞法等具體方法，來對翻譯實踐中的問題進行具體的分析。譯者在本次翻譯實踐中得到了以下幾點啟示，首先要重視理論的指導(dǎo)，其次是做好譯前準備工作，查閱相關(guān)平行文本，最后譯者還要熟悉掌握源語和譯語的語言特點，這樣才能在以后的翻譯工作中取得良好的成績。關(guān)鍵詞認知語言學(xué)；翻譯理論；文本分析方法；翻譯策略

簡介：天津師范大學(xué)碩士學(xué)位論文密碼子優(yōu)化的輪狀病毒VP6蛋白在煙草中的高效表達姓名張富杰申請學(xué)位級別碩士專業(yè)植物學(xué)指導(dǎo)教師劉麗麗20080401ROTAVIMSRVISTHEMOSTIMPONANTANDCOMMONCAUSEOFSEVEFEDIA玎HEAININ協(xié)1TS，CHILDRENANDINF抽CY柚IMALWORLDWIDE．INDEVELOPINGCOUNTRIES，ROTAVI九LSMAYCAUSEANESTIMATED18MILLIONCASESOFMODERATELYSEVERE鋤DSEVEREDIA玎HEA鋤DOVER870000DEATHSINTHEYOUNGEACHYEALINDCVELOPEDCOUNTRIES，F(xiàn)OTAVIMSMAYRESULTEDINSUBSTANTIALECONOMICALDAMAGE．FBREXAMPLE，MEDICALEXPENDITUI．EASSOCIATEDWITHROTAVIRUSMAYREACH260000000EACHYEAR，INTHEUNITEDSTATES．BECAUSEOFSIGNIFIC柚TMOFBIDITYANDMORTALITYASSOCIATEDWITHROTAVIMSDIAN．HEA，THEREISA11UFGENTNEEDTODEVELOPROTAVINLSVACCINESTA瑪ETEDFORUSEINEALLYINFANCY．CURRENTLY．PLANTREACTORSYSTEMISCHEAPANDSAFEBIOSYSTEM．WITHTHEDEVELOPMENT0FTHEMOLECULARBIOLOGY；ANDESPECIAUYTHEFASTSTEPOFPLANTGENETICENGINEERING，PEOPLECANREBUILDTHEPLANTINTHEIROWNOPINIONS，ANDCANPRODUCEMANYKINDSOFPRODUCTNEEDEDINPRODUCTION鋤DLIFECHEAPLY柚DE確CIENTLY．TILLECONCEPTOFPLANTREACTOR’柚DESPECIALLYTHECONCEPTOFPRODUCING0佑CINALPROTEINANDENZYMEWITHPL鋤TANDUSINGPLANTDIRECTLYASTLLEORALVACCINE，IS黟ADUALLYRECO薩IZED觚DAACI印TEDBYHUMANBEING．INTHISEXPERIMENT，WECHOSETOBACC0T0PRODUCEVP6PROLEIN．THECODON0PTIMIZEDVP6GENEWASINSERTINTOPLASMIDPBLL21INT，ANDTHEPLANTTRANSFONNATIONVECTORPBLL21一V6UWASCONSTMCTEDTOEXPRESSTHEVP6PROTEIN．BYUSINGTHELEAFDISCC0．CLLLTIVATEDMETHOD，VP6GENEOFROTAVIMSWASTRANSFELLREDINTOTOBACCOCELLRESPECTIVELY11RANSFO砷EDSHOOTSWERESELECTEDONSOLIDIFIEDMEDIUMCONTAINING10蛐AMYCIN．INTE伊ATIONOFTHESEGENESINTOTHEGENOMEOFTOBACCOPLANTSWASCONFIN_ILEDBYPCR．ANDTHESERESULTSINDICATEDTHATTHEVP6WASINLEGRATEDINTOTHETOBACCOGENOMICDNA．THEWESTEMB10TRESULTSHOWEDTHATTHEPROTEINWASEXPRESSEDE位CIENTLY．T11ISRESEARCHPROVIDESANEWMETHODFORNEWROTAVIRUSVACCINE，WLLICHPRESENTSTHEORICALSIGNIFICANCEANDAPPLICATIVEPROSPECT．KEYWORDSCODONOPTIMIZATION，ROTAVIRUSVP6，TRANSGENICTOBACCO，PLANTVACCLNE4

簡介：ADISSERTATIONSUBMITTEDTOTHEGRADUATESCHOOLOFHENANUNIVERSITYINPARTIALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTSFORTHEDEGREEOFMASTEROFMEDICINEBYCHENYANINGSUPERVISORPROF．HANSHUANGYINAPRIL，2012本人鄭果。據(jù)我所發(fā)表或撰寫使用過的材說明并表示在此本本人經(jīng)意河南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的要求，即河南大學(xué)有權(quán)向國家圖書館、科研信息機構(gòu)、數(shù)據(jù)收集機構(gòu)和本校圖書館等提供學(xué)位論文紙質(zhì)文本和電子文本以供公眾檢索、查閱。本人授權(quán)河南大學(xué)出于宣揚、展覽學(xué)校學(xué)術(shù)發(fā)展和進行學(xué)術(shù)交流等目的，可以采取影印、縮印、掃描和拷貝等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文紙質(zhì)文本和電子文本。涉及保密內(nèi)容的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書學(xué)位獲得者學(xué)位論文作者簽名墮壁室攮須主皇學(xué)位論文指導(dǎo)教師簽名2012年4月26日2012年4月26日

簡介：蘇州大學(xué)碩士學(xué)位論文帕金森病患者的認知損害和睡眠障礙研究姓名陳靜申請學(xué)位級別碩士專業(yè)神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師劉春風(fēng)20080401帕金森病患者的認知損害和睡眠障礙研究中文摘要PO000呈正相關(guān)。與年齡P0571、病程PO887、文化程度PO860、MMSE分值PO151、UPDRSIII評分PO078無關(guān)。睡眠障礙組與無睡眠障礙組比較在主觀睡眠質(zhì)量F1、入睡時間F2、睡眠時間F3、睡眠效率F4、睡眠干擾F5、催眠藥物F6這六個因子間存在差異均為P0000，在日間功能障礙F7上無差異PO058。結(jié)論認知損害和睡眠障礙是帕金森病患者重要的非運動癥狀，在疾病的不同階段均可以發(fā)生，嚴重影響患者的生活質(zhì)量。關(guān)鍵詞帕金森病認知損害睡眠障礙非運動癥狀作者陳靜指導(dǎo)老師劉春風(fēng)