重組人乳頭瘤病毒31型L1蛋白的基礎及應用研究.pdf

1、廈門大學學位論文原創(chuàng)性聲明本人呈交的學位論文是本人在導師指導下，獨立完成的研究成果。本人在論文寫作中參考其他個人或集體已經發(fā)表的研究成果，均在文中以適當方式明確標明，并符合法律規(guī)范和《廈門大學研究生學術活動規(guī)范(試行)》。另外，該學位論文為(夏寧邵教授)課題(組)的研究成果，獲得(夏寧邵教授)課題(組)經費或實驗室的資助，在(夏寧邵教授)實驗室完成。(請在以上括號內填寫課題或課題組負責人或實驗室名稱，未有此項聲明內容的，可以不作特別聲明

2、。)聲明人(簽名)：耋矸勾畛年乃月’1日摘要摘要人乳頭瘤病毒(Humanpapillomavirus，HPV)是一種小的無包膜DNA病毒，能夠引起生殖器部位的多種良性及惡性病變。其中以宮頸癌危害最為嚴重。目前，世界范圍內每年宮頸癌新發(fā)病例約50萬，位居女性常見癌癥的第二位，其中86％的病例發(fā)生在發(fā)展中國家。研究表明，全球803％的宮頸癌與高危型的HPVl6(535％)、18(172％)、45(67％)和31(29％)相關?，F(xiàn)有的第一個宮

3、頸癌疫苗已能夠對HPVl6／18兩種高危型病毒的感染提供保護，但是對上述兩種型別之外的高危HPV保護率有限。對于第二代宮頸癌疫苗的一個主要要求就是必須能夠包含更多的高危型別，解決第一代疫苗覆蓋范圍有限這一嚴重不足。HPV31作為一個重要的高危HPV型別是第二代宮頸癌疫苗所必需包含的組份。本研究對HPV31L1蛋白的表達菌株構建，表達及純化工藝，免疫原性等方面開展了研究，以期為包含HPV31成份的第二代宮頸癌疫苗研究奠定基礎。本研究構建了

4、pTOT731N27C表達載體，轉化大腸桿菌Er2566，以非融合的形式可溶表達了HPV31N27CL1蛋白，并經過SP、CHTII和Butyl等一系列色譜層析純化后，其純度高于90％。純化的Ll蛋白在適宜pH和鹽濃度的條件下，可以組裝成病毒顆粒(VirusLikeParticles，VLPs)。進一步將小量制備工藝放大到中試規(guī)模，所制備的VLP原液分子量、細菌內毒素和外源DNA含量等質量指標能符合中國藥典要求。本研究將HPV31VLP

5、吸附于氫氧化鋁佐劑上，制備HPV31單價疫苗。該疫苗在小鼠試驗中被證實能夠誘導產生中和抗體：免后5week中和抗體滴度達到104，于2week和6week分別加強免疫，則中和抗體滴度可上升至105。而HPV31VLP疫苗的效力ED50為000499。本研究中還使用HPV31VLP免疫小鼠，獲得了HPV31型單克隆抗體16株，其中有4株兔多抗血清阻斷率超過50％的優(yōu)勢單抗，可作為HPV31VLPs質控用單抗。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)不同的終止密