TNFα影響有機陰離子轉運多肽1A2表達水平的分子機理研究.pdf

1、人類有機陰離子轉運多肽(Organic Anion Transporting Polypeptides，OATP)是一類重要的藥物轉運蛋白，能介導內、外源性物質的跨細胞轉運，在藥物的吸收、分布、代謝、消除方面起著重要的作用。OATP1A2為OATP家族中的一個成員,在大腦、小腸、肝臟、腎臟等不同組織中表達，可轉運各種不同的藥物，影響藥物在細胞中的累積。因此，對OATP1A2表達水平的調控會影響機體對藥物的生物利用度。炎癥狀態(tài)下眾多藥物代

2、謝酶及轉運體的表達和功能發(fā)生下調，從而導致機體對藥物的處置過程會發(fā)生顯著改變。研究發(fā)現，機體在該狀態(tài)下會釋放一系列炎癥細胞因子，影響藥物代謝酶的表達和功能，藥物轉運體也可能受到這些細胞因子的調控。已有報道表明，TNFα可導致多個OATP家族成員的表達水平下降，但是具體的分子調控機制尚不清楚。本研究通過分析OATP1A2的編碼基因SLCO1A2轉錄起始位點前2087 bp到轉錄起始位點后73bp的片段，發(fā)現在轉錄起始位點前1834bp到1

3、848 bp處有一個轉錄因子NFκB的可能結合位點，由于TNFα對蛋白表達水平的調控往往是通過NFκB實現的，我們進一步對該位點在TNFα調控OATP1A2過程中的作用進行了系統(tǒng)的分析，所獲得的主要研究結果如下：
　　1．構建獲得了帶不同長度SLCO1A2轉錄起始位點上游片段的熒光素酶報告載體，發(fā)現帶有NFκB結合靶位點的重組子比沒有該靶位點的啟動子活性低，說明NFκB的結合可能對SLCO1A2的轉錄表達有抑制作用；
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4、．在對NFκB的可能結合位點進行點突變后，雙熒光素酶報告基因分析發(fā)現啟動子活性部分恢復，說明該結合位點在SLCO1A2表達水平調控過程中發(fā)揮了作用；
　　3．通過TNFα對細胞進行處理，發(fā)現細胞核中NFκB的含量顯著增加，表明轉錄因子NFκB參與了細胞對TNFα刺激的反應；
　　4．TNFα中和抗體處理表達帶有NFκB可能結合位點熒光素酶報告載體的細胞后，啟動子活性部分恢復，進一步說明該位點參與了TNFα對OATP1A2的調