2型谷氨酰胺轉氨酶過表達對乳腺癌MCF-7細胞耐藥性的影響及機制探討.pdf

1、目的：探討2型轉谷氨酰胺酶（TG2）過表達對乳腺癌MCF-7細胞化療耐藥的影響及其相關機制。
　　方法：⑴以TG2慢病毒過表達載體構建轉染細胞，設3組：TG2組即轉染過表達TG2組、CON組即不轉染空白組、NC組即轉染陰性對照組。各組在培養(yǎng)基中培養(yǎng)。轉染72h后，以嘌呤霉素1ug/ml持續(xù)篩選5天，熒光顯微鏡觀察慢病毒的感染效率。熒光定量PCR檢測各組的TG2的mRNA表達量，Western-blot技術檢測各組中TG2蛋白的表達

2、情況。⑵各組細胞都用阿霉素處理培養(yǎng)，用MTT法檢測阿霉素對各組細胞處理后的半數(shù)致死率（IC50），細胞流式檢測各組的凋亡情況。⑶進一步用Western-blot技術檢測各組中凋亡相關蛋白BCL-2、capase-3，以及PAKT/AKT的表達情況。⑷用TG2抑制劑MDC處理TG2組后檢測TG2、BCL-2、Capase-3，以及PAKT/AKT表達和IC50情況。
　　結果：①TG2組、CON組、NC組比較，TG2組的TG2轉錄m

3、RNA和蛋白表達比CON組和NC組水平明顯升高，有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。②MTT結果顯示TG2組IC50為（40.7±3.56）ug/ml，與CON組（17.4±1.45）ug/ml和NC組（22.7±2.0）ug/ml比較差異有統(tǒng)計學（。FCM顯示TG2組的凋亡率為（38.50±5.50）％，與CON組(87.4±12.5)%和NC(53.1±4.7)%組比較有統(tǒng)計學意義。③Western-blot結果顯示，TG2組比CON組C

4、apase-3的表達下降，而BCL-2、AKT/P-AKT表達上升（P＜0.05）。與NC組比較差異無統(tǒng)計學意義。④經過TG2抑制劑MDC處理TG2組的AKT表達降低差異有統(tǒng)計學意（P＜0.05），而BCL-2、Capase-3差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），但隨MDC濃度增加在一定范圍內對阿霉素的IC50值下降有統(tǒng)計學意義。
　　結論：⑴乳腺癌MCF-7細胞中TG2的過表達會使其阿霉素耐藥性增加，并且可以被其抑制劑抑制。⑵TG