CK10、CK13、CK14、CK19在口腔扁平苔蘚中的表達研究.pdf

1、目的：口腔扁平苔蘚(oral lichen planus，OLP)是發(fā)生在口腔粘膜的一種常見的慢性炎性疾病，同時可伴有皮膚損害。OLP病變往往局限于一個或幾個部位，最常見的部位為頰粘膜后側(cè)，其次為舌部、牙齦。OLP病損多變，以白色或灰白色網(wǎng)狀條紋最多見(約占4l％左右)，此外也可表現(xiàn)為紅斑、角化、大皰或糜爛等其他損害形式。OLP組織學(xué)上的特點表現(xiàn)為上皮過度角化或過度不全角化，基底細胞液化變性以及基底膜斷裂和基底膜下T細胞帶狀浸潤。這些表

2、現(xiàn)提示細胞介導(dǎo)的自身免疫反應(yīng)對基底細胞的損傷，但OLP病損形成的初始抗原和致病的確切途徑目前仍然不清楚，因此其臨床治療相當困難。角質(zhì)細胞(keratinocyte)是為人們逐漸認識的一種重要免疫調(diào)節(jié)細胞，而細胞角蛋白(Cytokeratin，CK)的表達與上皮角質(zhì)細胞的增殖分化密切相關(guān)。CK是中間纖維(intermediate filament，IF)家族成員之一，主要在上皮細胞中表達。目前發(fā)現(xiàn)的CK至少有20種，人們將它們分別命名為C

3、K1-CK20，并根據(jù)分子量和等電點分Ⅰ型和Ⅱ型。CK對維持上皮細胞的形態(tài)和連續(xù)性非常重要，而且它們具有高度的保守性及組織特異性和分化特異性，并與細胞的分化、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、遷移、轉(zhuǎn)化和凋亡等生命活動息息相關(guān)。CK總是以特異角蛋白對的形式表達于不同的上皮，被認為是上皮分化的不同類型和階段的分子標志：CK5/CK14為基底層標志，CK1/CK10為終末分化標記，CK4／CK13是分層標志，CK14、CK19可為癌前病變的輔助診斷指標。由于CK在

4、復(fù)層上皮中表達的多樣性和廣泛性，目前有關(guān)CK在OLP病損中的研究國內(nèi)尚未見報道，國外也不多見，而且研究結(jié)論不完全一致。系統(tǒng)檢測OLP病損口腔粘膜和健康人群正?？谇徽衬ぶ谐Ｒ奀K10、CK13、CK14、CK19的異同，明確OLP病變中細胞角蛋白在表達類型和分布上的可能改變，分析其改變與OLP的發(fā)生、預(yù)后之間的可能關(guān)系，有利于OLP的治療和預(yù)防，為進一步研究OLP的病因，更好的闡述OLP的發(fā)病機理打下基礎(chǔ)。 方法： 1．標

5、本的收集：按照OLP臨床診斷標準和病理報告結(jié)果，在門診收集17例頰部OLP患者的活檢標本。對照組7例，取自外科手術(shù)患者手術(shù)切除的正常頰粘膜組織。 2．標本的固定：所有的標本術(shù)后立即用10％的中性福爾馬林固定24小時。 3．制做石蠟塊：固定好的標本沖洗、脫水、透明、浸蠟、包埋。 4．切片：每個標本5微米連續(xù)切片七張，一張用于常規(guī)HE染色，一張用PBS代替一抗做陰性對照，其他幾張分別做CK10、CK13、CK14、C

6、K19的免疫組化染色。 5．切片的免疫組化染色：采用抗CK的單克隆抗體(monoclonalantibodies，MAbs)，應(yīng)用SP(streptavidin-peroxidase，鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶)法進行CK的免疫組化染色。 6．切片的診斷：HE切片的診斷由兩位有經(jīng)驗的病理醫(yī)生盲法讀片確認。免疫組化切片的診斷在參照陽性對照切片結(jié)果，在排除邊緣效應(yīng)、非特異染色等干擾因素的基礎(chǔ)上，實驗切片上皮細胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)

7、棕黃色顆粒，判斷為陽性細胞，否則為陰性。 7．結(jié)果計數(shù)標準：根據(jù)口腔粘膜上皮的特點及單抗的特異性，根據(jù)細胞染色的強度和著色細胞所占的比例進行綜合評分。 8．統(tǒng)計分析：采用統(tǒng)計軟件SPSS13.0進行統(tǒng)計分析，非參數(shù)等級資料的兩樣本比較用秩和檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果： 1．在正常非角化頰粘膜上皮中CK10通常無表達，或基底上層個別細胞表達，在正常不全角化的頰粘膜上皮中CK10通常表達于基

8、底上層，陽性細胞趨向表層，為弱表達或中等強度的表達；在OLP的病變上皮中CK10的表達強度較正常組不同程度的增強，為中等強度表達或強表達，同時表達范圍也有所增寬，有時可表達于整個基底上層，經(jīng)統(tǒng)計分析P<0.05，證明差異有統(tǒng)計學(xué)意義：雖然OLP中CK10的表達隨著上皮角化程度的增加表達強度有所增強，但經(jīng)統(tǒng)計分析P>0.05，差異無明顯統(tǒng)計學(xué)意義。 2．在正常非角化頰粘膜上皮中CK13通常表達于基底上層，主要集中于棘細胞層和顆粒層

9、，為中等強度的表達或強表達：與前者相比在正常不全角化的頰粘膜上皮中CK13表達強度降低，一般為弱表達，表達范圍也不同程度的縮??；在頰部OLP病變上皮中CK13的表達較正常組不同程度的減弱，主要表達于基底上層的棘細胞中，有時甚至無表達，與正常對照組比較P<0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；雖然OLP中CK13的表達與上皮的角化程度有一定的關(guān)系，角化越強表達越弱，但經(jīng)統(tǒng)計分析P>0.05，差異無明顯統(tǒng)計學(xué)意義。 3．在正常非角化的頰粘膜上

10、皮中CK14通常集中表達于基底層，偶爾可以擴散至基底上淺層，一般為中等強度或強表達；與前者比較在不全角化粘膜中CK14的表達不同程度的增強；在頰部0LP的病變上皮中CK14的表達強度較正常組不同程度的增強，尤其表達范圍增寬，有時甚至可以上皮全程表達，經(jīng)統(tǒng)計分析P<0.05，證明差異有統(tǒng)計學(xué)意義；雖然OLP中CK14的表達與上皮的角化程度有一定的關(guān)系，角化越強表達越強，但經(jīng)統(tǒng)計分析P>0.05，差異無明顯統(tǒng)計學(xué)意義。 4.CK19

11、主要表達于單層上皮，在正常頰粘膜的復(fù)層上皮的中表達陰性，同樣在頰部OLP病損的復(fù)層上皮中亦未見CK19表達。 結(jié)論： 1.OLP中伴隨著CK10、CK14的過度表達，出現(xiàn)CK13表達下調(diào)，而CK19表達陰性。 2．OLP中CK10、CK14的過度表達及CK13的表達下調(diào)分別與OLP的異常角化、增殖和分化有關(guān)，這也許是機體的一種防御反應(yīng)，但同時也提示OLP存在惡性轉(zhuǎn)變的可能，而其癌變潛能的大小尚有待進一步研究。