肥大細胞與食管鱗狀上皮增生、癌變及血管生成關系的研究.pdf

1、背景與目的：
　　肥大細胞（Mast cell，MC）是腫瘤微環(huán)境中浸潤的細胞之一，是機體重要的免疫細胞，在Ⅰ型超敏反應及機體防御反應中起重要作用。近年來的研究證實肥大細胞也參與了腫瘤發(fā)生發(fā)展，但在腫瘤中的具體作用尚不明確。血管內皮生長因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）是作用最強的促進血管內皮生長的細胞因子，研究表明肥大細胞能夠釋放VEGF。本實驗通過檢測肥大細胞密度（Mast

2、cell density，MCD）及活化率、微血管密度（Microvessl denisty，MVD）和VEGF在食管癌及其對照組織中的表達情況，探討肥大細胞與鱗狀上皮增生、癌變和食管鱗癌血管生成之間的關系。
　　材料與方法：
　　材料：
　　收集2010年至2011年間汕頭大學附屬腫瘤醫(yī)院送檢的食管鱗癌手術標本100例，每一例術前均未接受過放、化療，每例標本均取癌組織、癌旁組織以及遠離癌旁的切緣組織。將癌旁及切緣組織

3、按照增生程度分級，分為正常粘膜、單純性增生、低級別上皮內瘤變（Low grade intraepithelial neoplasia， LIN）和高級別上皮內瘤變（ High grade intraepithelial neoplasia，HIN）。
　　方法：
　　1. HE染色用以確定組織形態(tài)及進行病理組織學診斷。
　　2.免疫組織化學染色選用肥大細胞特異的類胰蛋白酶抗體標記肥大細胞，CD31抗體標記血管內皮細胞，

4、VEGF抗體標記VEGF蛋白，觀察其在食管正常粘膜、單純性增生、上皮內瘤變及癌組織中的表達情況，分別計數各組 MCD、活化的肥大細胞數、MVD，參照Fromowitz方法（具體見后）對VEGF染色強度進行評分。
　　3.圖像分析法應用Leica IM50圖像采集系統(tǒng)和Image-pro Plus6.0圖像分析系統(tǒng)計數MCD、活化的MC數及MVD，并對VEGF染色結果進行染色強度分級。
　　4.統(tǒng)計分析用 SPSS13.0統(tǒng)計

5、軟件分析處理。方法采用單因素方差分析（One-way ANOVA）、卡方檢驗、列聯(lián)表分析、Pearson及Spearman相關性分析。
　　結果：
　　1.從食管的正常粘膜到鱗癌組織均有MC的浸潤，在正常、單純性增生、LIN、HIN組織中，主要分布在粘膜層和粘膜下層，在食管鱗癌組織中主要分布在癌巢間質及癌組織浸潤的前沿。MCD在癌旁粘膜最多，癌組織內最少（P<0.01）。癌組織中MC活化脫顆粒比例最高（66.6％），其次是癌

6、旁粘膜（30.2%），切緣粘膜最低（27.1%）（P<0.01）。隨著鱗狀上皮增生程度及癌變級別的增加，MC活化率逐級遞增，正常、單純性增生之間的差異無顯著性（P>0.05），到 LIN組差異具有顯著性，到鱗癌組具有極顯著性差異（P<0.01），MC活化率達65%以上。MCD與腫瘤大小呈負相關（P<0.05），與浸潤深度呈正相關（P<0.05）。活化MC數與浸潤深度呈負相關（P<0.05）。
　　2.微血管在食管的正常、單純性增生

7、、LIN、HIN組織中，主要分布在粘膜層和粘膜下層，在鱗癌組織中主要分布在癌巢間質及癌組織浸潤的前沿。隨著鱗狀上皮增生程度及癌變級別的增加，MVD逐級增加（P<0.01），癌組織中MVD最高，但在非癌變各組及鱗癌各組之間差異無顯著性（P>0.05）。MVD在有淋巴結轉移組較無淋巴結轉移組高（P<0.05）。
　　3. VEGF在正常粘膜為陰性，在上皮內瘤變上皮陽性率為31%，在癌組織中陽性率為52%（P<0.01），主要表達于癌細

8、胞及異型細胞的胞漿，癌巢間質細胞如淋巴細胞、肥大細胞等也有表達。
　　4.隨著VEGF評分的增加，MCD有逐級遞減的趨勢（P<0.01），肥大細胞活化率、MVD有逐級遞增的趨勢（P<0.01）。VEGF、活化的肥大細胞、MVD三者之間呈正相關關系（P<0.01）。Simple套染顯示，肥大細胞胞漿VEGF陽性。
　　結論：
　　1.MC在正常、單純性增生、LIN、HIN組織中，主要分布在粘膜層和粘膜下層，在食管鱗癌組織