白細胞介素-17對肝星狀細胞的增殖及細胞周期的影響.pdf

1、目的：研究白細胞介素-17是否能夠刺激肝星狀細胞增殖,并研究其對肝星狀細胞的細胞周期變化的影響。
　　 方法：以體外培養(yǎng)的肝星狀細胞為研究對象,分別以200、400、600、800、1000μg/L(終濃度)的IL-17刺激,以不加IL-17的肝星狀細胞為空白對照組,將細胞接種于含不同濃度IL-17的1640培養(yǎng)液中,置于CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),分別培養(yǎng)24,48,72 h,每日作細胞計數(shù),并繪制細胞生長曲線。取對數(shù)生長期的HSC細

2、胞,胰酶消化后制成細胞懸液,接種于96孔平底培養(yǎng)板上,培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后分別加入0、200、400、600、800、1000μg/L(終濃度)的IL-17,每組設(shè)5個復(fù)孔,分別培養(yǎng)24、48、72 h后,加入MTT后用酶標儀測吸光度值。將傳代的HSC接種于6孔培養(yǎng)板中,每組3復(fù)孔,同步化處理12h,然后使用1640培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),同時加入0、200、400、600、800、1000μg/L(終濃度)的IL-17,CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)

3、,分別于48h、72 h后取樣,收集細胞,碘化丙啶染色后用流式細胞儀檢測細胞周期。
　　 結(jié)果：
　　 1.與空白對照組相比,不同濃度的IL-17刺激肝星狀細胞后,細胞計數(shù)結(jié)果顯示,24 h后肝星狀細胞數(shù)量增加不明顯,48 h后細胞數(shù)量明顯增加,72 h后細胞數(shù)量增加最明顯。
　　 2.與空白對照組相比,不同濃度的IL-17在24 h后對細胞均無明顯的刺激作用(P均＞0.05),48 h后400,600,800μ

4、g/L的IL-17對細胞的刺激增殖作用明顯增加,72 h后400,600,800μg/L的IL-17對細胞的刺激增殖作用最明顯,而800μg/L的IL-17在細胞培養(yǎng)72 h后對細胞的刺激增殖作用最明顯(P＜0.01);然而,1000μg/L的IL-17對細胞則有抑制作用(P＜0.01),主要表現(xiàn)為24 h后抑制作用不明顯,48 h開始出現(xiàn)抑制作用,72 h后對細胞的抑制作用最明顯。
　　 3.與空白對照組相比,不同濃度的IL-

5、17刺激肝星狀細胞24h后對細胞的周期變化影響不明顯,48h后400,600,800μg/L的IL-17所刺激的肝星狀細胞S期細胞比例開始升高,G0/G1期的細胞比例開始降低,72 h后400,600,800μg/L的IL-17所刺激的肝星狀細胞S期細胞比例明顯升高,G0/G1期細胞比例顯著降低,細胞增殖以S期為主。在細胞同等增殖時間范圍內(nèi),細胞增殖指數(shù)隨著IL-17濃度的增長而增加,800μg/L的IL-17刺激的肝星狀細胞增殖指數(shù)最

6、高,而800μg/L的IL-17在72 h后對肝星狀細胞的刺激增殖作用最明顯。1000μ/L的IL-17則抑制細胞周期,24小時后對細胞周期的抑制作用不明顯,48h后表現(xiàn)出明顯的抑制作用,72h后對細胞的抑制作用最明顯,其能使細胞周期停滯于G1期(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 1.IL-17能刺激肝星狀細胞的增殖,在一定的程度和范圍內(nèi)呈現(xiàn)劑量和時間依賴性。800μg/L的IL-17在細胞培養(yǎng)72 h后對細胞的刺激