淺談甘油的原理與創(chuàng)新

1、1淺談甘油的原理與創(chuàng)新寧摘要:以帶小棒鏈霉菌XC135為出發(fā)菌株，經紫外線照射60s，并結合甘油耐受性菌株的理性篩選，選育得到較佳誘變株XC548，效價達1970μgml。該菌株經斜面連續(xù)傳代4次，效價穩(wěn)定在1800μgml以上。對該菌株的生理特性研究表明，其具有活力較強的甘油特異誘導的甘油轉運系統(tǒng)(GTS)。以XC548菌株為試驗菌株，當培養(yǎng)基中甘油初始濃度為1.5%，并且在發(fā)酵60h時補加1.0%的甘油，搖瓶發(fā)酵的效價可達2668μ

2、gml，較出發(fā)菌株(318μgml)提高了7.4倍。該工藝應用于15L發(fā)酵罐共十個批次的發(fā)酵試驗，96h時克拉維酸的平均效價達2103μgml。關鍵詞：甘油；原理；創(chuàng)新Abstract:inStreptomycesclavuligerusXC135asstartingstrainafterUVirradiationof60scombiningwiththescreeningofglyceroltolerancestrainsbreedi

3、ngisrationalmutantXC548thetiterof1970μgml.Thestrainwasinclined4passageswasstableatmethan1800μgml.Studyshowsthatphysiologicalacteristicsofthisstrainwhichhasstrongglycerolglyceroltransptsystemactivityinduced(GTS).StrainXC5

4、48wasedastheteststrainwhentheinitialconcentrationofglycerolmediumf1.5%adding1%glycerol312000rmin離心10min后，用重蒸水適當稀釋，供HPLC檢測。色譜條件為：色譜柱C18，ODS(4.6mm150mm)，柱溫25℃。檢測器：VWD(SPD10A)，檢測波長220nm，流動相：0.02molKH2PO4∶乙腈(400∶12，體積比)，流速0.

5、7mlmin，進樣量10μl。菌絲濃度測定取10ml發(fā)酵液，4000rmin離心15min，測得沉淀物在發(fā)酵液中所占的比例即為菌絲濃度。pH測定pH電極測定。(4)菌種誘變處理單孢子懸液的制備將冷凍孢子移種子斜面，培養(yǎng)成熟后加入500μgml的無菌咖啡因溶液(作助變劑)，刮下孢子并打散，用無菌濾紙過濾即得。誘變處理吸取5ml單孢子懸液于無菌平板中，置于功率為30W，波長253.7nm的紫外燈直下30cm處開蓋振蕩照射60s，避光放置過夜

6、，取樣經梯度稀釋后涂平板，28℃，避光培養(yǎng)9d左右，挑取單菌落轉接斜面。(5)甘油耐受性突變株的篩選將經紫外線照射的孢子懸液稀釋后，分別涂布于含有一定甘油濃度的分離平板上，28℃培養(yǎng)9～12d。2結果與討2.1甘油耐受性突變株的篩選帶小棒鏈霉菌存在著甘油誘導的甘油轉運系統(tǒng)(GTS)，在甘油耐受性高的菌株中GTS活力強，可高效轉運甘油合成克拉維酸。為此，試驗中采用耐受高濃度甘油的平板篩選UV誘變后的突變株。(1)菌株XC135對甘油的耐受