基于hGFAP啟動子的Shp2基因敲除對幼鼠大腦皮質(zhì)、小腦及腦干結(jié)構(gòu)功能的影響.pdf

1、Shp2對多種神經(jīng)系統(tǒng)組織器官和細胞類型的發(fā)育及功能具有重要調(diào)控作用。放射狀膠質(zhì)細胞在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的重要功能近年來被逐漸發(fā)現(xiàn)，目前對于Shp2在放射狀膠質(zhì)細胞中的功能尚不清楚。受人神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(hGFAP)啟動子調(diào)控的Cre重組酶表達于放射狀膠質(zhì)細胞中，是放射狀膠質(zhì)細胞條件性基因敲除的有力工具。因此，培育并研究基于hGFAP啟動子的Shp2條件性敲除小鼠對于揭示調(diào)控中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育和功能的分子機制具有重要意義。
　　研究

2、目的:
　　(1)培育并鑒定基于hGFAP啟動子的Shp2條件性基因敲除小鼠
　　(2)觀察并研究Shp2條件性敲除對幼鼠生存、生長及軀體感覺運動功能發(fā)育的影響
　　(3)研究Shp2條件性敲除對幼鼠大腦皮質(zhì)、小腦及腦干組織結(jié)構(gòu)的影響并初步探討相關(guān)分子機制
　　研究方法:
　　本研究通過hGFAP-Cre轉(zhuǎn)基因小鼠和Shp2flox/flox基因打靶小鼠交配產(chǎn)生hGFAP-Cre/Shp2flox/flox

3、小鼠，即Shp2條件性敲除小鼠。通過基因鑒定、Real-timePCR、Western blot及免疫組化等方式對Shp2條件性敲除小鼠進行多方面的鑒定。觀察記錄Shp2條件性敲除小鼠的外觀、生存時長、出生后體重及大腦重量增長情況，并通過自主回巢實驗、循聲運動實驗、軀體自主翻正實驗及抓桿實驗評估Shp2條件性敲除幼鼠的感覺運動功能的發(fā)育情況。采用石蠟切片H-E、甲苯胺藍染色對Shp2條件性敲除小鼠的大腦皮質(zhì)、小腦及腦干進行組織形態(tài)學(xué)學(xué)觀

4、察，并通過免疫組化、免疫熒光對Shp2條件性敲除小鼠大腦皮質(zhì)細胞增殖、凋亡的情況以及大腦皮質(zhì)、小腦、腦干神經(jīng)元細胞、星形膠質(zhì)細胞的數(shù)量的分布情況進行觀察。最后本研究通過Western blot實驗對Shp2條件性敲除小鼠大腦皮質(zhì)中Akt，Erk信號通路蛋白的表達情況進行了檢測。
　　研究結(jié)果:
　　第一部分
　　經(jīng)hGFAP-Cre小鼠和Shp2flox/flox小鼠交配成功培育出Shp2條件性敲除小鼠。Shp2條件性

5、敲除小鼠在腦組織中檢測出敲除特征性序列，且腦組織中Shp2的mRNA、蛋白表達水平顯著下降。
　　第二部分
　　Shp2條件性敲除幼鼠體形減小，體重及腦重增長遲滯，壽命縮短。Shp2條件性基因敲除幼鼠自主回巢能力、循聲運動能力、自主翻正能力及抓桿能力顯著下降。
　　第三部分
　　Shp2條件性基因敲除小鼠大腦皮質(zhì)面積、厚度減小，大腦皮質(zhì)神經(jīng)元減少、星形膠質(zhì)細胞比例增多、伴有皮質(zhì)細胞凋亡增加、腦室區(qū)細胞增殖下降及E