三羥異黃酮誘導K562和K562-ADM細胞的凋亡作用.pdf

1、目的：研究三羥異黃酮(Genistein)對人紅白血病細胞系K562與其多藥耐藥細胞系K562/ADM的生長抑制、誘導凋亡作用及探討其可能的作用機理。 方法：1、不同濃度的三羥異黃酮處理K562細胞與K562/ADM細胞后，用噻唑藍(MTT)比色法檢測細胞生長增殖作用。 2、Wright-Gimesa法觀察三羥異黃酮對K562細胞的形態(tài)學變化。 3、瓊脂糖凝膠電泳觀察三羥異黃酮對K562細胞的DNA電泳帶。

2、 4、流式細胞術分析細胞周期。 5、流式細胞術檢測Bcl-2蛋白的表達陽性率和平均熒光強度。 6、免疫細胞化學ABC法分析Bcl-2和Bax蛋白的表達。 結果：1、三羥異黃酮對K562細胞及K562/ADM細胞均有很強的生長抑制作用。三羥異黃酮作用24h、48h、72h時對K562細胞及K562/ADM細胞的生長抑制率與濃度。呈正相關；三羥異黃酮對K562/ADM細胞的耐藥倍數(shù)為1.67倍； 2、三羥異

3、黃酮作用K562細胞48h，隨著濃度增加，凋亡細胞百分率對應增加，細胞凋亡率與濃度有依賴性，細胞周期分布檢測顯示：可見亞G1期細胞增多，G1期、S期細胞減少，G2/M期細胞增多，提示細胞發(fā)生G2/M期阻滯。而三羥異黃酮作用K562/ADM細胞，細胞組間凋亡率沒有K562細胞變化明顯，但細胞也發(fā)生明顯的G2/M期阻滯； 3、不同濃度三羥異黃酮作用K562細胞48h，Bcl-2蛋白陽性表達率和平均熒光強度隨濃度增加逐漸下降。但K56

4、2/ADM細胞的Bcl-2蛋白陽性表達率和平均熒光強度均無明顯變化； 4、不同濃度三羥異黃酮對K562細胞的bax蛋白陽性表達率100％，明顯高于對照組，組間比較有顯著性差異(p＜0.05)；而Bcl-2蛋白在實驗組同對照組細胞比較陽性表達無明顯變化。在K562/ADM細胞中，Bcl-2蛋白在實驗組和對照組細胞中均強表達，但Bax的表達無明顯變化。 5、光鏡下可見隨著濃度的增加部分K562細胞體積皺縮，細胞表面凸起小膜泡

5、，呈桑椹狀，染色質集中到細胞邊緣，細胞核固縮，出現(xiàn)核碎裂等凋亡改變。對照組細胞形態(tài)無明顯改變。 6、50-1001μmol/L三羥異黃酮作用K562細胞48h后，DNA瓊脂糖凝膠電泳顯示較明顯的凋亡梯形條帶。 結論：1、三羥異黃酮可明顯抑制K562及K562/ADM細胞生長增殖； 2、三羥異黃酮對K562/ADM細胞的耐藥倍數(shù)為1.67倍，說明K562/ADM細胞株是多藥耐藥表型的細胞系，提示K562細胞對三羥異

6、黃酮的反應比K562/ADM細胞敏感； 3、三羥異黃酮可干擾細胞周期，使K562細胞和K562/ADM細胞阻滯在G2/M期； 4、同一濃度下三羥異黃酮誘導K562/ADM細胞凋亡率明顯低于K562細胞，說明三羥異黃酮更易誘導K562細胞調亡，K562/ADM細胞對三羥異黃酮同樣存在耐藥現(xiàn)象； 5、三羥異黃酮誘導K562細胞Bax蛋白高表達和Bcl-2蛋白表達下調可能是三羥異黃酮誘導K562細胞凋亡的機制之一。K5