白藜蘆醇抑制LoVo細胞增殖與BMP9-p38MAPK的關系研究.pdf

1、實驗目的：
　　分析白藜蘆醇對LoVo細胞的增殖抑制作用及可能的分子機制。
　　實驗方法：
　　本實驗主要運用結晶紫染色、流式、免疫熒光、熒光素酶報告質(zhì)粒、PCR、Western blot、H&E染色和免疫組織化學等技術，研究分析白藜蘆醇對 LoVo細胞的增殖抑制作用與骨形態(tài)蛋白9（ bone morphogenetic protein9, BMP9）和p38 MAPK信號之間的關系及其可能的機制。具體實驗如下：

2、>　　1.運用結晶紫染色、Western blot、PCR和免疫熒光等實驗方法,檢測白藜蘆醇對結腸癌細胞LoVo增殖、凋亡和周期的影響。
　　2.利用裸鼠體內(nèi)異位成瘤實驗，檢測白藜蘆醇對結腸癌的作用。
　　3.采用報告質(zhì)粒檢測白藜蘆醇對BMP/Smad信號的影響。
　　4.分別采用RT-PCR和Western blot檢測白藜蘆醇在LoVo細胞中對BMP9、Smad1/5/8和Smad1/5/8磷酸化水平（p-Smad

3、1/5/8）的影響。
　　5.采用Western blot檢測白藜蘆醇對LoVo細胞中p38以及p38磷酸化水平（p-p38）的影響
　　6.分別利用沉默和過表達 BMP9重組腺病毒處理細胞，檢測在BMP9對白藜蘆醇抑制LoVo細胞增殖作用的影響，以及對p38與p-P38水平的影響。
　　7.采用p38 MAPK抑制劑（SB）處理LoVo細胞，分析p38 MAPK對LoVo細胞增殖的影響,以及白藜蘆醇和/或SB對LoV

4、o細胞中p38、p-p38 MAPK水平的影響。
　　實驗結果：
　　1.白藜蘆醇抑制LoVo細胞增殖，并誘導其凋亡和周期阻滯。
　　2.白藜蘆醇在體內(nèi)能抑制結腸癌腫瘤的生長。
　　3.白藜蘆醇明顯促進 LoVo細胞中 BMP9的表達，但抑制經(jīng)典BMP/Smad信號。
　　4. BMP9過表達可增強白藜蘆醇對LoVo細胞增殖的抑制作用，而沉默表達則減弱白藜蘆醇對LoVo細胞的增殖抑制作用。
　　5.白

5、藜蘆醇降低p-Smad1/5/8蛋白水平，升高p-p38 MAPK的水平；BMP9過表達后進一步增加 p-p38MAPK水平；但沉默表后， p-p38MAPK的水平有一下調(diào)趨勢。
　　6.白藜蘆醇能上調(diào) LoVo細胞中 p-P38 MAPK的蛋白水平，p38 MAPK的抑制劑SB促進LoVo細胞增殖，并部分翻轉白藜蘆醇和BMP9對LoVo細胞的增殖抑制效應。
　　實驗結論：
　　白藜蘆醇能抑制LoVo細胞增殖，并促進凋