阿薩希毛孢子菌體外抗氧化誘導及其生物學特性研究.pdf

1、目的:
　　真菌抗氧化應激與其感染機制密切相關(guān)，也是近年來的研究熱點。獲得穩(wěn)定的抗氧化菌株是深入研究其抗氧化機制的前提。阿薩希毛孢子菌Trichosporon asahii(T.asahii)是重要的條件致病菌，其感染機制的相關(guān)研究匱乏。本實驗研究體外能否用常用氧化劑過氧化氫(hydrogen peroxide，H2O2)和亞硫酸氫鈉甲萘醌(menadione sodium bisulfate，MSB)誘導T.asahii產(chǎn)生抗氧

2、化性，以及誘導獲得的抗氧化表型的穩(wěn)定性，并觀察誘導前后菌株的生理學特性變化。
　　方法:
　　1.將T.asahii臨床標準株CBS2479和環(huán)境株CBS8904在H2O2或MSB濃度逐漸梯級倍增的YPD液體培養(yǎng)基中傳代，直至無法誘導為止。取誘導終末代菌株在不含氧化劑的YPD液體培養(yǎng)基中連續(xù)傳代10次，進行誘導回復。測定誘導前、誘導終末代、回復終末代等不同階段菌株的過氧化氫酶(catalase，CAT)和超氧化物歧化酶(su

3、peroxide dismutase，SOD)活性，并應用SPSS20.0軟件分析酶學檢測數(shù)據(jù)。
　　2.取誘導前、誘導終末代、回復終末代的菌株行肉眼形態(tài)和光鏡下形態(tài)觀察。
　　3.參照美國臨床和實驗室標準協(xié)會推薦的M27-A3標準測定兩種氧化劑誘導前、誘導中期、誘導末期、回復中期、回復末期的菌株對抗真菌藥氟康唑的MIC值和對氧化劑H2O2和MSB的MIC值。
　　結(jié)果:
　　1.抗氧化酶活性變化測定經(jīng)H2O2誘

4、導后，CBS2479菌株誘導末期的CAT值、SOD值分別比誘導前升高了約2.15、2.97倍;CBS8904菌株誘導末期的CAT值、SOD值分別比誘導前升高了約1.79、1.79倍。經(jīng)MSB誘導后，CBS2479菌株誘導末期的CAT值、SOD值各比誘導前上升了約3.36、2.68倍;CBS8904菌株誘導末期的CAT值、SOD值分別比誘導前升高了約2.27、2.57倍。經(jīng)H2O2和MSB誘導后，CBS2479菌株的CAT和SOD活性均顯

5、著升高(P＜0.05)?；貜秃蟮腃AT、SOD均比誘導前高（P＜0.05）。CBS2479-H2O2、CBS2479-MSB菌株回復后的CAT比誘導末期下降（P＜0.05），而SOD則無統(tǒng)計學差異。經(jīng)H2O2和MSB誘導后，CBS8904菌株的CAT和SOD活性均比誘導前升高(P＜0.05)。CBS8904-H2O2菌株回復后的SOD比誘導前高（P＜0.05），但回復后CAT與誘導前比較無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。CBS8904-MS

6、B菌株回復后的CAT和SOD值均比誘導前升高（P＜0.05）。CBS8904-H2O2、CBS8904-MSB菌株回復后的CAT、CBS8904-MSB菌株回復后的SOD均比誘導末期下降(P＜0.05)，而CBS8904-H2O2菌株回復后的SOD與誘導末期相比無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。
　　2.形態(tài)學變化誘導后菌落肉眼形態(tài)發(fā)生一定改變;光鏡下可見CBS2479、CBS8904分別由誘導前的菌絲狀、孢子狀變?yōu)檎T導后呈假菌絲與孢

7、子混合狀態(tài)。
　　3.藥物敏感性變化測定T.asahii分別在H2O2、MSB濃度梯級倍增的YPD液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，經(jīng)過4次傳代后，CBS2479-H2O2、CBS8904-H2O2、CBS2479-MSB、CBS8904-MSB菌株對氟康唑、H2O2和MSB的MIC值均為誘導前MIC值的2倍。經(jīng)歷回復性實驗以后，CBS8904-H2O2、CBS8904-MSB菌株的MIC H2O2均恢復到誘導前水平，但其余均與誘導第4代的MIC