人類干擾素調節(jié)因子7重組蛋白的純化和抗體制備.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、干擾素（IFNs）是宿主抵御病毒感染的最早期免疫應答的重要參與者。其在引發(fā)抗病毒反應和細胞生長調控以及免疫激活等方面起著重要的作用，其中IFN家族中的I型IFN又是人類先天和后天免疫應答的主要組成因子，其誘導的宿主細胞抗病毒應答是宿主抗病毒感染的主要防御機制。而干擾素調節(jié)因子7（IRF-7）作為一種參與I型干擾素誘導合成和活性調控的關鍵性調控因子，在抗病毒感染方面有著重要的地位。此外IRF-7還可直接作用于病毒的啟動子以達到抑制病毒激活

2、的目的。
　　 本文以原核表達質粒pET28a為載體，構建了一系列的IRF-7重組質粒，分別是pET28a-IRF-7A(146-246 aa)、pET28a-IRF-7A(146-311 aa)、pET28a-IRF-7A(373-467aa)、pET28a-IRF-7A(274-467 aa)、pET28a-IRF-7A(146-503 aa)和pET28a-IRF-7A(146-227 and323-503 aa)，并將它

3、們分別轉化E.coli BL21(DE3)以備誘導表達，并對其中含pET28a-IRF-7A(274-467 aa)、pET28a-IRF-7A(146-503aa)質粒的克隆進行了蛋白誘導表達條件的優(yōu)化，最終確定了兩者的最終誘導條件為0.05 mmol/L的IPTG，28℃，誘導時長為4h。以此誘導條件對蛋白IRF-7A(274-467 aa)和IRF-7A(146-503aa)進行了大量誘導表達，并利用Ni親和層析的方法對它們進行了

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