美達霉素產生菌菌種鑒定及調控基因med-ORF10的功能研究.pdf

1、菌株AM-7161(AM-7161)能夠產生具有強抗腫瘤活性的抗生素美達霉素(medermycin)，作為一株重要的抗生素產生菌，迄今為止并未進行系統(tǒng)的分類鑒定，文獻中僅根據(jù)形態(tài)認為是鏈霉菌(Streptomyces sp.AM-7161)；med-ORF10是美達霉素生物合成途徑中的一個重要基因，通過前期工作初步認為是一新型轉錄調控基因。本研究首先對鏈霉菌AM-7161進行分類鑒定，并利用生物信息學分析、基因互補和基因突變手段對med

2、-ORF10展開功能研究，內容如下：
　　 在不同條件下培養(yǎng)AM-7161并觀察其培養(yǎng)形態(tài)、生長情況及產素情況，以及進行掃描電鏡觀察、革蘭氏染色等，表明：AM-7161為典型鏈霉菌形態(tài)，但較一般鏈霉菌生長迅速；克隆其16S rRNA進行同源性分析及系統(tǒng)進化樹分析表明：AM-7161與納士維爾鏈霉菌xsd08147(Streptomyces nashvillensis strain xsd08147)序列同源性高達99％，確定其為

3、納士維爾鏈霉菌的一個亞種；
　　 對Med-ORF10的一級、二級及三級結構進行生物信息學分析，結果顯示：Med-ORF10為一個非常小的疏水蛋白分子，具有一個SH3(Src homolog3)基序和一個酪蛋白激酶2(CK2)基序；僅含一個NTF2(Nuclear transportor factor2，核運輸因子2)結構域；其同源基因在芳香聚酮抗生素基因簇中廣泛存在，推測是抗生素合成必須基因；與放線紫紅素生物合成基因簇中的ac

4、tⅥ-ORFA(編碼新型正調控蛋白)同源性最近，推測二者功能一致：
　　 對med-ORF10的功能進行體內遺傳學分析：表明med-ORF10突變導致美達霉素的積累量和孢子產量下降：互補后發(fā)現(xiàn)美達霉素的積累和孢子產量均有一定程度的恢復，推測med-ORF10是美達霉素合成中的調控基因，同時有可能會影響到菌株的分化；
　　 以上研究結果初步確定了美達霉素產生菌鏈霉菌AM-7161的分類地位，并且為美達霉素生物合成調控基因的