百草枯急性中毒大鼠肺組織MMP-9、TIMP-1基因表達(dá)及二巰丙磺鈉的干預(yù).pdf

1、目的：探討百草枯急性中毒大鼠肺組織MMP-9、TIMP-1的基因表達(dá)、MMP-9/TIMP-1比例的動態(tài)變化以及二巰丙磺鈉的干預(yù)效應(yīng)。 方法： 1．清潔級雄性SD大鼠120只，隨機(jī)分12組，每組10只，第1組：正常對照組（NC組）。第2組：二巰丙磺鈉組（Na-DMPS組）。第3～7組：百草枯急性中毒組（PQ組），予左腹腔內(nèi)注射（ip）百草枯（濃度為1%，劑量為20mg/kg），構(gòu)建百草枯急性中毒模型。該組大鼠分別在注射百

2、草枯后1d、3d、7d、14d、28d時(shí)活殺。第8～12組：二巰丙磺鈉保護(hù)組（Na-DMPS+PQ組），予右腹腔ip二巰丙磺鈉（200mg/kg），15分鐘后，予左腹腔ip百草枯（濃度、劑量同上），該組大鼠分別在注射百草枯后1d、3d、7d、14d、28d時(shí)活殺。每組取2只大鼠肺組織用于病理學(xué)觀察，剩余8只大鼠無菌取部分肺組織，于液氮中保存待用，用于RT-PCR。 2．觀察PQ組和Na-DMPS保護(hù)組大鼠在染毒后的中毒表現(xiàn)及肺組

3、織病理改變。 3．采用Trizol試劑提取各組大鼠肺組織總RNA，以總RNA為模板，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。然后以cDNA為模板，以大鼠MMP-9、TIMP-1引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，電泳結(jié)果用凝膠成像系統(tǒng)成像，Gel-Prov3．1分析軟件進(jìn)行分析，以（目的基因/β-actin）為該基因表達(dá)的相對值，并計(jì)算MMP-9/TIMP-1比值。 4．計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X±s）表示，應(yīng)用SPSS13

4、．0進(jìn)行t檢驗(yàn)、方差分析等處理。P<0．05為差異有顯著性意義。 結(jié)果： 1．PQ組大鼠染毒1d開始出現(xiàn)豎毛，精神萎靡、懶散，活動減少，食欲下降。此后2-4天上述癥狀進(jìn)行性加重，出現(xiàn)體重減輕，呼吸急促，口吐泡沫。7-14d上述癥狀逐漸緩解，14-28天時(shí)出現(xiàn)進(jìn)行性呼吸困難，發(fā)紺等。肺組織病理顯示PQ組急性期（2周內(nèi)）炎癥細(xì)胞浸潤，（2-4周）炎癥逐漸消退，代之以膠原的增生，肺組織纖維化。Na-DMPS保護(hù)組大鼠中毒表現(xiàn)與

5、肺組織病理改變程度明顯減輕。 2．NC及Na-DMPS組大鼠肺組織MMP-9mRNA表達(dá)量極低。PQ組染毒1d、3d、7d的MMP-9mRNA表達(dá)量均顯著升高（P<0．05），以染毒3d為最高，然后逐漸下降，但14d、28d的MMP-9mRNA表達(dá)量仍高于NC組（P<0．05）。Na-DMPS保護(hù)組染毒后1d、3d、7d的MMP-9mRNA表達(dá)量略高于Na-DMPS組，差別有顯著性意義（P<0．05），后逐漸降低，14d、28d

6、MMP-9mRNA表達(dá)量與Na-DMPS組相比均無明顯差異（P>0．05）．與相同時(shí)間點(diǎn)的PQ組相比，染毒1d、3d、7d、14d時(shí)的Na-DMPS保護(hù)組MMP-9mRNA表達(dá)量均明顯降低（P<0．05），但28d時(shí)兩者無顯著性差別（P>0．05）。 3．NC及Na-DMPS組大鼠肺組織TIMP-1mRNA表達(dá)量極低，PQ組染毒1d、3d、7d、14d、28d時(shí)的TIMP-1mRNA表達(dá)量逐漸升高，14d達(dá)高峰，然后維持在高峰水

7、平，與NC比較差別有顯著性（P<0．05）。Na-DMPS保護(hù)組染毒1d、3d、7d、14d、28d時(shí)的TIMP-1mRNA表達(dá)量較Na-DMPS組逐漸升高，差別有顯著性意義（P<0．05）。但與相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的PQ組相比，Na-DMPS保護(hù)組于染毒1d、3d、7d、14d、28d的肺組織TIMP-1mRNA表達(dá)量明顯降低（P<0．05）。 4．PQ組染毒1d、3d、7d、14d、28d時(shí)的MMP-9mRNA/TIMP-1 mRNA

8、比例逐漸失衡，7d、14d、28d時(shí)與NC組比較差別有顯著性（P<0．05）。Na-DMPS保護(hù)組染毒1d、3d、7d、14d、28d時(shí)的MMP-9 mRNA/TIMP-1 mRNA比例逐漸降低，7d、14d、28d時(shí)較Na-DMPS組降低，差別有顯著性意義（P<0．05）。與相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的PQ組相比，7d、14d、28d時(shí)兩者M(jìn)MP-9 mRNA/TIMP-1 mRNA比例差別有顯著性（P<0．05）。 結(jié)論： 1．百草

9、枯急性中毒大鼠肺組織MMP-9mRNA表達(dá)量在中毒早期逐漸達(dá)高峰，然后逐漸回落。百草枯急性中毒大鼠肺組織TIMP-1mRNA表達(dá)量在中毒早期逐漸升高，中毒過程中表現(xiàn)為逐漸增高并維持在高峰水平。百草枯急性中毒大鼠肺組織MMP-9mRNA/TIMP-1mRNA比例逐漸失衡。 2．使用二巰丙磺鈉保護(hù)明顯減低百草枯急性中毒大鼠肺組織MMP-9、TIMP-1mRNA表達(dá)水平、以及緩解肺組織MMP-9/TIMP-1 mRNA比例失衡。