Notch1過(guò)表達(dá)對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞生物學(xué)特性的影響.pdf

1、授一予單位代碼學(xué)號(hào)或申請(qǐng)?zhí)柮芗?jí)1《14592《川640()91公開(kāi)文學(xué)論大位州學(xué)鄭士碩(專(zhuān)業(yè)學(xué)位)Nofchl過(guò)表達(dá)對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞生物學(xué)特性的影響院系名稱(chēng):別名位類(lèi)者姓學(xué)作導(dǎo)師姓名、職稱(chēng):基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)碩士王丹郡文海教授呂玉民研究員2009年05月鄭州大學(xué)2009屆碩士學(xué)位論文中文摘要當(dāng)Notchl信號(hào)被阻斷后，在T細(xì)胞急性淋巴白血病(TALL)中發(fā)生細(xì)胞靜止，表明對(duì)Notchl信號(hào)的調(diào)控是一種治療腫瘤的有效的方法。另外，現(xiàn)在已經(jīng)

2、證實(shí)，異常的Notchl信號(hào)在其它類(lèi)型的白血病和粘液表皮樣瘤中起著十分重要的作用。Notchl作為致癌基因或抑癌基因取決于不同類(lèi)型的細(xì)胞。對(duì)Not。hl信號(hào)途徑了解的增多將有助于利用Notchl作為分子靶點(diǎn)治療癌癥。然而，關(guān)于Notchl信號(hào)途徑與宮頸癌相互作用關(guān)系的報(bào)道尚無(wú)定論性的結(jié)果。為了更清楚理解Notchl信號(hào)途徑與宮頸癌發(fā)生的關(guān)系，本研究首先通過(guò)構(gòu)建真核表達(dá)載體，研究Notchl的過(guò)表達(dá)在宮頸癌中的作用，并通過(guò)CCK一8試劑研

3、究過(guò)表達(dá)Notchl對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞增殖的影響，進(jìn)一步通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)研究過(guò)表達(dá)Notchl對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞周期及凋亡的影響，最后通過(guò)Boydenchamber研究其對(duì)浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的影響，該研究旨在為以Notchl信號(hào)途徑為靶點(diǎn)宮頸癌基因治療的提供理論依據(jù)。方法1、從胎盤(pán)組織中提取總RNA，經(jīng)Rl’PCR擴(kuò)增人Notchl胞內(nèi)區(qū)全長(zhǎng)，利用及初11和方去al分別對(duì)PCR產(chǎn)物和peDNA3.1()進(jìn)行雙酶切。用T4DNA連接酶分別連接上述

4、回收的片段，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌JM109細(xì)胞，涂板，過(guò)夜培養(yǎng)，挑克隆，提質(zhì)粒，雙酶切鑒定。2、真核表達(dá)載體pcDNANIcD通過(guò)脂質(zhì)體Lip。介ctamine2000轉(zhuǎn)染宮頸癌Hela細(xì)胞，并利用G418篩選出穩(wěn)定表達(dá)株。3、采用半定量Rl’peR和Westemblotting分析轉(zhuǎn)染前后Notchl和HeslmRNA和蛋白表達(dá)的變化。4、采用CCK一8檢測(cè)試劑盒分析過(guò)表達(dá)Notchl對(duì)細(xì)胞增殖的影響。5、利用流式細(xì)胞術(shù)分析轉(zhuǎn)染