青花菜離體雌核培養(yǎng)及啟動胚胎發(fā)育關(guān)鍵基因的表達(dá)分析.pdf

1、青花菜(Brassica oleracea var.italica)栽培歷史悠久，具有顯著的雜種優(yōu)勢和重要的營養(yǎng)價值，但國內(nèi)的研究起步較晚，對青花菜純合品系的培養(yǎng)一直停留在運用小孢子培養(yǎng)技術(shù)階段，而對離體雌核培養(yǎng)誘導(dǎo)發(fā)育的研究未有進(jìn)展。本試驗從青花菜未受精胚珠培養(yǎng)入手，建立一套雌核誘導(dǎo)培養(yǎng)體系，旨在為十字花科蕓薹屬植物開辟一條新的單倍體培養(yǎng)路徑。
　　本研究以10份青花菜不同基因型品種為供試材料，主要集中于對基因型差異、采蕾期、外

2、植體發(fā)育程度、黑暗熱激處理時問及外源激素濃度五個因素進(jìn)行篩選。在對再生植株的倍性鑒定方面，采取了形態(tài)學(xué)鑒定與SSR分子標(biāo)記相結(jié)合的方式對雙單倍體(DH)植株進(jìn)行了準(zhǔn)確鑒別。初步建立了雌核誘導(dǎo)培養(yǎng)技術(shù)體系。在此基礎(chǔ)上對雌核胚胎發(fā)育時期的調(diào)控基因CDC16、PRL誘導(dǎo)自后表達(dá)進(jìn)行了分析。主要結(jié)果如下:
　　1.本研究選取10個基因型的青花菜品種，其中有3個基因型品種的雌核離體培養(yǎng)獲得了再生植株，誘導(dǎo)率達(dá)30％。
　　2.在對采蕾

3、期不同的供試材料比較中發(fā)現(xiàn)，各再生植株誘導(dǎo)成功的品種，均以在開花前6h采蕾進(jìn)行雌核誘導(dǎo)發(fā)育所獲再生植株比例最高。
　　3.外植體（花蕾）長度為8.0～10.0mm（子房長度6-7mm之間）時，雌核誘導(dǎo)出的愈傷組織生成比例均可達(dá)50％左右，適合進(jìn)行培養(yǎng)。
　　4.不同的黑暗熱激處理時間表明，在接種后進(jìn)行黑暗熱激處理6d未受精胚珠的轉(zhuǎn)綠數(shù)及后代再生植株數(shù)均達(dá)最多。
　　5.對培養(yǎng)基中最佳外源激素濃度組合的篩選試驗表明，不同

4、基因型所需最適激素濃度有差異。11J-31在MS+6.0 mg·L-12，4-D+0.5 mg·L-1 NAA+1.0mg·L-16-BA,11J-63及11J-173在MS+2.0 mg·L-12,4-D+1.0 mg·L-1 NAA+1.0mg·L-16-BA的組合培養(yǎng)基上再生植株誘導(dǎo)效果最好。
　　6.形態(tài)學(xué)方法結(jié)合SSR分子標(biāo)記技術(shù)對雙單倍體及其他倍性植株（包括二倍體、嵌合體及多倍體等）進(jìn)行鑒別，發(fā)現(xiàn)青花菜雌核再生植株中雙