阻斷雌激素及其受體α信號(hào)對(duì)BCG治療膀胱癌的影響.pdf

1、目的：檢測(cè)不同的淺表性膀胱癌組織標(biāo)本中雌激素受體ERα的表達(dá)水平。探究雌激素及其受體抑制BCG療效的機(jī)制與淺表性膀胱癌復(fù)發(fā)的關(guān)系。建立淺表性膀胱癌鼠模型，體內(nèi)驗(yàn)證雌激素及其受體抑制BCG免疫治療效果的機(jī)制。
　　方法：
　　1.利用免疫組化的方法檢測(cè)相同分期分級(jí)復(fù)發(fā)與非復(fù)發(fā)淺表性膀胱腫瘤中的雌激素受體ERα的表達(dá)水平并比較其差異。
　　2.細(xì)胞體外實(shí)驗(yàn)部分，穩(wěn)定表達(dá)ERα的人膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞系T24及野生型人膀胱移行

2、細(xì)胞癌細(xì)胞系253J在37℃溫箱，5％CO2條件下培養(yǎng)48h后，利用蛋白印記技術(shù)（Western Blot）檢測(cè)ERα分別在兩種細(xì)胞系的表達(dá)情況。分別用雌二醇，雌二醇拮抗劑ICI182.780和TAM處理上述兩種細(xì)胞后，分別加入BCG，觀察細(xì)胞內(nèi)BCG及整合素蛋白α5β1的表達(dá)情況。探究雌激素影響B(tài)CG的粘附及進(jìn)入細(xì)胞的過(guò)程的機(jī)制。另一部分細(xì)胞遵循上述處理之后，與人單核巨噬細(xì)胞系THP-1進(jìn)行侵襲性實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證雌激素是否影響B(tài)CG對(duì)THP

3、-1細(xì)胞的募集來(lái)殺傷腫瘤細(xì)胞。
　　3.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，采用N-butyl-N-(4-hydroxybutyl) nitrosamine(OH-BBN)誘導(dǎo)FBV雌性小鼠20周后成瘤，分別分為對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組，其中實(shí)驗(yàn)組又分為單純BCG膀胱灌注組、單純雌激素拮抗劑及 BCG和雌激素拮抗劑膀胱灌注組，分別向?qū)嶒?yàn)組各組老鼠膀胱內(nèi)灌注以上藥物,比較實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組小鼠生存率，取瘤組織后，做病理切片，HE染色，同時(shí)檢測(cè)其中BrdU明確其增殖情況，檢

4、測(cè)F4/80明確其巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)情況。
　　結(jié)果：
　　雌激素受體α在術(shù)后復(fù)發(fā)的淺表性膀胱癌中的表達(dá)高于術(shù)后未復(fù)發(fā)的淺表性膀胱癌。
　　T24ERα細(xì)胞中的ERα蛋白的表達(dá)高于野生型T24細(xì)胞，253J細(xì)胞中的ERα蛋白表達(dá)極低；BCG粘附和進(jìn)入膀胱癌細(xì)胞過(guò)程可以被雌二醇抑制；雌二醇抑制膀胱癌細(xì)胞整合素蛋白α5和β1的mRNA表達(dá),相反雌激素拮抗劑ICI182.780促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞內(nèi)整合素蛋白α5和β1的mRNA表達(dá)；在

5、253J和T24ERα兩種膀胱癌細(xì)胞中證實(shí)整合素蛋白α5β1中和抗體可以抑制雌激素拮抗劑ICI182.780誘導(dǎo)的BCG與膀胱癌細(xì)胞粘附及進(jìn)入膀胱癌細(xì)胞內(nèi)能力的增強(qiáng)；膀胱癌細(xì)胞經(jīng)不同處理后與THP-1細(xì)胞共培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，BCG刺激膀胱癌細(xì)胞后可以促進(jìn)THP-1細(xì)胞的遷移，而雌二醇和BCG共同作用膀胱癌細(xì)胞后，THP-1細(xì)胞的遷移能力下降；采用不同的條件刺激T24ERα和253J細(xì)胞，即對(duì)照組、BCG組、E2+BCG組和E2+ICI182.7

6、80+BCG組，收集各組的條件培養(yǎng)基和膀胱癌細(xì)胞，檢測(cè)膀胱癌細(xì)胞中IL-6 mRNA水平與條件培養(yǎng)基中的IL-6蛋白水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)BCG刺激膀胱癌細(xì)胞可以導(dǎo)致膀胱癌細(xì)胞內(nèi)和分泌到細(xì)胞外的 IL-6水平升高；上述四組的條件培養(yǎng)基分別處理THP-1細(xì)胞，ELISA檢測(cè)不同條件培養(yǎng)基中TNFα的表達(dá)，顯示 ICI182.780+BCG組條件培養(yǎng)基中 TNFα的表達(dá)水平比單純 BCG組高，而E2+BCG組比單純 BCG組低；應(yīng)用上述四組條件培養(yǎng)

7、基處理 T24ERα和253J細(xì)胞，48小時(shí)后檢測(cè)細(xì)胞的活性，結(jié)果顯示 THP-1+BCG+ICI182.780組中膀胱癌細(xì)胞活性最低。
　　HE染色顯示對(duì)照組和ICI182.780組出現(xiàn)乳頭狀瘤，BCG組出現(xiàn)膀胱尿路上皮非典型增生，BCG+ICI182.780灌注組膀胱尿路上皮基本正常；對(duì)照組表達(dá) BrdU的膀胱尿路上皮細(xì)胞數(shù)目最多，ICI組與對(duì)照組相似，BCG+ICI182.780組表達(dá)BrdU的膀胱尿路上皮細(xì)胞數(shù)目最少，BC

8、G組比對(duì)照組和ICI182.780組表達(dá)BrdU的膀胱尿路上皮細(xì)胞數(shù)少，但比BCG+ICI182.780多；F4/80的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)以BCG+ICI182.780組最多，BCG組次之、對(duì)照組和ICI組最少；不同處理組治療后，BCG+ICI182.780組小鼠生存時(shí)間最長(zhǎng)，對(duì)照組和ICI182.780組小鼠生存時(shí)間最短。
　　結(jié)論：雌激素受體α在術(shù)后復(fù)發(fā)的表淺膀胱癌中的表達(dá)較高，雌二醇可以抑制BCG與腫瘤細(xì)胞的粘附及進(jìn)入細(xì)胞從而影響B(tài)