實驗三神經肌肉標本的制備與肌肉收縮的觀察

1、實驗一 神經-肌肉標本的制備與肌肉收縮的觀察,一、實驗目的1.掌握解剖生理學實驗常用手術器械的使用。2.學習蛙類動物單毀髓和雙毀髓的實驗方法。3.掌握制備坐骨神經-腓腸肌標本。4.熟悉生物信號采集系統(tǒng)（MD3000）軟件的操作。4、掌握描記骨骼肌單收縮及強直收縮曲線的方法,二、基本原理,蟾蜍的某些基本生命活動， 如神經的生物電活動、肌肉收縮 等與哺乳動物相似。其離體組織所需的生活條件比較簡單，易于控制和掌握。

2、 肌肉受到一次閾上刺激產生的一次收縮為單收縮，其過程分為潛伏期、收縮期與舒張期。肌肉受到連續(xù)的閾上刺激時，若刺激間隔小于單收縮時程，相鄰收縮會出現融合，表現為強直收縮。,三、實驗材料,蟾蜍、解剖盤、手術剪、手術鑷、眼科剪、眼科鑷，毀髓針、玻璃分針、蛙板、蛙釘、鋅銅弓、培養(yǎng)皿、膠頭滴管、細棉線、任氏液、 MD3000生物信號采集系統(tǒng)、鐵支架、生理肌槽、張力換能器,四、實驗步驟,術前準備：配制任氏液任氏液：

3、 離子比率與蟾蜍血漿相同，可以維持標本的正常興奮性。,Na+、Ca 2+、K+、Cl- HCO3- 、H2PO3-,1、蟾蜍的單毀髓與雙毀髓 一手握蟾蜍，食指按壓頭部前端，拇指壓住軀干背部。 另一只手持毀髓針由兩眼之間沿皮膚中線向后劃觸，至兩耳后腺之間的凹陷處（枕骨大孔）將毀髓針垂直插入，然后將針尖向前刺入顱腔，搗毀腦組織，稱單毀髓動物。再將毀髓針退至枕骨大孔，針尖轉

4、向后方，與脊柱平行刺入椎管搗毀脊髓，稱雙毀髓動物。,如毀髓針確實在顱腔內，實驗者有針來回擺動無阻力及觸及顱骨的感覺。,,,,,徹底搗毀脊髓時，可見蟾蜍兩后肢突然蹬直，然后癱軟，并常有尿失禁的情況。 如動物仍有表現四肢肌肉緊張或活動自如情況，表明尚未毀壞脊髓，必須重新毀髓。,2、坐骨神經-腓腸肌標本制備 1）剝制后肢標本 左手提住蟾蜍脊柱，右手持剪刀在骶髂關節(jié)水平之上0.5~1.0cm處用粗剪刀橫斷

5、脊柱。然后用左手握住蟾蜍的后肢并以拇指壓住骶骨，使其頭和后肢自然下垂，右手持粗剪刀，沿脊柱兩側剪掉蟾蜍的一切內臟及頭、胸部。,2）剝皮 用蘸有任氏液的拇指和食指捏住斷開的脊柱后端，另一手向后撕破皮膚并除去兩后肢皮膚。將剝干凈的后肢放入任氏液中，清洗手及用過的器械。,3）分離兩后肢 將去皮的兩后肢縱向剪開脊柱，并在恥骨聯合處剪開恥骨及相連的肌肉組織，使兩后肢完全分離，放入任氏液中備用。,4）分

6、離坐骨神經,,腓腸肌,,肱二頭肌和半膜肌間的神經溝,,梨狀肌,5）游離腓腸肌 一手捏住趾端，另一手用手術鑷在腓腸肌跟腱下面穿線，打結扎進，提起結線，游離腓腸肌。,6）分離股骨頭或脛腓骨頭 根據動物個體大小，可以選擇分離股骨或脛腓骨。方法就是選擇好骨頭后，沿膝關節(jié)保留1cm左右長的骨頭，刮干凈骨頭上的肌肉，然后剪去其它部位的肌肉和骨頭，僅保留腓腸肌與股骨或脛腓骨的聯系。,3、標本活性檢查,檢驗標本,4、

7、固定標本，連接儀器 將標本固定于生理肌槽，跟腱上的扎線與張力換能器相連。,5、用MD3000生物信號采集系統(tǒng)記錄單收縮和強直收縮 先后進行單刺激和連續(xù)刺激（刺激頻率由低到高），依次記錄單收縮、不完全收縮和完全收縮曲線，并剪輯、打印。,,刺激頻率與肌肉收縮關系,五、注意事項,操作過程中不可將剝皮后的標本同皮膚、內臟等棄物放在一起。不要用力牽拉坐骨神經。 標本需經常用任氏液濕潤標本。 完整的神經-腓腸肌