農(nóng)達(dá)對雄性生殖細(xì)胞的毒性作用及其機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的：通過GC-1小鼠精原細(xì)胞體外試驗(yàn)及小鼠精子畸形體內(nèi)試驗(yàn),探討農(nóng)達(dá)對雄性生殖細(xì)胞的毒性作用及其可能作用機(jī)制。
　　 方法：GC-1小鼠精原細(xì)胞體外試驗(yàn):以GC-1細(xì)胞為受試細(xì)胞,通過MTT試驗(yàn)篩選農(nóng)達(dá)染毒濃度及NAC干預(yù)濃度。其后續(xù)試驗(yàn)中NAC干預(yù)濃度為10μmol/L,預(yù)處理1h,農(nóng)達(dá)染毒濃度定為60、90、120、150、180mg/L,染毒時(shí)間為24h。將GC-1細(xì)胞隨機(jī)分成對照組(第1組)、農(nóng)達(dá)染毒組(第2-6組)、

2、10mmol/L,NAC+90 mg/L農(nóng)達(dá)染毒干預(yù)組(第7組)。GC-1細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變,采用姬母薩染色法在光鏡下觀察;農(nóng)達(dá)對GC-1細(xì)胞膜通透性影響和細(xì)胞毒性作用采用乳酸脫氫酶(LDH)活性水平結(jié)合臺(tái)盼藍(lán)拒染法評價(jià);農(nóng)達(dá)誘導(dǎo)GC-1細(xì)胞氧化損傷程度選用超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量指標(biāo)評價(jià);用彗星實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞DNA損傷。小鼠精子畸形體內(nèi)試驗(yàn):將100只昆明種雄性小鼠隨機(jī)分為5組(每組20只),即2

3、90mg/kg、580mg/kg、1160mg/kg農(nóng)達(dá)染毒組、1個(gè)陰性對照組和1個(gè)陽性對照組。各染毒組和陰性對照組采用灌胃給藥,陽性對照組采用腹腔注射,連續(xù)給藥5天,將動(dòng)物于給藥第7、28、35天分三批處死,觀察睪丸、附睪重量及其臟器系數(shù),分析精子數(shù)和精子畸形率的變化。
　　 結(jié)果：⑴農(nóng)達(dá)在60-180mg/L處理濃度范圍內(nèi),能明顯引起GC-1細(xì)胞存活率的降低(P＜0.05),處理濃度和細(xì)胞存活率之間存在負(fù)相關(guān)(r=-0.99

4、2,p＜0.01)。⑵農(nóng)達(dá)在60-180mg/L處理濃度范圍內(nèi),引起GC-1細(xì)胞皺縮或腫大,染色質(zhì)濃染,細(xì)胞間隙擴(kuò)大,空泡樣變。隨著農(nóng)達(dá)濃度的增加變化明顯,細(xì)胞密度也明顯減少,細(xì)胞膜和核膜不完整或消失,染色質(zhì)嗜堿性降低。加入NAC有保護(hù)作用。⑶農(nóng)達(dá)在90-180mg/L處理濃度范圍內(nèi),引起細(xì)胞培養(yǎng)上清液中LDH活性增加(p＜0.05),臺(tái)盼藍(lán)染色實(shí)驗(yàn)表明農(nóng)達(dá)引起細(xì)胞膜受損率增加(p＜0.05),NAC能減少細(xì)胞毒性。⑷農(nóng)達(dá)在60-180

5、mg/L處理濃度范圍內(nèi),能明顯誘導(dǎo)細(xì)胞DNA的鏈斷裂,劑量越高,DNA斷裂程度越嚴(yán)重,彗星率越高(P＜0.05);NAC+90mg/L處理組,與90mg/L處理組相比DNA損傷程度減輕(P＜0.05)。⑸農(nóng)達(dá)在60-180mg/L處理濃度范圍內(nèi),隨染毒劑量增大,MDA生成增多SOD、GSH活性明顯降低,與對照組比較差異有顯著性(P＜0.05);加入NAC后有明顯保護(hù)作用(P＜0.05)。⑹與陰性對照組比較,580mg/kg、1160mg

6、/kg農(nóng)達(dá)劑量組可使小鼠精子數(shù)目明顯減少(p＜0.05)、精子畸形率明顯增加(p＜0.05)。⑺與陰性對照組比較,1160mg/kg農(nóng)達(dá)劑量組在染毒后早期可引起附睪重量和附睪系數(shù)下降,在染毒后晚期引起附睪和睪丸重量減輕,睪丸系數(shù)下降(p＜0.05)。
　　 結(jié)論：農(nóng)達(dá)在60mg/L-180mg/L范圍內(nèi),能引起GC-1細(xì)胞存活率下降,LDH活性增加,MDA生成增多、GSH和SOD活性降低以及DNA損傷,使細(xì)胞產(chǎn)生凋亡和壞死,對細(xì)