嵌段聚合物對蛋白結(jié)晶調(diào)控的作用研究.pdf

1、眾所周知，蛋白質(zhì)是生物活性物質(zhì)中非常重要的一類，而且是大多數(shù)藥物的作用靶標，因此對蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)的確定就顯得尤為重要。對于蛋白質(zhì)等生物大分子具體結(jié)構(gòu)的解析，通過培養(yǎng)蛋白質(zhì)晶體進行X射線衍射分析是最可靠的方法。蛋白質(zhì)分子的結(jié)晶是一個多參數(shù)控制的復(fù)雜過程，包括物理，化學(xué)，生物化學(xué)等因素，具體的分為：溫度、時間、電解質(zhì)性質(zhì)、粘度、離子強度、過飽和度、蛋白質(zhì)純度、蛋白質(zhì)本身的對稱性以及蛋白質(zhì)穩(wěn)定性和蛋白質(zhì)等電點等因素的影響。為了獲得合適的蛋白晶

2、體就必須對這些因素加以綜合考慮，選擇合適的沉淀劑來提高蛋白的結(jié)晶效率。
　　 雞蛋清中的溶菌酶是當(dāng)前研究最清楚的蛋白質(zhì)之一，該酶分子量為14000，等電點10.5～11.2，pH值在1.2～11.3范圍內(nèi)劇烈變化時，結(jié)構(gòu)仍穩(wěn)定不變。雞蛋清溶菌酶蛋白很容易形成單晶，被視為結(jié)晶模型蛋白。因此選擇這種模型蛋白作為我們的研究對象，有利于我們的實驗研究。
　　 近年來，嵌段共聚物通過自身在溶液中的自組裝來調(diào)控碳酸鈣等小分子物質(zhì)在溶

3、液中結(jié)晶，進而獲得可控的且具有特異性的復(fù)合材料受到了廣泛的關(guān)注。這些形態(tài)形成機制主要集中在高聚物的選擇性吸附、微觀尺度轉(zhuǎn)化以及高度自組裝等方面。通過自身合成嵌段聚合物來探討它們在溶液中的自組裝行為，以及對溶菌酶蛋白質(zhì)的結(jié)晶是否也有類似的影響，進而為蛋白結(jié)晶沉淀劑的選擇提供了優(yōu)勢，為調(diào)控蛋白質(zhì)晶體結(jié)構(gòu)與蛋白質(zhì)工程開辟一條新的途徑。主要應(yīng)用小角X射線散射（Small Angle X-ray Scattering），光散射（Dynamic L

4、ightScattering& Static Light Scattering）以及透射電鏡（Transmission ElectronMicrograph）來研究嵌段共聚物在溶液中的自組裝。通過我們的實驗證明，當(dāng)這些高聚物溶液中加入大量電解質(zhì)小分子時，自組裝遭到一定程度的破壞，最后形成的溶菌酶蛋白晶體形貌沒有明顯的差別。相反，從溶液中去掉這些小分子化合物，能夠形成不同形貌的溶菌酶晶體。
　　 因此本碩士論文以溶菌酶為模型蛋白，