貫葉連翹提取物對(duì)大鼠肝纖維化的保護(hù)作用及部分機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　探討貫葉連翹提取物（Hypericum Perforatum Extract，HPE）對(duì)四氯化碳(CCl4)誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化的保護(hù)作用及部分機(jī)制研究。
　　方法：
　　48只Sprague Dawley(SD)大鼠隨機(jī)分為正常組、HPE單藥組(HPE灌胃)、模型組(CCl4處理)、HPE高劑量組(CCl4+HPE100mg/kg)、HPE中劑量組(CCl4+HPE50mg/kg)和HPE低劑量組(CCl4

2、+HPE25mg/kg)。采用50%CCl4-花生油造模，于大鼠背部皮下注射，每周2次，共12周，正常組及HPE單藥組給予等量生理鹽水皮下注射。造模第二天開(kāi)始灌胃給予大鼠不同劑量HPE，HPE各劑量組分別按100mg/kg、50mg/kg、25mg/kg大鼠體重給藥，HPE單藥組按50mg/kg大鼠體重給藥，每日一次，連續(xù)12周。正常組自由飲水，模型組給予同HPE高劑量組灌胃劑量生理鹽水灌胃。12周后處死大鼠，肝脾稱(chēng)重，計(jì)算肝脾指數(shù)；留

3、取部分肝臟標(biāo)本用于HE及Masson染色光鏡下觀(guān)察肝組織病理學(xué)變化；留取大鼠血清及肝組織勻漿標(biāo)本，采用ELISA法檢測(cè)外周血ALT、AST和TBIL含量，及肝組織HA、LN、CIV、PCⅢ含量。采用免疫組織化學(xué)法(immunohistochemistry,IHC)檢測(cè)TGF-β1、α-SMA、pSmad2、pSmad3、Smad7在各組大鼠肝組織中蛋白表達(dá)，蛋白免疫印跡(Western Blotting,WB)法進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證。

4、　　結(jié)果：
　　模型組大鼠肝脾指數(shù)較正常組明顯增加(P<0.01)，HPE(50,100mg/kg)給藥組能夠明顯減低模型組中升高的肝脾指數(shù)(P<0.05,P<0.01)。正常組及HPE單藥組中，HE染色和Masson染色鏡下見(jiàn)大鼠肝細(xì)胞排列整齊，以中央靜脈為中心呈放射狀排列，肝小葉結(jié)構(gòu)完整，大鼠肝臟基本無(wú)纖維增生，僅在少許主要血管周?chē)?jiàn)少許藍(lán)色纖維；模型組中，HE染色和Masson染色可見(jiàn)肝細(xì)胞排列紊亂，結(jié)構(gòu)改變，多數(shù)肝細(xì)胞腫脹

5、，伴有炎性浸潤(rùn)及灶狀壞死，可見(jiàn)假小葉形成，大量藍(lán)色纖維增生，中心靜脈處明顯，可見(jiàn)纖維增生分割肝組織。結(jié)合肝脾指數(shù)及肝臟病理光鏡下改變，大鼠肝纖維化模型建立成功。給藥后，HPE(50,100mg/kg)劑量組肝臟病理改變較模型組明顯改善，細(xì)胞腫脹、壞死較模型組明顯好轉(zhuǎn)，纖維增生較其明顯減少。與正常組比較，HPE單藥組血清ALT、AST、TBIL含量，肝組織中HA、LN、CIV、PCⅢ含量以及肝組織中TGF-β1、α-SMA、pSmad2、

6、pSmad3、Smad7蛋白表達(dá)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；模型組血清ALT、AST、TBIL含量明顯升高(P<0.01)，肝組織中HA、LN、CIV、PCⅢ含量明顯升高(P<0.01)，肝組織中TGF-β1、α-SMA、pSmad2、pSmad3蛋白表達(dá)均顯著升高，Smad7蛋白表達(dá)顯著下降(P<0.01)。與模型組比較，HPE明顯降低血清ALT、AST、TBIL含量(P<0.01)，顯著降低肝組織中HA、LN、C IV、PCⅢ含量(P<0.