二甲雙胍上調miR-200c抑制乳腺癌細胞MCF-7、BT549生長、遷移和侵襲及相關機制研究.pdf

1、背景和目的：
　　近年來，越來越多的研究發(fā)現(xiàn)治療糖尿病的一線藥物二甲雙胍能夠降低包括乳腺癌在內的許多腫瘤的發(fā)生率和死亡率。其抗腫瘤作用涉及多種信號通路，其中miRNAs起著重要作用，但是其作用的具體機制有待深入研究。已有研究發(fā)現(xiàn)miR-200c在包括結直腸癌、膀胱癌等多種腫瘤中作為抑癌基因存在，并且在乳腺癌細胞系中差異表達。同時有研究證明二甲雙胍能夠通過調控miR-200家族對小鼠成纖維細胞瘤和胰腺癌細胞產(chǎn)生抗腫瘤作用。因此本研究

2、旨在探究二甲雙胍能否通過調控 miR-200c影響乳腺癌細胞生物學功能并探究其相關的分子機制，希望可以為乳腺癌早期發(fā)現(xiàn)和治療提供新的思路。
　　方法：
　　通過從基因芯片數(shù)據(jù)庫(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo)下載基因芯片(GSE1953)，分析miR-200c水平與乳腺癌病人生存期之間的關系。用熒光定量PCR實驗檢測不同乳腺癌細胞中 miR-200c的表達量。不同濃度的二甲雙胍作用于乳腺癌細

3、胞MCF-7和BT549以及用脂質體轉染的方式將pre-miR-200c、miR-200c inhibitor、NC轉染至乳腺癌細胞MCF-7。分別用CCK8實驗和平板克隆形成實驗檢測細胞增殖能力的變化，annexin V-APC/PI凋亡檢測試劑盒和流式細胞術檢測細胞凋亡能力的變化，劃痕修復實驗和Transwell小室實驗檢測細胞遷移、侵襲能力的變化，熒光定量PCR和western blot實驗檢測細胞miR-200c和相關蛋白表達量

4、的變化。
　　結果：
　　基因芯片數(shù)據(jù)分析顯示miR-200c含量升高與乳腺癌病人的生存期成正相關，熒光定量PCR顯示miR-200c在乳腺癌細胞中的表達量是下調的，其中在ER+上皮表型的MCF-7細胞含量高于三陰性間質表型的BT549細胞含量。不同濃度的二甲雙胍作用于乳腺癌細胞MCF-7和BT549后，細胞增殖、遷移和侵襲能力顯著減低，凋亡率升高，并且具有時間和濃度依賴性；同時細胞中miR-200c含量升高，原癌基因c-M

5、yc,AKT2, Bcl-2含量減低，抑癌基因p53升高。高表達miR-200c可產(chǎn)生與二甲雙胍作用相似的結果；而低表達miR-200c則產(chǎn)生與二甲雙胍作用相反的結果，并且該結果可被二甲雙胍逆轉。
　　結論：
　　miR-200c含量與乳腺癌病人生存期成正相關，并且其在乳腺癌細胞中的表達量是下調的，表明其在乳腺癌中可能為抑癌基因。二甲雙胍可上調miR-200c抑制乳腺癌細胞的增殖、遷移和侵襲，誘導其凋亡，該作用可能與原癌基因