自噬調節(jié)層流剪切應力下血管內皮細胞eNOS及ET-1表達的初步研究.pdf

1、【目的】:
　　層流剪切應力調節(jié)血管內皮細胞功能，但其具體機制尚未完全闡明。本研究采用體外細胞灌流系統(tǒng)以及離體血管灌流系統(tǒng)，觀察層流剪切應力對血管內皮細胞自噬的影響，以及自噬對剪切應力誘導的內皮型一氧化氮合酶（eNOS）和內皮素-1（ET-1）表達的影響。
　　【方法】:
　　將HUVECs及分離的新西蘭兔頸總動脈置于體外灌流系統(tǒng)，分別在0、5、15 dyne/cm2剪切應力的條件下處理1h，用RT-PCR和weste

2、rn blot分別檢測LC3、Bcline-1、p62、eNOS和ET-1的mRNA和蛋白的表達。采用胃酶抑素以及巴伐洛霉素，孵育2 h，觀察LC3蛋白的表達。在此基礎上，自噬抑制劑3-MA或自噬激動劑雷帕霉素孵育剪切應力（1 h）處理后的血管內皮細胞或兔頸總動脈30min，觀察自噬干預對剪切應力誘導的eNOS和ET-1表達的影響。
　　【結果】:
　　結果表明，層流剪切應力上調內皮細胞以及離體血管eNOS水平，下調ET-1

3、的表達。層流剪切應力環(huán)境下，自噬標記物Bcline-1以及LC3的表達增加，自噬障礙標記物p62表達降低。給予自噬誘導劑雷帕霉素或自噬抑制劑3-MA孵育剪切應力誘導的HUVECs以及兔頸總動脈30 min，結果表明雷帕霉素進一步增強層流剪切應力處理的eNOS的上調以及進一步減弱ET-1的下調；3-MA則抑制層流剪切應力誘導的eNOS的上調，部分地逆轉層流剪切應力引起的ET-1表達下調。
　　【結論】:
　　自噬參與層流剪切應