31種融合基因在兒童急性白血病中的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、第一部分、31種融合基因在兒童急性淋巴細(xì)胞白血病中的表達(dá)
　　目的：分析兒童急性淋巴細(xì)胞性白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)的分子遺傳學(xué)改變與臨床特征的關(guān)系。
　　方法：收集并分析255例初診ALL患兒臨床及實(shí)驗(yàn)室資料，所有患兒均做骨髓細(xì)胞學(xué)、免疫分型、染色體核型分析并利用多重巢式PCR檢測(cè)31種白血病基因，檢測(cè)為陽(yáng)性者應(yīng)用split-out PCR驗(yàn)證。
　　結(jié)果：255例 A

2、LL中男性153例，女性102例，平均年齡63.07±2.67月。共104例檢出白血病基因（陽(yáng)性率40.78%），包括ETV6/RUNX1基因42例，E2A/PBX1基因17例，BCR/ABL基因15例，MLL基因16例，SIL/TAL1基因5例，HOX11基因5例，EVI1基因3例及SET/CAN基因1例。T-ALL基因檢出率低于B-ALL；ETV6/RUNX1、BCR/ABL基因C-B-ALL多見(jiàn)，E2A/PBX1和MLL基因分別多

3、見(jiàn)于pre-B-ALL和pro-B-ALL；ETV6/RUNX1基因多見(jiàn)于1-10歲組，MLL基因多發(fā)于＜1歲組，BCR/ABL基因多見(jiàn)于＞10歲組（P＜0.05）。
　　結(jié)論：采用多重巢式RT-PCR結(jié)合split-out PCR方法可方便快速檢測(cè)31種兒童常見(jiàn)的白血病基因，有助于兒童ALL精確分型、指導(dǎo)危險(xiǎn)度分層和治療。T-ALL基因檢出率較低，提示T-ALL可能需要其它方法進(jìn)行分子遺傳學(xué)分型。不同年齡組B-ALL分子遺傳學(xué)改

4、變存在差異，可能是不同年齡兒童B-ALL化療效果存在差異的原因之一。
　　第二部分、31種融合基因在兒童急性髓細(xì)胞白血病中的表達(dá)
　　目的：分析兒童急性髓細(xì)胞性白血病(acute myeloid leukemia,AML)的分子遺傳學(xué)改變與臨床特征的關(guān)系。
　　方法：收集并分析133例初診AML患兒臨床及實(shí)驗(yàn)室資料，所有患兒均做骨髓細(xì)胞學(xué)、免疫分型、染色體核型分析并利用多重巢式PCR檢測(cè)31種白血病基因，初篩試驗(yàn)為陽(yáng)性

5、者應(yīng)用split-out PCR驗(yàn)證。
　　結(jié)果：133例AML患兒中包括急性早幼粒細(xì)胞白血?。╝cute promyelocytic leukemia，APL）28例，非APL的AML患兒105例（男性62例，女性43例，平均年齡73.03±4.54月）。共98例檢出白血病基因（陽(yáng)性率73.68%），包括：AML/ETO基因31例，PML/RaRα基因28例，MLL重排基因12例，CBFβ-MYH11基因10例，HOX11基因及

6、TLS/ERG基因1例。EVI1基因22例（其中7例合并MLL重排基因）。APL患兒中檢出罕見(jiàn)型PML/RaRα基因2例。非APL患兒中AML/ETO及EVI1基因陽(yáng)性率最高，但各年齡組分子遺傳學(xué)分布無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。染色體檢查6例未見(jiàn)分裂象，可供分析99例患兒中73例為異常核型（陽(yáng)性率73.74%）。AML患兒染色體異常核型及基因檢出率均高于ALL（P＜0.05）。
　　結(jié)論：多重巢式RT-PCR結(jié)合split-RT

7、-PCR方法可方便快速檢測(cè)兒童AML常見(jiàn)融合基因，有助于完善AML精細(xì)分型。多重巢式RT-PCR聯(lián)合基因測(cè)序有助于檢測(cè)AML融合基因罕見(jiàn)突變位點(diǎn)，提高AML融合基因檢出率。比較ALL而言，聯(lián)合細(xì)胞遺傳學(xué)及檢測(cè)AML常見(jiàn)基因在指導(dǎo)兒童AML危險(xiǎn)度分層和臨床治療中具有更大意義。
　　第三部分、ETV6/RUNX1、E2A/PBX1或MLL基因在兒童急性B淋巴細(xì)胞白血病微小殘留病監(jiān)測(cè)中的價(jià)值
　　目的：分別利用流式細(xì)胞術(shù)（flow

8、cytometry，F(xiàn)CM）及PCR技術(shù)監(jiān)測(cè)兒童急性B淋巴細(xì)胞性白血?。˙ cell acute lymphoblastic leukemia，B-ALL）治療后微小殘留?。∕inimal residual disease，MRD）水平，分析兩種檢測(cè)方法的靈敏度及與預(yù)后的關(guān)系。
　　方法：61例初診時(shí)B-ALL患兒分為A組（ETV6/RUNX1基因陽(yáng)性）、B組（E2A/PBX1基因陽(yáng)性）和C組（MLL基因陽(yáng)性）并接受CCCG-AL

9、L-2008方案化療，治療后不同時(shí)間點(diǎn)（time piont，TP）行骨髓穿刺，使用FCM及PCR技術(shù)檢查評(píng)估TP2及TP3時(shí)MRD水平并分析與預(yù)后的關(guān)系。
　　結(jié)果：TP2及TP3時(shí)FCM-MRD和PCR-MRD檢測(cè)陽(yáng)性率無(wú)顯著差異（P＞0.05）。B組PCR-MRD檢測(cè)陽(yáng)性率高于FCM-MRD。隨訪至2017.02，61例患兒平均生存時(shí)間43.928±2.226月，3年EFS為80.0±5.4%。A組、B組和C組平均生存時(shí)間分

10、別為50.325±1.129月、24.867±3.608月及31.852±7.201月，3年EFS分別為93.1±4.7%、60.0±12.6%和62.9±17.9%，A組療效好于B組和C組（P＜0.05）。
　　結(jié)論：按照分子遺傳學(xué)進(jìn)行危險(xiǎn)度分組并分層治療可以有效提高兒童ALL的療效。使用FCM或PCR技術(shù)均可以有效檢測(cè)兒童B-ALL的MRD水平并指導(dǎo)其分層治療。雖然FCM或PCR技術(shù)檢測(cè)MRD效果相似，但B組和C組患兒可能更適