西瑞香素藥代動(dòng)力學(xué)及對(duì)人乳腺癌細(xì)胞的增殖抑制作用研究.pdf

1、西瑞香素（7-羥基-6-甲氧基-3,7,-dicoumarylether），是瑞香烷類的原酸酯二萜化合物，是從瑞香科植物中提取出來的有效成分。西瑞香素的藥效學(xué)和毒理學(xué)研究表明該化合物具有較低的毒性，具有較好的抗病毒、抗腫瘤活性，對(duì)人骨肉瘤、宮頸癌、鼻咽癌、肺癌具有抗腫瘤作用，對(duì)乙肝病毒的表達(dá)也具有抑制作用。西瑞香素有望成為新型的抗病毒抗腫瘤藥物，具有較好的開發(fā)前景。西瑞香素的非臨床代謝動(dòng)力學(xué)以及細(xì)胞生物學(xué)研究有利于揭示該藥物在動(dòng)物體內(nèi)的

2、動(dòng)態(tài)變化規(guī)律以及在體外的抗腫瘤活性，為西瑞香素的質(zhì)量評(píng)價(jià)和進(jìn)一步的研究提供依據(jù)。
　　目的：對(duì)大鼠進(jìn)行西瑞香素靜脈注射的藥代動(dòng)力學(xué)研究，以揭示該藥物在大鼠體內(nèi)的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律；同時(shí)對(duì)西瑞香素的抗腫瘤作用進(jìn)行了研究，為進(jìn)一步開發(fā)利用此藥提供了依據(jù)。
　　方法：藥動(dòng)學(xué)研究：采用HPLC法測(cè)定血漿中西瑞香素的藥物濃度，首先建立了西瑞香素的方法學(xué)，并進(jìn)行方法學(xué)確證，考察專屬性、精密度、準(zhǔn)確度、回收率、穩(wěn)定性；給藥前24h大鼠禁食，股靜

3、脈注射西瑞香素，給藥后5min、10min、15min、20min、30min、1h、1.5h、2.5h、3h、6h、9h、10h定時(shí)眼底靜脈叢取血，肝素抗凝后，血漿采用甲醇和乙酸乙酯沉淀蛋白質(zhì)，12000 r/min離心5min，吸取上清液血漿置-20℃冷凍保存，離心后的上清液在30℃氮?dú)饬鞔蹈?，殘?jiān)昧鲃?dòng)相溶解、超聲、渦旋后再離心，取上清液進(jìn)樣分析，用BAPP軟件處理，得到相應(yīng)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)；藥效學(xué)研究：用不同濃度的西瑞香素（35

4、μg/ml、50μg/ml、65μg/ml、80μg/ml）和空白溶劑對(duì)照組（全培養(yǎng)基組）干預(yù)對(duì)數(shù)期人乳腺癌MCF-7細(xì)胞24h、48h、72h后，CCK-8法測(cè)定西瑞香素對(duì)人乳腺癌細(xì)胞的增殖抑制作用，用倒置顯微鏡觀察結(jié)果。
　　結(jié)果：在0.05~20.0μg/mL線性關(guān)系良好，R2大于0.99，最低定量限為0.05μg/mL；低、中、高濃度（0.1μg/mL、5.0μg/mL、15.0μg/mL）質(zhì)控樣品的提取回收率分別是83.

5、84％、85.08%、86.40%，低、中、高濃度質(zhì)控內(nèi)標(biāo)物的提取回收率分別是90.9%、90.4%、91.1%；低、中、高濃度的西瑞香素的日內(nèi)精密度分別是10.64%-16.28%、4.30%-6.40%、1.39%-3.44%，日間精密度分別是12.80%、5.04%、2.15%，RSD%均小于15%；準(zhǔn)確度分別為95.88%、95.84%、95.04%，RSD%均在±15%之內(nèi)；實(shí)驗(yàn)條件下藥物的穩(wěn)定性良好；大鼠股靜脈注射西瑞香素的

6、平均分布相半衰期為0.06±0.02h，平均消除相半衰期為4.01±2.93h，AUC為0.56±0.26ug·h·ml-1；濃度為35ug/mL的西瑞香素在24h、48h、72h對(duì)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞抑制率為11.32%、12.55%、20.20%，濃度為50ug/mL的西瑞香素在24h、48h、72h對(duì)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞的抑制率為14.07%、17.66%、30.48%，濃度為65ug/mL的西瑞香素在24h、48h、72h對(duì)

7、人乳腺癌MCF-7細(xì)胞的抑制率為15.87%、28.37%、47.59%，濃度為80μg/ml的西瑞香素在24h、48h、72h對(duì)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞的抑制率為18.62%、39.57%、62.58%。
　　討論：本實(shí)驗(yàn)建立的西瑞香素HPLC檢測(cè)方法高效、專屬性高、靈敏度高，可對(duì)后續(xù)在犬或人血漿藥動(dòng)學(xué)研究的方法學(xué)探索提供方法學(xué)的依據(jù)；西瑞香素在大鼠體內(nèi)半衰期較短，不利于藥效的維持，可考慮在保留西瑞香素原來基礎(chǔ)上進(jìn)行結(jié)構(gòu)的修飾，以