半水硫酸鈣-硅酸三鈣復合物對兔骨髓基質干細胞增殖和成骨向分化的影響研究.pdf

1、目的：
　　評價半水硫酸鈣/硅酸三鈣復合骨水泥對兔骨髓基質干細胞(rabbit bonemarrow stromal cells，rBMSCs)增殖和成骨方向分化的生物學行為的影響，為其成為骨缺損替代材料提供生物學依據。
　　方法：
　　1、分組:實驗組為半水硫酸鈣/硅酸三鈣復合物，對照組為半水硫酸鈣，分別制備各組材料的浸提液，常規(guī)培養(yǎng)液為陰性對照。
　　2、rBMSCs的原代培養(yǎng)及鑒定。
　　3、噻唑藍(

2、methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)法分析兩組材料對骨髓基質干細胞的毒性，篩選材料適宜濃度。
　　4、流式細胞儀檢測細胞周期并計算增殖指數，分析兩種材料對骨髓基質干細胞增殖的影響。
　　5、采用堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)和骨鈣素(osteocalcin，OCN)含量測定技術分析兩種材料對rBMSCs成骨向分化的影響。
　　結果：
　　1、細胞原代培

3、養(yǎng)與鑒定:顯微鏡下可見，原代rBMSCs以長梭形為主，融合的細胞以放射狀或旋渦狀方式排列生長。5代以內傳代細胞形態(tài)與原代細胞相似，在傳代的第3天到第6天細胞進入對數增殖期。經成骨誘導液定向誘導分化后，堿性磷酸酶染色顯示，誘導細胞的細胞質呈深藍色;茜素紅染色見誘導細胞胞間有明顯深染的鈣結節(jié)形成。
　　2、MTT檢測結果顯示:與對照組相比適宜稀釋比(1/40)的半水硫酸鈣/硅酸三鈣復合物浸提液對rBMSCs無毒性作用，可以促進細胞的增

4、殖(P＜0.05）。選擇1/40稀釋比的材料浸提液用于后續(xù)實驗。
　　3、流式細胞儀檢測細胞周期:rBMSCs在兩組材料浸提液中的增殖指數均大于陰性對照組(P＜0.05），但兩組材料間差異不具有統計學意義。這表明適宜稀釋比的半水硫酸鈣/硅酸三鈣復合物能促進rBMSCs的增殖。
　　4、ALP定量檢測:10、14d時，rBMSCs在半水硫酸鈣/硅酸三鈣復合物浸提液中ALP的表達量高于陰性對照組和純半水硫酸鈣組（P＜0.05），

5、而后兩組間ALP表達量差異不具有統計學差異。表明半水硫酸鈣/硅酸三鈣復合物能促進rBMSCs的分化。
　　5、OCN定量檢測:三組細胞的OCN值從10、14、17、21 d隨時間逐漸升高，在14、17、21 d時，rBMSCs在半水硫酸鈣/硅酸三鈣復合物浸提液中OCN的表達量高于陰性對照組和純半水硫酸鈣組(P＜0.05），而后兩組間OCN表達量差異不具有統計學意義。表明半水硫酸鈣/硅酸三鈣復合物能促進rBMSCs的分化。