中國大棗資源化學研究.pdf

1、本論文研究工作為國家自然科學基金項目-“大棗與大戟類藥材配伍減毒機理研究”和《中國藥典》2010年版“大棗藥材質量標準修訂”項目的部分研究內容。 本論文共分兩章內容。第一章系統地總結了大棗種質資源、化學成分、藥理效應、營養(yǎng)成分及質量標準的現代研究進展。 第二章為大棗資源化學研究部分，共分五節(jié)，具體研究內容及結論如下： 第一節(jié)中國大棗資源分布及藥用大棗資源現狀調查。采用文獻調研及實地考查的形式，對我國大棗主要產區(qū)進

2、行了初步調查。按照地形地貌、水文、生態(tài)環(huán)境及主栽品種差異，將我國北方棗產區(qū)初步劃分為13個主要產區(qū)。并對我國藥用大棗資源現狀進行了調查及思考。 第二節(jié)大棗化學成分研究。采用硅膠柱層析及聚酰胺柱層析等色譜技術對大棗所含化學成分進行分離、純化，根據其理化性質及波譜數據鑒定其結構。結果從大棗的水提取物和乙醇提取物中共分離鑒定了23個化合物，其中13個為三萜酸類，分別為：大棗新酸（zizyberanal acid，1）、zizybere

3、nalic acid（3）、ceanothenic acid（4）、ursonic acid（5）、白樺脂酸（6）、zizyberanalic acid（7）、麥珠子酸（8），熊果酸（9）、ceanothic acid（10）、epiceanothic acid（11）、齊墩果酸（12）、2α-羥基齊墩果酸（13）和2α-羥基烏蘇酸（14）；2個神經酰胺類：（2S，3S，4R，8E）-2-[（2'R）-2'-羥基二十四烷酰胺]-8-十八

4、烯-1，3，4-三醇（15）和1-O-β-D-吡喃葡萄糖-（2S，3S，4R，8E）-2-[（2'R）-2'-羥基二十四烷酰胺]-8-十八烯-1，3，4-三醇（16）；3個甾醇類：3β，6β-豆甾烷-4-烯-3，6-二醇（17）、β-谷甾醇（18）和胡蘿卜苷（19）；2個脂肪酸類：十七烷酸（20）和二十四烷酸（21）：此外尚有萘醌類（大棗萘醌，zizyberanone，2）、黃酮類（槲皮素-3-O-蕓香糖苷，22）和單糖類（D-葡萄糖，

5、23）成分。其中化合物1和2為新化合物，15和16為首次從棗屬植物中分得的神經酰胺類化合物，化合物5、11、14、17、20和21為首次從該植物中分得。 第三節(jié)不同品種、不同產地大棗品質評價。首次建立了一種用于同時測定大棗藥材中10種三萜酸類成分（ceanothic acid，麥珠子酸，大棗新酸，zizyberanalic acid，epiceanothic acid，ceanothenic acid，白樺脂酸，齊墩果酸，urs

6、onic acid和zizyberenalic acid）的HPLC-DAD含量測定方法。色譜條件為：采用Waters Sunfire C18（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱，柱溫35℃，以乙腈-0.05％磷酸水溶液為流動相，梯度洗脫，流速1.0 mL/min，化合物1-9的檢測波長為205 nm，化合物10的檢測波長為238 nm。所測10個化合物的工作曲線在線性范圍內均表現出較好的線性相關性（r2>0，9999）；其日內和日

7、間精密度變化范圍分別為0.43-1.72％和0.53-2.45％，加樣回收率為94.98-104.09％。該方法成功應用于同時測定22個產地36個栽培品種共計42批大棗樣品中10種三萜酸類成分含量。結果顯示，不同品種、不同產地大棗三萜酸含量有較大差異，其中山東沾化產冬棗品種總三萜酸含量最高?；跇悠分?0種三萜酸類成分含量差異，應用系統聚類分析（HCA）和主成分分析（PCA）方法對樣品進行區(qū)分和歸類。結果顯示，山東沾化產冬棗品種與其他大

8、棗品種有較大差異，提示其親緣關系可能較遠。該方法測定的結果有助于更好地應用大棗資源，也可從植物化學分類學角度為大棗植物進行種下界定提供幫助。 第四節(jié)大棗藥材質量標準研究。以白樺脂酸和齊墩果酸為對照品，分別比較了不同提取溶劑、不同展開條件及不同顯色方法對大棗藥材薄層色譜鑒別的影響，確定了大棗藥材的TLC色譜條件。首次建立了大棗藥材白樺脂酸HPLC-ELSD含量測定方法。色譜條件為：采用Hypersil C18（250 mm×4.6

9、 mm，5μm）色譜柱，柱溫25℃，以乙腈-0.1％乙酸水溶液（81：19）為流動相，流速0.4 mL/min；ELSD條件：氣體壓力為35 psi（2.28 slpm），漂移管溫度為65℃，噴霧口溫度為36℃。 第五節(jié)大棗化學成分生物活性初步評價。采用MTT法（四甲基偶氮唑鹽微量酶反應比色法），對從大棗中所分離得到的11個三萜酸類成分（白樺脂酸、大棗新酸、熊果酸、epiceanothic acid、ceanothenic ac

10、id、zizyberenalic acid、麥珠子酸、ceanothic acid、zizyberanalic acid、齊墩果酸和ursonic acid）以及1個萘醌類成分（大棗萘醌）進行了體外抑制人胃癌細胞（MGC-803）、人結腸癌細胞（HT-29）、人肺癌細胞（NCI-H460）、人肝癌細胞（HepG-2）增殖活性研究。結果顯示：熊果酸、zizyberenalic acid、zizyberanalic acid和齊墩果酸對上述

11、四種腫瘤細胞株均表現出一定抑制作用。提示上述四種化學成分可以作為腫瘤細胞增殖抑制劑，或作為抗腫瘤藥物先導化合物。 本論文的特色和創(chuàng)新點為： 1.以藥用大棗資源品種為研究對象，采用復合色譜分離分析方法和光譜技術，從中分離鑒定了23個化合物，其中兩個為未見報道的新化合物（大棗新酸和大棗萘醌），并首次在棗屬植物中分離得到神經酰胺類化合物。 2.采用中藥資源化學的研究思路，應用HPLC-DAD結合化學計量學的方法，對我國