眼裂狹小綜合征、特應(yīng)性皮炎及其它皮膚病的基因突變的研究.pdf

1、人類生殖細(xì)胞遺傳物質(zhì)突變所引起的疾病稱為遺傳性疾病,簡稱遺傳病。人類的遺傳物質(zhì)在細(xì)胞水平是染色體,在分子水平是DNA,所以因染色體畸變或DNA突變而引起的疾病是遺傳病。遺傳性疾病可以分為染色體病、單基因遺傳病、多基因遺傳病和線粒體基因遺傳病。2003年,人類基因組計劃的完成使遺傳學(xué)進入了基因組學(xué)時代,這也為遺傳性疾病的研究開辟了新紀(jì)元,目前有多種與遺傳有關(guān)的疾病危害人類的健康,影響人類的生活質(zhì)量。本論文主要研究內(nèi)容包括:瞼裂狹小-上瞼下

2、垂-倒轉(zhuǎn)型內(nèi)眥贅皮綜合征患者的FOXL2基因突變研究;遺傳性皮膚病特應(yīng)性皮炎相關(guān)易感基因FLG基因突變的研究;與營養(yǎng)不良型大皰性皮炎患者的COLTA1基因突變的篩查;進行性對稱性紅斑角化癥患者中兜甲蛋白基因突變的檢測等。為從分子遺傳學(xué)水平探索這幾種疾病的發(fā)病機制,為疾病的產(chǎn)前診斷、早期預(yù)防、早期診斷及遺傳咨詢提供依據(jù)。1.中國瞼裂狹小-上瞼下垂-倒轉(zhuǎn)型內(nèi)眥贅皮綜合征(Blepharophimosis,Ptosis,Epicanthus

3、Inversus syndrome,BPES)患者的FOXL2基因突變研究研究背景:典型的瞼裂狹小綜合征是一種復(fù)合的眼瞼畸形,主要有四種畸形特征:瞼裂狹小、上瞼下垂、倒轉(zhuǎn)型內(nèi)眥贅皮及內(nèi)眥距離過寬。BPES分為兩種類型:BPESⅠ型包括四種眼部畸形特征及由于卵巢功能早衰(premature ovarian failure,POF)導(dǎo)致的女性不孕癥;BPESⅡ型僅包括四種眼瞼畸形特征。目前已知與BPES有關(guān)的基因只有FOXL2。目的:檢測中

4、國BPES患者的FOXL2基因突變。方法:提取患者外周血全基因組DNA,設(shè)計引物,進行PCR反應(yīng)擴增目的片段,采用ABI3130進行全自動測序。結(jié)果:在家系A(chǔ)中發(fā)現(xiàn)了17bp(1081-1097del)的缺失突變,家系B和家系C中均檢測到插入突變,插入的具體序列尚待確定。結(jié)論:1081-1097del缺失突變尚未見報道,本研究結(jié)果擴大了FOXL2基因的突變譜。2.1 FLG基因多態(tài)性與特應(yīng)性皮炎(atopic dermatitis,AD

5、)的相關(guān)性研究研究背景:中間絲相關(guān)蛋白是皮膚屏障功能的一個重要蛋白。最近研究表明位于編碼中間絲相關(guān)蛋白(filaggrin,FLG)基因上的突變是魚鱗癬(ichthyosis vulgaris,Ⅳ)的一個致病因素,也是特應(yīng)性皮炎的一個重要的易感因素。目的:研究中國AD患者中FLG基因多態(tài)性分布及其與發(fā)病的相關(guān)性。方法:采用限制性片段長度多態(tài)性(Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP)篩

6、查已報道的突變,DNA直接測序的方法發(fā)現(xiàn)未知新突變。本研究一共檢測了22例患者和144名健康對照。結(jié)果:在中國AD患者FLG的突變位點和頻率具有特殊性,不同于歐洲人群的突變。本研究共檢測了22例患者和144名健康對照,均未檢測到在歐洲人群中報道的突變R501X和2282del4;日本人群中報道了突變S2554X和3321delA,在本研究中的22名患者和144名健康對照中未檢測到S2554X,22名患者中檢測到3例3321delA(13

7、.6％),而144名健康對照中檢測到9例(6.3%)。另外本研究發(fā)現(xiàn)了3個新的SNP位點,分別為E755K,K2444E和L2481S。結(jié)論:本研究結(jié)果表明中國AD患者FLG基因的突變不同于歐洲人群,和日本人群也不完全相同。2.2營養(yǎng)不良型大皰性表皮松解癥(Dystrophic epidermolysis bullosa,DEB)患者COL7A1基因突變篩查研究背景:目前已知與DEB相關(guān)的基因只有COLTA1。據(jù)文獻報道,亞洲地區(qū)DEB

8、病例的COL7A1基因突變位點主要集中在第73-75外顯子區(qū)域,我們推測亞洲地區(qū)此病的COL7A1基因突變熱點很可能位于73-75外顯子之間。目的:檢測2例RDEB患者的COL7A1基因突變位點方法:對2例患者COL7A1基因的第73-75外顯子設(shè)計引物,進行目的片段PCR擴增,采用ABI3130進行全自動測序反應(yīng)。結(jié)果:在2例RDEB患者COL7A1基因的第73-75外顯子區(qū)域未檢測到突變。結(jié)論:這2例RDEB患者具有家系特異性,需要

9、進一步對COL7A1基因進行全基因測序以檢測其突變位點。2.3進行性對稱性紅斑角化癥(Progressive Symmetric Erythrokeratoderma,PSEK)患者的兜甲蛋白基因(Loricrin gene,LOR)突變的檢測目的:研究在PSEK患者兜甲蛋白基因突變。方法:提取患者外周血全基因組DNA,針對LOR編碼測序設(shè)計2對引物,進行目的片段PCR擴增,采用ABl3130進行全編碼序列測定。結(jié)果:通過編碼序列測序在