檸檬醛對指狀青霉線粒體的作用初探.pdf

1、指狀青霉(Penicillium digitatumSacc)侵染引起的綠霉病是最嚴重的柑橘類水果采后病害。檸檬醛，3,7-二甲基-2,6-辛二烯-1-醛，廣泛存在于植物精油中，對多種果蔬采后致病真菌有較強的抑制作用，是一種潛在的天然抑菌物質。我們前期研究表明，最小抑菌濃度（MIC，2.0μL/mL）和最小殺菌濃度（MFC，4.0μL/mL）下檸檬醛對指狀青霉有良好抑菌效果。然而，檸檬醛對指狀青霉線粒體形態(tài)和功能方面的影響未見報道。本研

2、究以指狀青霉為研究對象，探討檸檬醛對其線粒體形態(tài)和功能相關指標的影響。具體研究指標如下：線粒體表面形態(tài)，胞內外ATP含量，呼吸代謝，糖酵解途徑（EMP）和三羧酸循環(huán)途徑（TCA）相關酶活及重要產物含量。主要研究結果如下：
　　（1）建立了指狀青霉線粒體差速離心提取法，此法提取的線粒體收率為2.2％~3.7％，可用于進一步分析。提取結果及后期驗證顯示此方法提取指狀青霉線粒體穩(wěn)定，純度較高。
　　（2）采用光學顯微鏡和掃描電鏡觀

3、察了不同濃度檸檬醛作用后指狀青霉線粒體的表面形態(tài)。結果表明，檸檬醛處理后指狀青霉線粒體表面形態(tài)均發(fā)生了一定變化，且隨著濃度增加，破壞程度也隨之增加。光學顯微鏡下檸檬醛組較對照組線粒體數量增加，出現巨大線粒體；掃描電鏡觀察結果發(fā)現，不同濃度檸檬醛處理后指狀青霉線粒體形態(tài)差異明顯。對照組（CK）線粒體形態(tài)豐滿，結構完整，表面呈現規(guī)則的褶皺；MIC檸檬醛處理組指狀青霉線粒體表面凹陷甚至變形；MFC檸檬醛處理組缺乏線粒體基質，形狀不規(guī)則，結構無

4、序，表面粗糙，部分線粒體發(fā)生溶解和出現不規(guī)則增加。
　?。?）用熱提法提取 ATP并用高效液相色譜（HPLC）測定其含量。結果表明，檸檬醛處理組指狀青霉 ATP含量較對照組均發(fā)生了一定變化。經 MIC和MFC檸檬醛處理30 min的指狀青霉，其胞內ATP的含量分別是21.55±0.19和19.21±0.72μg/g，顯著低于對照組（22.27±0.98μg/g）。在檸檬醛處理指狀青霉菌絲體的整個過程中，隨著檸檬醛濃度增加和處理時間

5、延長，胞內 ATP含量越來越低；胞外ATP含量變化趨勢則相反。
　?。?）用溶氧儀測定溶氧量并進一步研究了檸檬醛對指狀青霉呼吸代謝的影響。結果表明，1/2MIC、MIC和MFC檸檬醛處理指狀青霉后抑制率分別是15.4％，21.2％和30.6％。此外，還測定了不同濃度檸檬醛（1/2MIC、MIC、MFC）與丙二酸、碘乙酸、磷酸鈉的疊加率，結果顯示指狀青霉糖酵解途徑和三羧酸循環(huán)途徑受到了檸檬醛的影響。
　?。?）通過試劑盒測定E