臨床免疫學質量控制

1、臨床免疫學檢驗質量控制,評價情況總結,,,,,,,,,臨床檢驗科全面質量管理系統(tǒng),,,,內容提要,分析前質量控制分析中質量控制分析后質量控制,一、分析前質量控制,培訓實驗室工作人員；建立臨床實驗室質量管理體系；實驗室規(guī)范設置；試劑盒的選擇、評價、使用與保存儀器的校準、評價、維護和保養(yǎng)；標本采集、運輸、核收、登記、處置與保存；質控品、校準品的選擇、評價和使用。,1、試劑盒的選擇、評價、使用與保存,乙肝等試劑盒

2、 生產(chǎn)批準文號； 生產(chǎn)許可證 經(jīng)營許可證 藥品經(jīng)營許可證 批批檢定合格； 貼有防偽標簽。 未作規(guī)定的試劑，應從如下方面進行評價： 靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡便性、安全性及經(jīng)濟性等。,試劑盒的評價,真實性和可靠性 1、真實性：指測量值與實際值符合的程度（診斷試驗應能提供哪些人確實有?。ㄕ骊栃裕┖湍男┤舜_實無病（真陰性）的指標）。 評價指

3、標 相對靈敏度：是試驗檢出有病（即陽性）的人數(shù)占患者總數(shù)的比例，即真陽性率。相對靈敏度是衡量真陽性率的尺度。 相對特異性：是試驗檢出無?。搓幮裕┑娜藬?shù)占無病者總數(shù)的比例，即真陰性率。相對特異性是衡量真陰性率的尺度。,評價試劑盒相關指標一覽表,相對靈敏度= TP /(TP + FN)； 相對特異性= TN/(FP + TN)； 相對符合率=(TP + TN)/(TP + FP + FN +TN)。

4、 2、可靠性：是指在相同條件下重復試驗獲得相同結果的穩(wěn)定程度。如試驗結果為均數(shù)，可用變異系數(shù)表示。 公式為：CV=s / x × 100% S為標準差，x 為平均值。,,列舉范例（資料參考）,（1）標準品來源：中國藥品生物制品檢定所。 （2）標準品模式： 抗HCV預期陽性100份,預期陰性98份。 （3）試劑來源于H廠家。 （4）在一次對丙肝試劑評價試

5、驗中，通過使用該試劑對198份標準品進行檢測，發(fā)現(xiàn)抗HCV預期陽性100份標本中，檢出陽性98份、陰性2份：預期陰性98份標本中，檢出陰性96份，陽性2份。,評價丙肝試劑盒相關指標一覽表,經(jīng)分析：  相對靈敏度 = TP /(TP + FN) =98/100=98% 相對特異性 = TN/(FP + TN) =96/98=97.96% 相對符合率 = (TP + TN)/(TP + FP + FN

6、 +TN) =98+96/198=97.98%,試劑的正確使用與保存,按說明書操作，不能想當然； 詳實記載----批號、有效期、使用情況及更換試劑記錄等； 索要試劑商相關證件并有效保存，特別是批批檢報告書； 試驗用試劑 冰箱內？ 使用時？ 多余部分如何處置？

7、 ……,,,,,存在的問題: （1）將試劑盒從冰箱中拿出即用 后果是：溫育時間不夠，對一些弱陽性標本的檢測出現(xiàn)假陰性，尤其是冬天沒有空調的環(huán)境里。 要求： 試劑盒從冰箱中拿出室溫放置20min以上，與室溫平衡，然后再進行測定。 目的： 在后面的溫育反應中，能使反應孔內的溫度較快地達到所要求的高度，以滿足要求。,（2）商品化ELISA試劑盒中,洗板液由所提供的濃

8、縮液稀釋配置而成，故所用的蒸餾水或去離子水應保證質量。 （3）OPD底物溶液必須在反應顯色前臨時配制。,2、目前免疫學檢驗所要控制的儀器,（1）移液器 利用稱重法校準：吸取刻度指示量的水，萬分之一天平稱重后計算吸量是否正確，一般應在±10%以內。 （2）水浴箱、溫箱、冰箱 使用標準溫度計，經(jīng)常檢查水浴箱溫度計所示的溫度與水中（或溫箱內）實測溫度是否一致，允許有±1℃

9、的誤差。,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,（3）洗板機 設置洗板后的殘留液一般不超過2ul；人工扣板時，墊紙不濕；定期檢查管孔是否堵塞。 （4）酶標儀 經(jīng)常維護其光學部分，防止濾光片霉變；定期檢查校準，使其保持良好的工作性能。,,3、臨床標本的收集與保存 免疫試驗標本十分廣泛， 體

10、 液：如血清、血漿、各種積液； 分泌物：如唾液、腦脊液； 排泄物：糞便、尿液； 均可用于測定其中的抗原或抗體成分，一般使用血清。,可能影響測定結果的標本因素,患者標本中有可能會含有干擾酶免疫測定導致假陽性和假陰性結果的干擾因素，其分為兩類： 1、內源性干擾因素：類風濕因子、補體、高濃度的非特異性免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體、因使用鼠抗體治療或誘導的抗鼠Ig抗體、交叉反應等

11、。,2、外源性干擾因素：如標本溶血、細菌污染、儲存時間過長、標本凝固不全、冷凍保存標本反復凍融等。 （1）盡量避免溶血 紅細胞破裂釋放出具有過氧化物酶活性物質，增加非特異性顯色而成假陽性。 （2）血清標本宜在新鮮時檢測 如有細菌污染，菌體中可能含有內源性HRP，也會產(chǎn)生假陽性。 （3）盡量不用抗凝血，尤其不能用肝素抗凝血。 抗凝不完全的標本因纖維蛋白原的干擾也可產(chǎn)生假陽性。 （4）標本在

12、冰箱中保存不宜過長 易導致血清IgG聚合，使間接法試劑本底加深。 （5）盡量避免污染,4、建立臨床實驗室質量管理體系 最重要的一點： “實驗室質量管理文件”的書寫文件包含：質量手冊、程序性文件、作業(yè)指導書和相關表格、報告等質量記錄。 程序性文件：包括管理性和技術性文件兩種。 作業(yè)指導書：包括檢測細則、標準操作程序(SOP) 以文件形式存在，便于查閱，并

13、確保得到實施。,（二）分析中質量控制 1、如何做好病毒性肝炎酶免檢驗質控物定值的選擇？ 2、質控品的正確使用； 3、ELISA檢測方法的注意事項； 4、室內質控的實際操作步驟；,1.如何做好病毒性肝炎酶免檢驗質控物定值的選擇？ 質控物：高值、中值、低值及陰性值； 設置臨界于cut-off(CO值)的低值弱陽性質控物是室內質控的關鍵； 低值

14、弱陽性臨界值質控物 是室內質控精密度觀察的最敏感的窗口，是提示試驗成功與否的最重要標志； 不是判斷陰陽性的標準。,,現(xiàn)有的室內質控血清 項目 梅毒螺旋體抗體 質控血清 抗HIV 國家二級標準物質 抗HCV 國家二級標準物質 抗HAVIgM

15、 質控血清 HBcAbIgM 質控血清 HBcAb 質控血清 HBeAb 質控血清 HBeAg 質控血清 HBsAb 質控血清 HBsAg 國家二級標準物質 由國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局批準，

16、可在國家標準物質信息平臺上檢索到，網(wǎng)址：http：//www.ncrm.org.cn,,,,2、質控品的正確使用,用 途：靈敏度控制、精密度控制 。 穩(wěn)定性： 1、室溫（20-25 ℃，相對濕度20-25%）可穩(wěn)定兩周； 2、高溫高濕度（37 ℃，相對濕度60-80% ）條件下，可穩(wěn)定3天； 3、在冰箱內冷藏（2-8 ℃）保存，可穩(wěn)定一年； 4、-20℃保存可穩(wěn)定一年以上。,室內質控

17、血清的規(guī)格,HBeAg質控血清 定值 適用試劑1NCU/ml 進口的試劑2NCU/ml 國產(chǎn)試劑4NCU/ml 國產(chǎn)試劑 新的4NCU/ml≈原0.25 NCU/ml,,

18、,,HBeAb質控血清 定值 適用試劑 1NCU/ml 進口的試劑 2NCU/ml 進口的試劑 4NCU/ml 國產(chǎn)試劑,,,,3、 檢測方法的注意事項,? 結果判

19、讀 衛(wèi)藥發(fā)（1995）第32號及（1996）第25號文要求： 凡開展ELISA檢測項目的單位，必須使用酶標儀判讀結果，不準使用目測法。,? ELISA測定的“灰區(qū)”,是指ELISA測定時，吸光度處于Cut—off值周圍的一定區(qū)域，其結果應為“可疑”。需重復實驗或換試劑重測以確定其陰、陽性，如仍落在灰區(qū)范圍內則報告±值。 ? 灰區(qū)概念對血站系統(tǒng)的

20、獻血員篩查尤為重要 灰區(qū)的設置有兩種 （1）C.O×（1±CV），CV為該試劑的批內CV（一般在15%--20%間）。如：HBsAg 1.05 ×（1±18%） （2）C.O±2s，s為實驗室做室內質控OCV的s。如：HBsAg 1.05±2 × 0.189,? 原始記錄,（1）分類別、客觀、如實、準確、及時登記，項目齊全、書寫清晰、

21、規(guī)范； （2）陰、陽性與可疑結果不能用“ +、- 、±”表示，必須用漢字書寫或蓋印章； （3）ELISA試驗每次檢測必須有原始酶標儀打印結果，其S/c.o值應與原始登記結果一一對應； （4）定量試驗結果必須采用法定的國際計量單位；,4、室內質控的實際操作步驟,1）設定靶值和控制限 2）特殊情況的處理：如Crubbs氏法 3）更換試

22、劑及質控品： 應在“舊”批號質控品使用結束前與“新”批號質控品一起測定，設立新的靶值和控制限。 4）繪制質控圖及記錄質控結果：根據(jù)質控圖的靶值和控制限繪制Levey---Jennings控制圖，將原始質控結果記錄在質控圖表上，保留打印的原始質控記錄。,5）質控規(guī)則的應用： 判斷每一分析批是在控還是失控。 6）失控情況處理： 失控----填寫失控報告單----交專業(yè)室

23、主管（組長）---- 作出是否發(fā)出檢驗報告的決定。,7）失控原因分析 操作失誤、試劑、校準物、質控品的失效，儀器維護不良以及采用的質控規(guī)則、控制限范圍、一次測定的質控標本數(shù)等。 失控信號出現(xiàn)：意味著與測定質控品相關的那批病人標本報告可能作廢。 8）查明失控原因 隨機挑選5%或10%的患者標本進行重測，依既定標準判斷先前測定結果是否可接受，對失控做出正確判斷。,

24、（三）分析后質量控制,1、實驗結果報告 （1）統(tǒng)一的報告形式，包含必要的信息，應有核對制度，當天的報告應由主管或主管委托人審核，簽字或蓋章后方能發(fā)出。 （2）各項目原始數(shù)據(jù)及測定結果應保存3—10年，便于查詢。 （3）如遇危及生命的“緊急值”，應立即通知臨床診治醫(yī)師予以處置。,,2、室內質控數(shù)據(jù)管理（1）每月室內質控數(shù)據(jù)處理；（2）每月室內質控數(shù)據(jù)保存；（3）每月上報的室內質控數(shù)據(jù)圖表。