microRNA在氯乙烯致大鼠DNA損傷和細胞周期改變中的作用.pdf

1、目的：
　　通過檢測亞慢性染毒氯乙烯（VCM）對大鼠肝臟細胞細胞周期時相分布的影響和大鼠外周血淋巴細胞DNA損傷情況，探討氯乙烯致癌過程中G1/S期監(jiān)測點功能變化以及致DNA損傷的劑量-反應關系；檢測相關大鼠肝臟miRNAs表達水平改變，探討miRNAs在VCM致細胞周期改變中的作用，從分子水平探討氯乙烯致肝臟腫瘤的發(fā)病機制。
　　方法：
　　選用96只健康雄性SD大鼠，按體重隨機分成4組，每組24只，分別為對照組、V

2、CM低劑量(5mg/kg)、中劑量(25mg/kg)和高劑量(125mg/kg)三個劑量組。采用腹腔注射染毒，隔日染毒，每周3次。在染毒6、8、12周后分別隨機處死8只大鼠。
　　1．VCM致肝細胞遺傳毒性的研究：應用彗星實驗研究外周血淋巴細胞DNA損傷水平；應用流式細胞技術研究肝細胞細胞周期的改變。
　　2．肝細胞miR-199a-3p、miR-221、miR-222的表達水平：處死大鼠取其肝臟，提取total RNA并進

3、行逆轉錄反應，應用實時熒光定量PCR檢測肝臟組織中上述miRNA的表達量，采用2-△△Ct法進行數(shù)據(jù)分析。
　　結果：
　　1．大鼠一般情況、體重變化及肝體比
　　大鼠在染毒期間一般情況和進食均未見異常，各個組均未出現(xiàn)明顯中毒癥狀。各組動物體重均呈正常的增長趨勢，且差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。8周和12周染毒結束時，各染毒組大鼠的肝體比均低于對照組，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　2．彗星實驗研究

4、外周血淋巴細胞DNA損傷水平
　　VCM染毒8周后，高劑量組（125mg/kg）淋巴細胞尾部DNA含量百分比明顯高于對照組，且差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。
　　VCM染毒12周后，與對照組相比， Olive尾距和尾長各劑量組都明顯增高（P<0.05）；中劑量組（25 mg/kg）尾部DNA含量百分比低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　3．流式細胞術檢測大鼠肝臟細胞周期分布變化
　　VCM染毒

5、6周后，各染毒組大鼠肝細胞G1期百分比隨劑量的增加而呈上升趨勢，其中高劑量組（125mg/kg）的G1期分布百分比明顯高于對照組，且差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　VCM染毒8周后，低劑量組（5mg/kg）G1期分布百分比低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；低劑量組S期分布百分比高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　VCM染毒12周后， S期分布百分比隨劑量的升高而呈上升趨勢，高劑量組（125

6、mg/kg）S期分布百分比明顯高于對照組，且差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　4．實時熒光定量PCR檢測大鼠肝細胞miR-199a-3p、miR-221、miR-222的表達情況
　　VCM染毒6周后，大鼠肝臟組織miRNA-221和miRNA-222相對表達水平都隨著VCM染毒劑量的增加而呈下降的趨勢，高劑量組miRNA-221和miRNA-222相對表達量均明顯低于對照組（P<0.05）；與對照組相比，中劑量和高劑

7、量miRNA-199a-3p相對表達量均降低（P<0.05）。
　　VCM染毒8周后，低劑量組miRNA-221和miRNA-222相對表達量均高于對照組，但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；各個劑量組miRNA-199a-3p相對表達量隨著VCM染毒劑量的增加而呈現(xiàn)上升的趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　VCM染毒12周后，大鼠肝臟miRNA-221相對表達量隨著VCM染毒劑量的增加而呈上升的趨勢，低劑量組m

8、iRNA-221相對表達量低于對照相（ P<0.05）；miRNA-222相對表達量隨著VCM染毒劑量的增加而呈上升的趨勢，但與對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；miRNA-199a-3p相對表達量隨著VCM染毒劑量的增加而呈上升的趨勢，低劑量組和中劑量組的miRNA-199a-3p相對表達量均低于對照組（P<0.05）。
　　5．大鼠肝臟細胞周期與miR-199a-3p、miR-221、miR-222表達水平的相關分

9、析
　　VCM染毒6周后，大鼠肝臟細胞miRNA-221、miRNA-222和miRNA-199a-3p的表達水平與G1期分布百分比呈負相關，相關系數(shù)r分別為0.6、0.44、0.51，且具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　VCM染毒8周后，大鼠肝臟細胞miRNA-221、miRNA-222和miRNA-199a-3p的表達水平與G1期和S期分布百分比均未呈現(xiàn)相關關系(P>0.05)。
　　VCM染毒12周后，大鼠肝

10、臟細胞miRNA-221、miRNA-222和miRNA-199a-3p的表達水平與G1期分布百分比未呈現(xiàn)相關關系(P>0.05)。大鼠肝臟細胞miRNA-221的表達水平與S期分布百分比呈現(xiàn)相關關系，相關系數(shù)為0.41，且有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；miRNA-222和miRNA-199a-3p的表達水平與S期分布百分比未呈現(xiàn)相關關系(P>0.05)。
　　結論：
　　1．在本實驗條件下，VCM染毒可導致大鼠外周血淋巴細