CYP表氧化酶2J2通過(guò)抑制心肌細(xì)胞炎癥反應(yīng)向巨噬細(xì)胞傳遞防治心肌纖維化.pdf

1、研究背景與目的：
　　心肌纖維化（Myocardial Fibrosis; MF）是心室重塑的重要病理生理變化，可引起心臟舒縮功能障礙，最終導(dǎo)致心力衰竭。近年來(lái)，隨著心肌纖維化機(jī)制研究的不斷深入，使得炎癥反應(yīng)在其發(fā)生和進(jìn)展過(guò)程中的作用和地位日益受到重視。
　　花生四烯酸細(xì)胞色素P450表氧化酶2J2（CYP2J2）及其代謝產(chǎn)物環(huán)氧二十碳三烯酸（EETs）在心血管系統(tǒng)中發(fā)揮重要的保護(hù)作用。越來(lái)越多的研究表明，CYP2J2-EE

2、Ts系統(tǒng)可抑制心肌纖維化，但其機(jī)制尚不明確。本研究通過(guò)采用心肌纖維化的動(dòng)物模型及相關(guān)的細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)探索 CYP2J2-EETs抑制心肌纖維化的作用及機(jī)制。
　　實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果：
　　首先，我們使用心肌特異性CYP2J2轉(zhuǎn)基因小鼠（Tr，帶有α-MHC啟動(dòng)子）與野生型C57BL/6小鼠（WT），采用異丙腎上腺素（isoproterenol; Iso）和人血管緊張素II(human angiotensin II;Ang II)皮下

3、微泵植入方法建立了兩種心力衰竭模型。通過(guò)心臟超聲、血流動(dòng)力學(xué)及組織學(xué)檢測(cè)，我們發(fā)現(xiàn)Tr可明顯地改善Ang II或Iso誘導(dǎo)的心功能受損；通過(guò)心臟石蠟切片天狼猩紅染色、Western blotting及real-time PCR分別在大體及蛋白和核酸水平檢測(cè)I型和III型膠原的表達(dá)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，Tr可逆轉(zhuǎn)Ang II或Iso誘導(dǎo)的膠原沉積；為進(jìn)一步證實(shí)CYP2J2是否是通過(guò)減弱炎癥反應(yīng)而抑制心肌纖維化（MF）進(jìn)展的，我們檢測(cè)了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物心

4、臟組織中炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度及炎癥通路相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Ang II和Iso均可導(dǎo)致心肌組織內(nèi)巨噬細(xì)胞大量浸潤(rùn)以及NF-κB入核增多，而心肌細(xì)胞特異性高表達(dá) CYP2J2可明顯地抑制巨噬細(xì)胞聚積以及 NF-κB入核。在體實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，心肌細(xì)胞內(nèi)高表達(dá) CYP2J2可顯著抑制心肌纖維化（MF）發(fā)生和進(jìn)展。
　　隨后，我們?cè)隗w外實(shí)驗(yàn)探索了心肌細(xì)胞在MF發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用機(jī)制。（1）首先，在體外培養(yǎng)的原代心肌細(xì)胞或心肌細(xì)胞系（

5、H9c2）中，用Ang II或Iso刺激后，NF-κB的入核及活性明顯增加；在體外培養(yǎng)的原代巨噬細(xì)胞或巨噬細(xì)胞系（RAW264.7）中，加入心肌細(xì)胞來(lái)源的條件培養(yǎng)基，我們發(fā)現(xiàn)在巨噬細(xì)胞中發(fā)生了炎癥反應(yīng)，且此炎癥反應(yīng)由心肌細(xì)胞傳遞而來(lái)并受心肌細(xì)胞調(diào)控；用培養(yǎng)了巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)基去刺激原代成纖維細(xì)胞或纖維細(xì)胞系（NIH/3T3），我們驚喜地發(fā)現(xiàn)，成纖維細(xì)胞膠原合成增加；（2）然而，在心肌細(xì)胞中，預(yù)先外源性加入EETs（CYP2J2代謝產(chǎn)物），

6、可抑制Iso或Ang II引起的NF-κB的入核及活性；再用此條件培養(yǎng)基干預(yù)巨噬細(xì)胞，巨噬細(xì)胞活化受到明顯抑制，主要表現(xiàn)為炎癥通路NF-κB的核轉(zhuǎn)移減少且與DNA結(jié)合能力下降；巨噬細(xì)胞來(lái)源的條件培養(yǎng)基繼續(xù)干預(yù)成纖維細(xì)胞，結(jié)果顯示，成纖維細(xì)胞的活化及其膠原合成明顯減少。
　　結(jié)論：
　　綜上所述，利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，高表達(dá)CYP2J2-EETs系統(tǒng)可顯著抑制心肌纖維化進(jìn)展，其作用機(jī)制可能部分是通過(guò)調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞-巨噬細(xì)胞-成纖維細(xì)胞