5-羥色胺調(diào)控奶牛乳腺上皮細(xì)胞(MAC-T)增殖的機(jī)制研究.pdf

1、5-HT被認(rèn)為是一種重要的泌乳穩(wěn)態(tài)和退化局部調(diào)控因子。本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)5-HT通過改變Bax/Bcl-2的值雙向調(diào)控奶牛乳腺上皮細(xì)胞（MAC-T）的命運(yùn)，即短時(shí)間5-HT處理，促進(jìn)MAC-T細(xì)胞的增殖，抑制凋亡；而長(zhǎng)時(shí)間5-HT處理抑制MAC-T細(xì)胞的增殖，促進(jìn)凋亡。但其影響MAC-T細(xì)胞增殖的機(jī)制尚需進(jìn)一步明確和確證。5-HT作為乳腺內(nèi)局部產(chǎn)生的活性物質(zhì)，其作用與其轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝、受體以及與其他因子的互作有關(guān)。本論文在本實(shí)驗(yàn)室前期研究

2、基礎(chǔ)上，從以上三個(gè)方面進(jìn)一步探尋5-HT調(diào)控細(xì)胞增殖的機(jī)制。
　　為了驗(yàn)證5-HT對(duì)細(xì)胞增殖的調(diào)控是否與轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝過程相關(guān)，本研究利用RT-PCR技術(shù)在奶牛乳腺組織中檢測(cè)到SERT和5-HT分解酶（Monoamine oxidase，MAO）的表達(dá)，但在MAC-T細(xì)胞中僅檢測(cè)到MAO的表達(dá)，未能檢測(cè)到SERT的表達(dá)。因此，5-HT對(duì)MAC-T細(xì)胞增殖的調(diào)控與其轉(zhuǎn)運(yùn)過程無關(guān)。
　　本實(shí)驗(yàn)室前期研究表明MAC-T細(xì)胞表達(dá)多種亞型

3、的5-HT受體（5-HTR1B，2A，2B，4和7等），并發(fā)現(xiàn)5-HT對(duì)MAC-T細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用是通過1B、4亞型受體來實(shí)現(xiàn)的。本論文對(duì)該結(jié)果進(jìn)行了確證，并對(duì)信號(hào)通路進(jìn)行了探索。結(jié)果顯示，單獨(dú)5-HT（20μM）處理MAC-T細(xì)胞24h，mTOR蛋白的相對(duì)表達(dá)量不受影響，但5-HT（20μM）與1B（SB224289）或4亞型（SB204070）受體拮抗劑同時(shí)處理MAC-T細(xì)胞24h，mTOR、eEF2和JAK2、STAT5蛋白表達(dá)

4、顯著下降，而4EBP1和S6K1蛋白表達(dá)變化不明顯。這提示5-HT對(duì)MAC-T增殖的誘導(dǎo)作用是通過1B、4亞型受體激活mTOR-eEF2和JAK2-STAT5信號(hào)通路來實(shí)現(xiàn)的。
　　5-HT在機(jī)體中不是單獨(dú)起作用，而是與其他因子共同作用。有研究證明催乳素（Prolactin，PRL）可以促進(jìn)5-HT的分泌，并且研究過程中我們觀察到在正常培養(yǎng)基和在含催乳激素培養(yǎng)基中取得的結(jié)果有一定差異。我們推測(cè)，5-HT可能與PRL互作，共同調(diào)控乳

5、腺上皮細(xì)胞的功能。因此，本研究對(duì)此進(jìn)行了初步探索，發(fā)現(xiàn)PRL與5-HT共同處理，細(xì)胞增殖速度和mTOR的表達(dá)水平均顯著高于5-HT或PRL單獨(dú)處理組。這表明5-HT與PRL互作，激活mTOR信號(hào)通路，促進(jìn)MAC-T細(xì)胞增殖。
　　總之，上述結(jié)果提示,(1)5-HT與1B、4亞型受體結(jié)合，激活mTOR-eEF2和/或JAK2-STAT5信號(hào)通路，促進(jìn)MAC-T細(xì)胞增殖。(2）5-HT與PRL互作，共同激活mTOR信號(hào)通路，促進(jìn)MAC