RB-P53調控網(wǎng)絡在乳腺癌進展和轉移中的調控機制.pdf

1、目的：應用羥基脲（HU）和阿霉素（ADM）誘導乳腺癌細胞系DNA損傷，探討RB和P53在乳腺癌DNA損傷以及上皮間質性轉化（EMT）中的作用，從而探索RB-P53調控網(wǎng)絡在乳腺癌進展和轉移中的調控機制。
　　方法：使用HU和ADM兩種藥物分別誘導乳腺癌細胞系（MCF-7、SKBR3、MDA-MB468）DNA損傷，應用Western blot技術檢測RB和P53的表達情況，分別應用流式細胞技術和MTT技術檢測細胞周期和細胞增殖活力

2、；然后采用轉染技術敲低MCF-7細胞系RB的表達，檢測HU和ADM作用前后RB和P53的表達情況以及細胞周期和細胞增殖活力；最后分別抑制MCF-7（表達野生型P53wt）、MCF-10A（表達野生型P53wt）和SKBR3（表達突變型P53mt）細胞系中RB/P53的表達，應用RT-PCR技術和Western blot技術檢測RB、P53和EMT相關標志蛋白（如E-cadherin和snail）的表達水平。
　　結果：HU作用于三

3、種乳腺癌細胞系（MCF-7、SKBR3和MDA-MB-468）均誘導了G1/S期阻滯，HU作用于MCF-7使P53wt和RB表達上調，HU作用于MDA-MB-468后P53mt表達變化不顯著，HU作用于SKBR3后P53mt表達下調而RB表達上調，說明突變型P53失去了監(jiān)控細胞周期的功能；HU洗脫后，MCF-7和SKBR3細胞周期阻滯狀態(tài)較HU洗脫前變化不顯著，而MDA-MB-468由HU洗脫前的G1/S期阻滯轉變?yōu)镠U洗脫后的G2/M

4、期阻滯。HU和ADM均可以抑制MCF-7細胞系增殖，并且敲低RB可以降低其抑制細胞增殖的作用；敲低RB可使三個細胞系（MCF-7、MCF10A和SKBR3）的P53表達水平均降低，也可以促使HU誘導的MCF-7細胞周期阻滯狀態(tài)由G1/S期阻滯轉變?yōu)镚2/M期阻滯以及ADM誘導的G2/M期阻滯更加明顯。在MCF-7細胞中，敲低RB或P53均可下調E-cadherin表達和上調snail表達，RB和P53雙敲低可引起E-cadherin表達

5、水平的進一步降低和snail表達水平的進一步升高，在正常乳腺上皮細胞MCF10A中，結果與MCF-7類似，而SKBR3細胞E-cadherin表達缺失，P53為突變型，敲低RB可引起snail表達水平明顯升高。
　　結論：在乳腺癌細胞系中，RB和P53wt都參與調控HU和ADM誘導的DNA損傷，且彼此相互依賴，此外，RB還參與調控G2/M期，具體機制有待進一步研究；當RB表達水平下降時，P53wt表達水平隨之下調，乳腺癌細胞系發(fā)生