PRL-3調(diào)控PTEN經(jīng)PI3K-Akt信號傳導(dǎo)通路促胃癌腹膜轉(zhuǎn)移.pdf

1、目的：
　　探討PRL-3是否通過其磷酸酶活性調(diào)控PTEN的表達(dá)，并進(jìn)一步通過調(diào)控PI3K/Akt信號通路促胃癌腹膜轉(zhuǎn)移。
　　方法：
　　（1）取49例無腹膜轉(zhuǎn)移的胃癌組織、23例有腹膜轉(zhuǎn)移的胃癌組織、21例正常胃黏膜組織，用Western blot方法檢測PRL-3蛋白、PTEN蛋白、p-PTEN蛋白的表達(dá)變化，用磷酸酶檢測試劑盒檢測PRL-3磷酸酶活性。
　?。?）對培養(yǎng)的1株正常胃黏膜細(xì)胞株GES-1和5

2、株轉(zhuǎn)移潛能不同的胃癌細(xì)胞株（SGC7901,MKN28,MKN45,AGS和MGC803），用上述辦法檢測（1）中的相應(yīng)指標(biāo)。
　?。?）構(gòu)建野生型 PRL-3表達(dá)質(zhì)粒EGFP-PRL-3和突變型PRL-3表達(dá)質(zhì)粒EGFP-PRL-3(D72A/C104S)，轉(zhuǎn)染SGC7901細(xì)胞株，用上述辦法檢測（1）中的相應(yīng)指標(biāo)，用Transell實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移能力變化。
　?。?）構(gòu)建PRL-3高表達(dá)質(zhì)粒EGFP-PRL-3和

3、PRL-3低表達(dá)質(zhì)粒PRL-3-RNAi，轉(zhuǎn)染SGC7901細(xì)胞株，用上訴辦法檢測（1）中的相應(yīng)指標(biāo)，同時用Western blot
　　方法檢測Akt蛋白、p-Akt蛋白及MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)變化，用Transell實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移能力變化。
　?。?）構(gòu)建PTEN低表達(dá)質(zhì)粒PTEN siRNA，并轉(zhuǎn)染PRL-3低表達(dá)SGC7901/PRL-3-RNAi細(xì)胞株，相同辦法檢測（4）中的指標(biāo)。
　　結(jié)果：

4、
　?。?）組織中的蛋白表達(dá)水平：PRL-3在有腹膜轉(zhuǎn)移的胃癌組織較正常胃黏膜組織高表達(dá)；有腹膜轉(zhuǎn)移的胃癌組織PRL-3磷酸酶活性高于無腹膜轉(zhuǎn)移的胃癌組織；PTEN表達(dá)水平：有腹膜轉(zhuǎn)移胃癌組織＜無腹膜轉(zhuǎn)移的胃癌組織＜正常胃黏膜組織；p-PTEN/PTEN：有腹膜轉(zhuǎn)移的胃癌組織＞無腹膜轉(zhuǎn)移的胃癌組織＞正常胃黏膜組織。
　　（2）細(xì)胞株中的蛋白水平變化：PRL-3在胃癌細(xì)胞株中表達(dá)水平高于正常胃黏膜細(xì)胞株，SGC7901細(xì)胞株中

5、表達(dá)最高；PRL-3磷酸酶活性在胃癌細(xì)胞株中表達(dá)水平高于正常胃黏膜細(xì)胞株，SGC7901細(xì)胞株中活性最高；胃癌細(xì)胞株中PTEN表達(dá)水平低于正常胃黏膜細(xì)胞株；胃癌細(xì)胞株p-PTEN/PTEN比率高于正常胃黏膜細(xì)胞株。
　　（3）在有酶活性和無酶活性的PRL-3細(xì)胞株中，兩組PRL-3磷酸酶活性：野生型＞突變型；PTEN表達(dá)量：野生型＜突變型，p-PTEN/PTEN磷酸化比率：野生型＞突變型；不同細(xì)胞株侵襲、轉(zhuǎn)移能力：野生型＞突變型。

6、
　?。?）在PRL-3高表達(dá)及低表達(dá)細(xì)胞株中，PRL-3磷酸酶活性：PRL-3高表達(dá)細(xì)胞株＞PRL-3低表達(dá)細(xì)胞株。PRL-3高表達(dá)細(xì)胞株中，p-Akt/Akt比率升高，Akt被磷酸化激活，MMP-2、MMP-9表達(dá)量升高；PRL-3低表達(dá)細(xì)胞株中則與此相反。當(dāng)我們往PRL-3高表達(dá)細(xì)胞株中加入MMP-2/MMP-9抑制劑I后，胃癌細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移能力下降。
　?。?）在PRL-3低表達(dá)細(xì)胞株中加入PTEN siRNA后，P