TGF-β1對(duì)靜壓力作用下PLGA支架上人牙齦成纖維細(xì)胞增殖及細(xì)胞外基質(zhì)合成的影響.pdf

1、目的:①構(gòu)建PLGA支架復(fù)合培養(yǎng)HGFs模型及力學(xué)加載模型，研究靜壓力對(duì)HGFs增殖的影響，探討TGF-β1的表達(dá)與HGFs增殖間的關(guān)系;②研究TGF-β1對(duì)靜壓力作用下HGFs的COL-Ⅰ、MMP-1表達(dá)的影響。
　　方法:體外培養(yǎng)HGFs，接種于PLGA支架上，建立PLGA支架復(fù)合培養(yǎng)HGFs模型。通過(guò)收集上清液檢測(cè)葡萄糖消耗量和乳酸脫氫酶含量，同時(shí)利用CCK-8檢測(cè)細(xì)胞增殖活性，分析三維環(huán)境對(duì)HGFs生長(zhǎng)增殖的影響;利用重力

2、加載裝置對(duì)HGFs施加靜壓力，大小為25g/cm2，加載時(shí)間分別為6h、24h、48h、72h組，對(duì)照組不加力(0h)，通過(guò)RT-PCR和ELISA技術(shù)檢測(cè)各組HGFs中TGF-β1、COL-Ⅰ和MMP-1表達(dá)的變化;并應(yīng)用TGF-β1抑制劑SB431542，檢測(cè)靜壓力作用下TGF-β1對(duì)HGFs中COL-Ⅰ和MMP-1mRNA和蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:①采用組織塊培養(yǎng)法，經(jīng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察及來(lái)源鑒定，成功培養(yǎng)HGFs。熒光顯微

3、鏡顯示PLGA支架上有HGFs密集生長(zhǎng)。②CCK-8結(jié)果顯示:隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，二維和三維培養(yǎng)的HGFs數(shù)量均逐漸增多。第3d二維培養(yǎng)組達(dá)最高峰，三維培養(yǎng)組仍處于指數(shù)生長(zhǎng)期。至第5d三維培養(yǎng)組達(dá)最高峰，而二維培養(yǎng)組已出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)量下降(P＜0.05)。隨后兩組細(xì)胞生長(zhǎng)速度均減慢。③葡萄糖消耗量和乳酸脫氫酶含量的檢測(cè)結(jié)果顯示:二維培養(yǎng)組第3d時(shí)葡萄糖消耗最高，乳酸脫氫酶最低，而三維培養(yǎng)組第5d時(shí)葡萄糖消耗最高，乳酸脫氫酶最低，隨后兩組葡萄糖

4、消耗均緩慢減少，乳酸脫氫酶則開始逐漸升高。④CCK-8結(jié)果顯示:與未加力組相比，在25g/cm2靜壓力作用下，除6h組外，其余各組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，24h組達(dá)到各組中最大值。隨著加力時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞數(shù)量下降。加入抑制劑與不加抑制劑相比，24h組細(xì)胞數(shù)量明顯減少(P＜0.05)。⑤RT-PCR和ELISA結(jié)果一致，顯示:在25g/cm2靜壓力作用下，隨著加力時(shí)間延長(zhǎng)，TGF-β1、COL-ⅠmRNA和蛋白表達(dá)升高，24h

5、達(dá)到各組中最大值，隨著時(shí)間延長(zhǎng)表達(dá)逐漸下降;而MMP-1mRNA和蛋白表達(dá)下降，24h其表達(dá)達(dá)到最低，隨著時(shí)間延長(zhǎng)表達(dá)逐漸升高;抑制TGF-β1后，COL-ⅠmRNA和蛋白的表達(dá)均隨之下降，MMP-1mRNA和蛋白的表達(dá)均隨之升高，24h組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　結(jié)論:①成功構(gòu)建PLGA支架復(fù)合培養(yǎng)HGFs模型。與二維培養(yǎng)相比，HGFs在PLGA支架上可獲得更強(qiáng)的細(xì)胞生長(zhǎng)增殖能力及細(xì)胞活性，培養(yǎng)第5d時(shí)增殖活性最好。②

6、25g/cm2的靜壓力促進(jìn)HGFs的增殖，作用24h達(dá)到峰值，但隨著加力時(shí)間延長(zhǎng)，這種促細(xì)胞增殖的能力受到抑制，HGFs的增殖與TGF-β1的表達(dá)呈正相關(guān)。③25g/cm2的靜壓力可促進(jìn)HGFs中TGF-β1、COL-ⅠmRNA和蛋白的表達(dá)，抑制MMP-1 mRNA和蛋白的表達(dá)，作用24h達(dá)到峰值，但隨著加力時(shí)間延長(zhǎng)，這種促表達(dá)或抑制能力會(huì)減弱。④25g/cm2靜壓力作用下，HGFs中的TGF-β1與COL-Ⅰ、MMP-1的表達(dá)有關(guān)，且