高精度定量毛細(xì)管電泳及高精度定量膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜的研究.pdf

1、毛細(xì)管電泳由20世紀(jì)80年代發(fā)展至今，由于其具有很高的分離效能，溶液和樣品消耗極少，儀器相對(duì)簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，已經(jīng)越來越廣泛地應(yīng)用于生物技術(shù)、藥物研發(fā)、醫(yī)療診斷、環(huán)境保護(hù)等各個(gè)領(lǐng)域。然而，這一技術(shù)還存在一定的局限性，特別是在其進(jìn)樣方式方面，嚴(yán)重限制了它在定量分析等方面的發(fā)展。本論文主要是對(duì)高精度定量毛細(xì)管電泳系統(tǒng)和高精度定量膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜系統(tǒng)進(jìn)行研究，研制了高精度定量毛細(xì)管電泳系統(tǒng)，確定了最佳的硬件條件，并首次利用這一系統(tǒng)分析實(shí)際樣品，得

2、到了理想的結(jié)果。另外，首次構(gòu)建了高精度定量膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜系統(tǒng)，使得定量系統(tǒng)應(yīng)用更為廣泛有效，同時(shí)進(jìn)行了方法學(xué)考察和實(shí)際樣品的分析。使這兩種電動(dòng)分析技術(shù)的準(zhǔn)確度和精密度得到極大的提高，從而為其進(jìn)入質(zhì)控和質(zhì)保領(lǐng)域奠定了基礎(chǔ)。 全文由四章組成。主要內(nèi)容包括： 第一章介紹了選題背景和意義。主要介紹了毛細(xì)管電泳和膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜。綜述了兩者的發(fā)展以及在實(shí)際應(yīng)用中的重要地位?；仡櫫嗣?xì)管電泳進(jìn)樣技術(shù)的發(fā)展，概述了采用閥進(jìn)樣的毛

3、細(xì)管電泳技術(shù)的歷史和現(xiàn)狀，歸納總結(jié)了常規(guī)毛細(xì)管電泳進(jìn)樣技術(shù)存在的問題。 第二章的工作主要是建立高精度定量毛細(xì)管電泳系統(tǒng)并且將其優(yōu)化。定量毛細(xì)管電泳系統(tǒng)的搭建：將20 nL的四通進(jìn)樣閥引入毛細(xì)管電泳系統(tǒng)，考察了進(jìn)樣閥在電場(chǎng)中的最佳位置，得出使系統(tǒng)穩(wěn)定運(yùn)行的組建方式，并將自制的電隔離槽引入定量系統(tǒng)，使進(jìn)樣閥隔離在電場(chǎng)之外；定量毛細(xì)管電泳系統(tǒng)的優(yōu)化：分析各段毛細(xì)管的長(zhǎng)度對(duì)柱效的影響，并且考慮空間設(shè)置，得到了最佳的毛細(xì)管長(zhǎng)度。

4、第三章的內(nèi)容主要是對(duì)于定量毛細(xì)管電泳系統(tǒng)的性能測(cè)定以及與傳統(tǒng)進(jìn)樣方法的比較，并將其應(yīng)用到測(cè)定實(shí)際樣品中的咖啡因、可可堿和茶堿的研究中。定量毛細(xì)管電泳系統(tǒng)的性能測(cè)定：以苯甲酸和DMSO的遷移時(shí)間和峰面積的RSD值作為指標(biāo)，考察了定量閥進(jìn)樣、電遷移進(jìn)樣和重力進(jìn)樣的定量精度，用定量毛細(xì)管電泳系統(tǒng)分析測(cè)得的DMSO峰面積的RSD值為1.46％，明顯優(yōu)于兩種傳統(tǒng)進(jìn)樣方法，其中，重力進(jìn)樣法測(cè)得DMSO峰面積的RSD值為2.55％，而用電遷移進(jìn)樣則為

5、1.76％。并且利用這一系統(tǒng)連續(xù)進(jìn)樣，在不切斷電場(chǎng)的條件下，得到更好的定量精度，DMSO遷移時(shí)間的RSD值為0.67％，其峰面積的RSD值為1.26％?？Х纫?、茶堿、可可堿三種生物堿的色譜條件的建立：通過對(duì)緩沖液種類、緩沖液濃度、緩沖液pH值以及電泳電壓的考察，最終確定的色譜條件為：15 mM，pH 9.2的硼砂緩沖液作為背景緩沖液，工作電壓為20 kV。在此條件下三種生物堿分離效果最佳，在此基礎(chǔ)上，對(duì)于茶葉、咖啡、可樂等實(shí)際樣品中的三

6、種生物堿進(jìn)行檢測(cè)，得到理想的效果。 第四章的工作中，首次建立了高精度定量膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜系統(tǒng)，對(duì)其性能進(jìn)行了測(cè)定并與傳統(tǒng)進(jìn)樣方法進(jìn)行了比較，然后利用該系統(tǒng)對(duì)頭孢他啶、頭孢呋辛鈉、頭孢拉定和頭孢曲松鈉進(jìn)行分析檢測(cè)。定量膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜系統(tǒng)的性能測(cè)定：考察了電滲流以及膠束濃度對(duì)柱效的影響，并以苯甲酸、苯、甲苯和DMSO的遷移時(shí)間和峰面積的RSD值作為指標(biāo)，考察了定量閥進(jìn)樣、電遷移進(jìn)樣和重力進(jìn)樣的定量精度，得到定量閥進(jìn)樣定量精度遠(yuǎn)

7、遠(yuǎn)優(yōu)于傳統(tǒng)進(jìn)樣方法，以DMSO為例，用定量進(jìn)樣法進(jìn)行進(jìn)樣分析，其峰面積的RSD為1.89％，低于用重力進(jìn)樣得到的5.48％以及用電遷移進(jìn)樣得到的2.32％。頭孢類藥物的色譜條件的建立：通過對(duì)緩沖液種類、SDS濃度、緩沖液濃度、緩沖液pH值以及電泳電壓的考察，最終確定的色譜條件為：10 mM的硼砂、20 mMSDS（pH8.5）作為背景緩沖液，工作電壓為18 kV。在此條件下四種頭孢類藥物分離效果最佳，在此基礎(chǔ)上，對(duì)四種頭孢類藥物的注射制