TPO對阿霉素作用下心肌細胞自噬和凋亡的影響及機制研究.pdf

1、阿霉素(doxorubicin，DOX)是一種廣泛應用的非常有效的抗腫瘤藥物，其心肌毒性是腫瘤治療中主要關注的問題。心肌細胞自噬在維持心肌功能中發(fā)揮重要作用，但自噬是把“雙刃劍”，關于自噬在DOX誘導心肌損傷中的作用以及一些心臟保護劑到底是通過促進自噬還是抑制自噬發(fā)揮心肌保護作用還存在爭議。近幾年，促血小板生成素(thrombopoietin，TPO)被發(fā)現具有心肌保護作用，有望成為新的心臟保護藥物，但TPO是否通過調控自噬來保護心肌細

2、胞尚未見報道。最新研究發(fā)現與TPO同源的促紅細胞生成素（erythropoietin，EPO）能夠調控上皮細胞的自噬，提出TPO也可能調控心肌細胞自噬。因此，本研究旨在(1)研究DOX和（或）TPO對心肌自噬的影響;(2)研究TPO調控心肌自噬的分子機制;(3)研究TPO作用下心肌自噬與凋亡的關系。
　　將心肌細胞系H9C2分為Control、DOX、DOX+BFA、DOX+TPO四個組。以自噬抑制劑巴佛洛霉素A1(bafilom

3、ycinA，BFA)作為實驗的陽性對照。各組細胞主要作如下檢測:(1)CCK-8染色法檢測細胞存活率;(2)Western-blot和實時定量PCR檢測自噬和凋亡相關分子的表達;(3)自噬小體檢測;(4)共聚焦顯微鏡檢測LC3與LAMP1共定位。
　　研究結果顯示，DOX處理使H9C2細胞的存活率明顯下降(p＜0.05)，而加入TPO組相較于單加DOX組，細胞存活率升高(p＜0.05)。加入DOX后，H9C2細胞自噬小體數量明顯增

4、多，而同時孵育TPO則使自噬小體數量減少(p＜0.05)。進一步檢測自噬相關基因的表達，發(fā)現與單DOX處理組相比，TPO使Beclin-1和LC3-Ⅱ的表達降低，而使p62表達升高，提示TPO能夠抑制DOX誘導的心肌細胞自噬。為了探討TPO對心肌自噬調控的機制，檢測了GATA-4、ATG14L、Rubicon的表達以及LC3和LAMP1共定位。結果發(fā)現，TPO可以增加H9C2細胞中GATA-4的表達。DOX使ATG14L、Rubicon

5、的表達水平下降。與對照組相比，DOX可誘導LAMP1的蛋白水平增加，但加入TPO對LAMP1的蛋白水平無明顯影響(p＜0.001)。此外，TPO對LC3和LAMP1的共定位無影響。最后，研究TPO作用下心肌細胞自噬與凋亡的關系。與DOX組相比，TPO使H9C2細胞中caspase-3的mRNA和蛋白水平都有所減少。TPO還可上調Bcl-2蛋白水平，對Bcl-2mRNA水平則沒有明顯的影響(p＜0.05）。
　　綜上所述，TPO能夠