納米炭搭載化療藥對大鼠肝癌淋巴示蹤效果的實驗研究.pdf

1、納米炭混懸注射液(卡納琳)已成熟用于臨床，可為惡性腫瘤根治性手術(shù)提供良好的淋巴示蹤效果。在甲狀腺癌，乳腺癌，胃腸道惡性腫瘤方面報道很多，在肝癌方面報道罕見。本研究組一直致力于納米炭在肝癌淋巴示蹤方面的臨床應(yīng)用性研究，納米炭對(大鼠)肝癌切緣及淋巴引流示蹤效果方面的研究，證明了納米炭對(大鼠)肝癌淋巴引流示蹤具有明顯的作用，能夠提高(大鼠)肝癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)切除的陽性率；此外，在納米炭和亞甲藍(lán)對(兔)肝癌淋巴引流示蹤效果方面的對比性研究，也證

2、明了納米炭比亞甲藍(lán)在(兔)肝癌引流淋巴結(jié)黑染程度更明顯，縮短了術(shù)中淋巴結(jié)清掃所用的時間。本實驗主要確切了解納米炭搭載化療藥物后電鏡下的形態(tài)及結(jié)構(gòu)，比較單純納米炭與納米炭搭載化療藥后在大鼠肝癌淋巴引流的示蹤效果。
　　目的：使用掃描電鏡拍攝單純納米炭及納米炭搭載不同化療藥物后的形態(tài)及結(jié)構(gòu)。比較單純納米炭混懸液與納米炭搭載不同化療藥物的混懸液對大鼠肝癌淋巴引流的示蹤效果區(qū)別，為肝癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的清掃及淋巴靶向化療提供參考。
　　方

3、法：
　　1、試劑制備方法
　　1.1、使用漩渦+水浴超聲振搖方法制備納米炭搭載5-Fu混懸液、納米炭搭載表阿霉素混懸液。
　　1.2、將納米炭混懸液、5-Fu注射液、納米炭搭載5-Fu混懸液、納米炭搭載表阿霉素混懸液通過冷凍干燥法制成凍干粉劑，使用FEI Quanta200(USA)掃描電鏡拍攝單純納米炭、納米炭搭載5-Fu、納米炭搭載表阿霉素的電鏡照片。
　　2、動物模型制作方法及實驗分組
　　選用Wa

4、lker-256細(xì)胞株，采取大鼠腹腔注射，經(jīng)腹水培養(yǎng)擴(kuò)增癌細(xì)胞。抽取癌性腹水離心提純，取得高純度的癌細(xì)胞，然后，采用直接注射法制備大鼠肝癌模型，將此模型分別設(shè)立A\B\C三組，每組各30例。A組(實驗組)：納米炭搭載5-Fu混懸液注射；B組(實驗組)：納米炭搭載表阿霉素混懸液注射；C組(對照組)：單純納米炭混懸液注射。三組均被實施開腹術(shù)中行肝癌瘤體中心注射混懸液，注射后觀察三組肝癌區(qū)域淋巴引流黑染的效果。注射后觀察30min，待淋巴結(jié)黑

5、染穩(wěn)定，模擬人肝癌根治術(shù)清掃黑染淋巴結(jié)，淋巴結(jié)清掃分為三組，即近距離組、中距離組、遠(yuǎn)距離組。近距離組設(shè)定第一、第二肝門附近的淋巴結(jié)；中距離組設(shè)定肝十二指腸韌帶、肝胃韌帶周圍淋巴結(jié)；遠(yuǎn)距離組設(shè)定腸系膜根部及腹主動脈周圍淋巴結(jié)。記錄清掃黑染淋巴結(jié)的數(shù)量、位置。觀察淋巴結(jié)黑染程度，淋巴結(jié)顏色無改變記為0分；淋巴結(jié)部分染黑或者染成灰色記為0.5分；淋巴結(jié)全部染黑記為1分。所有清掃的黑染淋巴結(jié)均逐例標(biāo)記后，浸入10％中性甲醛溶液中保存，行HE染色

6、，鏡下觀察淋巴結(jié)有無癌轉(zhuǎn)移，記錄陽性轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的數(shù)量。
　　3、統(tǒng)計方法
　　采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。三組清掃黑染淋巴結(jié)的數(shù)量各自以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(?x±S)表示，多組間進(jìn)行比較在滿足正態(tài)性及方差齊性的情況下，采用單因素方差分析，計數(shù)資料采用卡方檢驗，均以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：拍攝到納米炭、5-Fu、表阿霉素、納米炭搭載5-Fu及納米炭搭載表阿霉素后的掃描電鏡照片。
　　三組共清

7、掃黑染淋巴結(jié)876枚。納米炭搭載5-Fu組，清掃淋巴結(jié)總數(shù)292枚，平均14.83±0.874枚；納米炭搭載表阿霉素組，清掃淋巴結(jié)總數(shù)275枚，平均14.60±1.133枚；納米炭組，清掃淋巴結(jié)總數(shù)309枚，平均14.73±0.772枚。經(jīng)正態(tài)性檢驗P均>0.05，數(shù)據(jù)服從正態(tài)分布。經(jīng)方差齊性Levene檢驗，P=0.853(P＜0.05)，滿足方差齊性；三組比較采用方差檢驗：F=0.045，P=0.956(P＞0.05)，結(jié)果提示：三

8、組黑染淋巴結(jié)數(shù)量無顯著性差異，說明搭載不同化療藥物后的納米炭混懸液與單純納米炭混懸液在大鼠肝癌區(qū)域引流淋巴結(jié)黑染的數(shù)量方面無明顯差別。
　　納米炭搭載5-Fu混懸液組清掃淋巴結(jié)總數(shù)292枚，近距離組107枚，占33.6％；中距離組129枚，占32.8％；遠(yuǎn)距離組56枚，占33.3％。納米炭搭載表阿霉素混懸液組清掃淋巴結(jié)總數(shù)275枚，近距離組102枚，占32.1％；中距離組121枚，占30.8％；遠(yuǎn)距離組52枚，占31.5％。單純納

9、米炭混懸液組清掃淋巴結(jié)總數(shù)309枚，近距離組109枚，占34.3％；中距離組143枚，占36.4％；遠(yuǎn)距離組57枚，占34.5％。三組黑染淋巴結(jié)位置構(gòu)成比經(jīng)X2檢驗，P>0.05。結(jié)果表明，三組黑染淋巴結(jié)在不同位置的分布數(shù)量的構(gòu)成比無顯著性差異，說明搭載不同化療藥物后的納米炭混懸液與單純納米炭混懸液在大鼠肝癌不同區(qū)域淋巴結(jié)示蹤效果方面無明顯差別。
　　納米炭混懸液組淋巴結(jié)黑染評分為0.876，納米炭搭載表阿霉素混懸液組淋巴結(jié)黑染評

10、分為0.764，納米炭搭載5-Fu混懸液組淋巴結(jié)黑染評分為0.783，結(jié)果表明，三組淋巴結(jié)黑染程度相差不大，說明搭載不同化療藥物后的納米炭混懸液與單純納米炭混懸液在區(qū)域引流淋巴結(jié)黑染程度方面無明顯差別。
　　納米炭搭載5-Fu混懸液組清掃淋巴結(jié)總數(shù)292枚，其中HE染色陽性轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)有7枚，陽性轉(zhuǎn)移率為2.40％；納米炭搭載表阿霉素混懸液組清掃淋巴結(jié)總數(shù)275枚，其中HE染色陽性轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)有5枚，陽性轉(zhuǎn)移率為1.82％；納米炭

11、混懸液組清掃淋巴結(jié)總數(shù)309枚，其中HE染色陽性轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)有8枚，陽性轉(zhuǎn)移率為2.59％；三組黑染淋巴結(jié)中的陽性轉(zhuǎn)移率經(jīng)Fisher精確檢驗，P>0.05。結(jié)果表明，三組黑染淋巴結(jié)中陽性轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的檢出率無顯著性差異，說明搭載不同化療藥物后的納米炭混懸液與單純納米炭混懸液在陽性轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的檢出率方面無明顯差別。
　　通過以上結(jié)果可以說明納米炭搭載不同的化療藥物與單純納米炭對大鼠肝癌淋巴結(jié)示蹤效果無顯著性差異。
　　結(jié)論：納