果蠅神經(jīng)系統(tǒng)特異性miR-124功能研究.pdf

1、StudyonNervousSpecificmiR——1241一‘●●lUnctioninl●lrosophtlamelanogasterADissertationSubmittedtoSoutheastUniversityFortheAcademicDegreeofMasterofScienceBYFENGTongbaoSupervisedbyProfYUANLiudiInsitituteofLifeScienceSoutheastU

2、niversityJune2010中文摘要果蠅神經(jīng)系統(tǒng)特異性miR124功能研究研究生姓名：馮同保導(dǎo)師姓名：袁榴娣(教授)東南大學(xué)發(fā)育與疾病相關(guān)基因教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室中文摘要神經(jīng)系統(tǒng)是由各種各樣的神經(jīng)元相互聯(lián)系組成的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)，動(dòng)物的各種基本生理活動(dòng)都依賴f『各種精確的神經(jīng)同路的參與及調(diào)控。MicroRNA是一類新發(fā)現(xiàn)的廣泛存在于多細(xì)胞生物中1卜編碼RNA，長(zhǎng)度約為19～25nt，據(jù)研究發(fā)現(xiàn)，生物體內(nèi)人部分基岡直接或間接受到miRNAs的調(diào)

3、控。miR124是一種神經(jīng)系統(tǒng)特異的miRNA，在各物種中高度保守，研究表明在小鼠中miR124土要富集住中樞神經(jīng)系統(tǒng)的人腦皮質(zhì)、小腦以及脊髓中，可能參與中樞神經(jīng)發(fā)育的調(diào)控。我們實(shí)驗(yàn)室用果蠅作為模式生物在體內(nèi)水平對(duì)miR124的功能進(jìn)行研究，希望能以此揭示miR124在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過程中的功能。前期的研究’r作已經(jīng)構(gòu)建了miR124過表達(dá)(UASmiR124)果蠅和mir124基囚敲除果蠅(miR124顫砌)模型。本文在此基礎(chǔ)上開展的l

4、：作如卜：1構(gòu)建了miR124的成熟序列突變的過表達(dá)果蠅[UASmiR124()】，與miR一124過表達(dá)的著異是將mir124基閃的核心序列用一個(gè)酶切位點(diǎn)替換，作為檢測(cè)miR124過表達(dá)引起的表別是否具有特異性的miR124對(duì)照果蠅。2剛整體細(xì)胞DAGAL4驅(qū)動(dòng)miR124過表達(dá)將會(huì)導(dǎo)致果蠅在胚胎期致死；Hj神經(jīng)系統(tǒng)特異性的Elav。GAL4驅(qū)動(dòng)miR124過表達(dá)導(dǎo)致果蠅眼睛發(fā)育的異常；但在驅(qū)動(dòng)UASmiR124()過表達(dá)時(shí)沒有相同的

5、表型，說明這些表型是miR124過表達(dá)特異性引起的。3我們對(duì)miR124黼果蠅進(jìn)行了行為學(xué)方面的分析，發(fā)現(xiàn)miR124功能缺失突變體將會(huì)導(dǎo)致果蠅在運(yùn)動(dòng)、飛行以及發(fā)育能力等方面呈現(xiàn)不同程度的缺陷：用不同的神經(jīng)系統(tǒng)特異性標(biāo)記抗體染色發(fā)現(xiàn)，mir124基因敲除以后，中樞神經(jīng)系統(tǒng)軸突的導(dǎo)向以及突觸囊泡的數(shù)目有著不同程度的缺陷。4往對(duì)miR124靶基因的篩選過程中，發(fā)現(xiàn)miR124能夠間接調(diào)節(jié)NSynaptobrevin蛋白水平的變化，該蛋白是調(diào)