布比卡因與左旋布比卡因對大腸癌細胞的作用及其與內質網應激通路的相關性研究.pdf

1、目的：
　　研究1mM布比卡因與1mM左旋布比卡因培養(yǎng)24-48小時后人大腸腺癌細胞系Caco-2的各項腫瘤細胞活性指標以及內質網應激通路標志蛋白的表達水平，包括：癌細胞遷移能力，核蛋白Ki67，膜聯蛋白V(Annexin V)和碘化丙啶(PI)，78kDa葡萄糖調節(jié)蛋白(Grp78)和C/EBP同源蛋白(CHOP)。
　　方法：
　　本實驗于體外培養(yǎng)人大腸腺癌細胞株Caco-2并將細胞隨機分為四組：空白組(N組)；載

2、體對照組(V組)-1mM DPBS液；布比卡因組(B組)-1mM鹽酸布比卡因；左旋布比卡因組(L組)-1mM鹽酸左旋布比卡因。各組在相同條件下培養(yǎng)24小時后（劃痕實驗取24小時與48小時兩個時間點），使用細胞劃痕實驗以檢測癌細胞的遷移能力；使用免疫熒光技術計算Ki67陽性率比較組間細胞周期情況；使用流式細胞術檢測膜聯蛋白V和碘化丙啶的表達情況以研究大腸癌細胞的凋亡水平；使用蛋白免疫印跡法和免疫熒光實檢測內質網應激通路標志蛋白Grp78和

3、CHOP的表達水平與核聚集現象。
　　結果：
　　在連續(xù)48小時體外培養(yǎng)過程中，布比卡因組(p<0.01)與左旋布比卡因組(p<0.001)的大腸癌細胞遷移速度顯著慢于空白組與載體對照組；在24小時培育后，B組與 L組的癌細胞胞核中Ki67的陽性率(B組為54.93±7.64，L組為57.23±8.04)顯著低于N組(92.33±6.74)和V組(98.66±1.17)(p<0.01)；通過流式細胞術測得24小時培育后，布比

4、卡因與左旋布比卡因處理并未引起大腸癌細胞的顯著凋亡；通過Western Blot和免疫熒光技術測得相比N組和V組，Grp78在B組和L組中表達明顯降低（p<0.05），而CHOP在B組和L組中表達明顯增高(p<0.05)，同時CHOP在熒光圖中呈現顯著的核聚集現象。
　　結論：
　　在體外培養(yǎng)的條件下，1mM布比卡因或左旋布比卡因24-48小時的處理可使人大腸腺癌細胞的遷移能力與增殖能力受到同等水平的顯著抑制但不能誘發(fā)凋亡，