食管鱗狀細胞癌USP22和Ku80表達的基礎研究及相關臨床意義.pdf

1、研究目的:
　　食管癌(Esophageal Carcinoma)是全世界最常見的惡性腫瘤之一。食管癌高發(fā)區(qū)集中在亞洲、非洲和拉丁美洲等發(fā)展中國家。我國是食管鱗癌(EsophagealSquamous Cell Carcinoma，ESCC)高發(fā)地區(qū)，國外以食管腺癌為主。近年來，隨著食管癌多學科治療廣泛開展及應用，出現(xiàn)了基于食管鱗癌方面的免疫治療如PD-L1的隨機、平行、多中心3期臨床研究，食管癌診療水平逐步提高，但食管癌高復發(fā)及

2、高轉(zhuǎn)移率，目前5年總生存率僅20％-30％。由于ESCC的腫瘤異質(zhì)性，淋巴結(jié)狀態(tài)、腫瘤分化、病理分期等傳統(tǒng)預后因素不能很好預測食管癌復發(fā)、轉(zhuǎn)移風險，探索腫瘤預后有效預測標志物亟待解決，以確定高復發(fā)和高轉(zhuǎn)移食管癌的不同亞組，指導個體化治療策略和優(yōu)化食管癌治療，以利提高食管癌患者的生存期。
　　泛素特異性蛋白酶22(ubiquitin specific peptidase22，USP22)在多種惡性腫瘤中高表達，與腫瘤復發(fā)及轉(zhuǎn)移密切相

3、關。Ku80為DNA結(jié)合蛋白，與DNA末端及與DNA損傷雙鏈DNA斷裂(DSBs)相結(jié)合。Ku80與DSBs非同源末端結(jié)合(NHEJ)修復途徑密切相關，參與維持染色體端粒穩(wěn)定、細胞增殖、凋亡及信號轉(zhuǎn)導機制。本研究通過分析食管癌細胞株及癌組織USP22和Ku80蛋白表達狀態(tài)，探討USP22與Ku80表達相關性并分析二者間相互調(diào)控對食管鱗癌發(fā)生發(fā)展的作用，評價USP22-Ku80表達模型作為ESCC患者診斷、預后及治療分子表型意義，為ESC

4、C診療提供新思路。
　　研究方法:
　　1.USP22和Ku80在食管鱗癌細胞株中表達
　　免疫熒光檢測ECA109食管癌細胞和Ku80（病毒轉(zhuǎn)染后）過表達ECA109細胞中USP22和Ku80蛋白表達狀態(tài)。
　　Western blotting檢測食管鱗癌細胞系ECA109細胞和Ku80過表達ECA109細胞中USP22和Ku80蛋白表達水平。
　　2.USP22和Ku80在食管鱗癌患者腫瘤組織中的表達<

5、br>　　回顧性研究2010年1月到2010年12月山東大學附屬省立醫(yī)院胸外科食管癌切除術(shù)有完整隨訪資料80例食管鱗癌患者。男性58例，女性22例。ESCC病理標本采用免疫組織化學染色方法(immunohistochemistry, IHC)檢測腫瘤組織USP22和Ku80蛋白表達。
　　3.統(tǒng)計分析研究結(jié)果
　　腫瘤患者蛋白表達水平與臨床病理學特征的關系用x2檢驗、Western blotting所測兩組蛋白表達定量比較應

6、用t檢驗，術(shù)后生存分析采用Kaplan-Meier和Log-rank檢驗分析，連續(xù)型變量采用均值±標準差描述，二分類變量采用率和百分比描述，采用卡方檢驗比較組間是否有統(tǒng)計學差異，單因素及多因素的變量分析采用COX回歸分析。
　　研究結(jié)果:
　　1.USP22和Ku80在食管癌細胞株中表達
　　USP22和Ku80免疫陽性反應均呈紅色熒光，且定位于細胞核，overlap發(fā)現(xiàn)ECA109 Ku80過表達細胞中USP22蛋白

7、表達高于食管癌細胞系ECA109細胞系中表達水平。
　　ECA109 Ku80過表達細胞株中，Western blotting蛋白定量其Ku80過表達同時USP22蛋白表達明顯高于ECA109細胞USP22表達水平(P＜0.05)。
　　2.USP22和Ku80在食管鱗癌患者癌組織中表達
　　USP22蛋白和Ku80蛋白陽性表達產(chǎn)物表現(xiàn)為腫瘤細胞核內(nèi)棕黃色顆粒。80例ESCC患者分USP22陽性51例和陰性29例，Ku

8、80陽性55例和陰性25例。Ku80與USP22均陽性表達為44例，兩者表達呈正相關(r=0.501，P＜0.001)。USP22高表達狀態(tài)與腫瘤分化、T分期（P=0.008，P=0.005）顯著相關， Ku80表達與腫瘤的分化、T分期顯著相關（P=0.010，P=0.008）。單因素分析ESCC患者預后因素，與腫瘤分化、T分期、N分期、臨床分期、USP22及Ku80陽性表達水平顯著相關（P=0.001，P=0.023，P=0.005,

9、P=0.009，P＜0.001，P＜0.001）。COX多因素回歸分析:腫瘤分化、USP22陽性表達和Ku80陽性表達為患者總生存期(OS)獨立危險因素。
　　ESCC患者1，3，5年生存率為88.75％，45.00％，20.65％; USP22和Ku80兩者同時表達1，3，5年生存率為72.71％，18.22％，0;Ku80陽性組生存率低于陰性組（Log-rank x2=21.50，P＜0.001）;USP22陽性組生存率低于陰

10、性組（Log-rank x2=18.65，P＜0.001）;高分化組生存率高于中分化組和低分化組(Log-rank x2=14.94,P＜0.001)。
　　實驗結(jié)論:
　　1.USP22和Ku80免疫陽性熒光反應均定位于細胞核，呈紅色熒光，熒光overlap結(jié)果和Western blotting蛋白定量發(fā)現(xiàn)ECA109 Ku80過表達食管癌細胞株USP22蛋白表達高于食管癌ECA109細胞株中表達水平，USP22和Ku80

11、蛋白表達水平顯著相關。
　　2.USP22和Ku80在人ESCC中高表達，且兩者表達水平均與腫瘤組織分化和T分期相關，二者高表達呈現(xiàn)相關性，表達存在相互調(diào)控。
　　3.腫瘤分化程度，USP22和Ku80的表達水平均為ESCC患者術(shù)總生存期獨立危險因素，且兩者表達具有顯著相關性。
　　4.USP22-Ku80表達模型有望成為ESCC診斷、預后的分子分型及新治療靶點。
　　創(chuàng)新性及意義:
　　1.ESCC細胞中