視神經脊髓炎譜系疾病患者外周血B細胞研究.pdf

1、目的：
　　視神經脊髓炎譜系疾?。∟euromyelitis Optica Sprectrum Disorders, NMOSD）是一種由抗體介導的中樞神經系統(tǒng)自身免疫性星形膠質細胞病，是造成我國青壯年神經系統(tǒng)功能殘障的重要疾病之一。本研究擬通過檢測急性期 NMOSD患者及接受大劑量甲基潑尼龍（High dose methylprednisolone, HDMP）沖擊治療后外周血B細胞及其亞型：調節(jié)性B細胞（Regulatory

2、B cells, Bregs）、分泌白介素10的B細胞（B cells secreting interleukin-10, B10s）、記憶B細胞（Memory B cells, Bmems）、漿細胞等細胞水平，分析急性期NMOSD患者與HCs相比外周血B細胞及其亞型的變化，探討HDMP沖擊治療對急性期NMOSD患者外周血B細胞及其亞型的影響。分析 NMOSD患者應用優(yōu)化小劑量的利妥昔單抗（Rituximab, RTX）治療的效果及啟動

3、RTX治療的合理時機，分析外周血B細胞變化與病情的相關性，并檢測NMOSD患者接受RTX治療后外周血中抗利妥昔單抗抗體（Antirituximab antibody,ARA）水平，探討ARA產生對NMOSD患者RTX治療效果的影響。
　　方法：
　　納入急性期NMOSD患者13例，與10例年齡性別匹配的HCs。提取NMOSD患者HDMP治療前后及HCs外周血單個核細胞（Peripheral blood monouclear

4、cells,PBMC），應用流式細胞儀檢測分析外周血中B細胞及亞型的比例及數(shù)量。納入接受優(yōu)化小劑量RTX治療的患者16例，收集患者人口學、臨床資料、B細胞監(jiān)測情況，對啟動RTX早晚、不同時期、不同殘疾狀態(tài)的患者的治療效果進行比較和分析。應用酶聯(lián)免疫吸附測定法（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）試劑盒對16例應用RTX治療預防復發(fā)的患者血標本進行ARA測定，并對ARA陽性及陰性的患者進行治療效

5、果的比較和分析。對其中6例患者進行隨訪，動態(tài)監(jiān)測B細胞并分析。
　　結果：
　　1.急性期NMOSD患者外周血CD19+B細胞數(shù)量及頻率較HCs并無明顯差異（p>0.05）， CD19+CD24hiCD38hiBregs數(shù)量及頻率降低（p<0.05），CD19+IL-10+B10s細胞數(shù)量及頻率降低（p<0.05），CD19+CD27+Bmems數(shù)量及頻率無明顯差異（p>0.05），CD19+CD138+漿細胞數(shù)量及頻率升高

6、（p<0.05）。
　　2.急性期NMOSD患者外周血CD19+CD24hiCD38hiBregs數(shù)量及頻率在接受HDMP沖擊治療后較HDMP治療前相比降低（p<0.05），CD19+IL-10+B10s數(shù)量及頻率無明顯變化（p>0.05），CD19+CD27+Bmems數(shù)量及頻率升高（p<0.05）。CD19+CD138+漿細胞數(shù)量及頻率降低（p<0.05）。
　　3.重復小劑量的RTX治療可以顯著降低NMOSD患者的復發(fā)

7、次數(shù)、年復發(fā)率（Annual relapse rate, ARR）及殘疾程度（p<0.05）。距離首次發(fā)病1年內或1年后接受RTX治療的患者各臨床指標間并無明顯差異（p>0.05）。緩解期接受RTX治療的患者比急性期接受治療的患者發(fā)作次數(shù)、ARR及擴展開殘疾狀態(tài)量表（Expanded disability status scale，EDSS）均顯著好轉（p<0.05）。無論在啟動RTX治療時EDSS評分高低，接受RTX治療后患者發(fā)作次數(shù)

8、、ARR及殘疾程度均顯著好轉（p<0.05）。
　　4.接受小劑量的RTX治療的6例NMOSD患者治療前后CD19+CD24hiCD38hiBregs數(shù)量及頻率并無顯著差異（p>0.05），RTX治療反應好的3例患者中 Bregs回升較治療反應差的患者快（ p<0.05）。CD19+CD27+Bmems數(shù)量及頻率在RTX治療后降低（p<0.05），而在Bmems刪除及回升方面，治療效果好者與效果差者兩組間并無顯著差異（p>0.05

9、）。
　　5.16例接受RTX治療的患者中3例出現(xiàn)ARA，并且ARA陰性患者于治療前后的復發(fā)次數(shù)比ARA陽性患者顯著降低（p<0.05），但殘疾程度在兩組中均無顯著變化（p>0.05）。ARA的出現(xiàn)使得患者輸注RTX的周期縮短、頻率增加，其中1例ARA陽性患者出現(xiàn)了嚴重的并發(fā)癥。
　　結論：
　　1.盡管急性期NMOSD患者外周血CD19+B細胞與HCs比較并無顯著差異，但是具有調節(jié)功能的CD19+CD24hiCD38

10、hiBregs細胞及CD19+IL-10+B10s細胞數(shù)量減少，可能調節(jié)功能受損。在NMOSD患者急性發(fā)病中CD19+CD138+漿細胞數(shù)量升高并分泌自身抗體，發(fā)揮致病作用。
　　2.盡管HDMP抑制了CD19+CD24hiCD38hiBreg細胞數(shù)量及頻率，但對能分泌IL-10的B細胞數(shù)量與頻率沒有影響，仍可通過分泌IL-10發(fā)揮免疫調節(jié)功能。HDMP可能不能夠抑制Bmems的增殖，不能控制疾病的復發(fā)。HDMP能夠減少CD19+

11、CD138+漿細胞產生致病性抗體，從而控制病情進一步進展。小劑量糖皮質激素（Glucocorticoid，GC）不能明顯抑制與體液免疫直接相關的Bmems及漿細胞數(shù)量及頻率，單用小劑量GC可能不能完全控制NMOSD疾病復發(fā)。
　　3.優(yōu)化小劑量的RTX在NMOSD患者中預防復發(fā)有效，能夠減少復發(fā)次數(shù)、ARR并改善殘疾程度。NMOSD患者無論是否能在首次發(fā)病1年內啟動RTX治療，在啟動治療后患者均可獲益。NMOSD患者在緩解期啟動治

12、療臨床反應更好。Bregs回升速度快慢可能反映RTX治療反應好壞，Bmems回升速度可能與RTX治療療效無關。
　　4.在應用小劑量RTX間歇補充治療預防NMOSD復發(fā)的患者血漿中存在ARA。接受RTX治療的NMOSD患者，血漿中是否可檢測到ARA與NMOSD臨床特點不相關。ARA的出現(xiàn)可能不影響RTX刪除外周血B細胞的藥物功能，但可能加速RTX降解或封閉其有效蛋白，相對減弱其藥效。監(jiān)測外周血CD19+細胞頻率，調整RTX補充治療