艾葉揮發(fā)油急性肝毒性的線粒體機制研究.pdf

1、艾葉，是一味常用中藥，傳統(tǒng)中醫(yī)理論認為其味辛、苦，性溫，歸肝、脾、腎經，有小毒。艾葉的化學成分比較復雜，主要含有揮發(fā)油、多糖、黃酮類、鞣質、微量元素等多種成分，這些成分既可能是其發(fā)揮藥理作用的物質基礎，也可能是其產生毒理作用的物質基礎?，F代研究已經證實：揮發(fā)油是艾葉導致急性肝毒性的主要物質基礎，氧化應激所致的肝細胞損傷可能是其主要發(fā)生途徑；而肝細胞線粒體功能障礙是藥物誘發(fā)肝損傷的主要機制。因此，有必要深入研究艾葉揮發(fā)油急性肝毒性的線粒體

2、機制。
　　目的：
　　通過氧化應激、肝細胞線粒體結構和功能障礙方面探討艾葉揮發(fā)油急性肝毒性的線粒體機制。
　　方法：
　　1. ICR小鼠70只，SPF級，體重為20±2 g，雌雄各半，隨機分為7組，分別是0 g?kg-1（溶媒組），2.2 g?kg-1，2.5 g?kg-1，2.8 g?kg-1，3.2 g?kg-1，3.7 g?kg-1，4.2 g?kg-1，組間距為1:0.88，灌胃容量為0.2 mL?1

3、0g-1，給藥后連續(xù)觀察14天，記錄動物死亡比率，根據改良寇氏法計算艾葉揮發(fā)油的半數致死量（LD50）及其95％的可信區(qū)間。
　　2. ICR小鼠，52只，SPF級，體重為20±2 g，雌雄各半，隨機分為5組，分別為空白對照組（溶媒組，A組）、2.5 g?kg-1四氯化碳組（陽性對照組，B組）、1.9 g?kg-1艾葉揮發(fā)油組（C組）、2.3 g?kg-1艾葉揮發(fā)油組（D組）、2.7 g?kg-1艾葉揮發(fā)油組（E組），灌胃容量為0

4、.2 mL?10g-1，在給藥后6 h，眼眶靜脈叢取血，全自動生化分析儀檢測ALT、AST、ALP、TB了解肝功能的變化；肝臟組織采用H.E.染色，光鏡觀察肝臟病理組織學變化，Ridit分析評價肝臟病理組織學變化；黃嘌呤氧化酶法檢測肝臟組織SOD，硫代巴比妥酸法檢測肝臟組織MDA，化學比色法檢測肝臟組織GSH和GSSG，分光光度計法檢測肝臟組織抗超氧陰離子自由基及產生超氧陰離子自由基；差速離心法提取肝臟組織線粒體，JC-1熒光探針法檢測

5、線粒體膜電位，分光光度計法檢測線粒體腫脹敏感性，定磷法檢測ATP酶活力。
　　結果：
　　1.艾葉揮發(fā)油的LD50為3.13 g?kg-1；平均可信限為0.44 g?kg-1，其95%可信限區(qū)間為2.91~3.35 g?kg-1。
　　2.與空白對照組比較，不同劑量的艾葉揮發(fā)油給藥6 h后，血清ALT、AST、ALP含量具有顯著的統(tǒng)計學差異（P＜0.05），血清TB含量無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）；不同劑量的艾葉揮發(fā)油

6、組間比較，血清ALT、AST、ALP也均具有顯著的統(tǒng)計學差異（P＜0.05），并且是隨著劑量的增加呈增加趨勢。與空白對照組比較，不同劑量的艾葉揮發(fā)油給藥6 h后對小鼠肝臟組織損傷具有顯著性的統(tǒng)計學差異（P＜0.05）；不同劑量的艾葉揮發(fā)油組間的肝臟組織損傷比較也具有顯著的統(tǒng)計學差異（P＜0.05），并且隨劑量的增加，對肝臟組織的損傷呈上升趨勢。與空白對照組比較，不同劑量的艾葉揮發(fā)油給藥6 h后均能引起小鼠肝臟組織中MDA含量具有顯著的統(tǒng)

7、計學差異（P＜0.05）；不同劑量的艾葉揮發(fā)油組間比較，小鼠肝臟組織中MDA含量也均具有顯著的統(tǒng)計學差異（P＜0.05），并且隨著劑量的增大，MDA的含量呈增加趨勢。與空白對照組比較，艾葉揮發(fā)油D組、E組在給藥6 h后肝臟組織中SOD活力具有顯著的統(tǒng)計學差異（P＜0.05），C組在給藥6 h后肝臟組織SOD活力無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）；不同劑量的艾葉揮發(fā)油組間比較肝臟組織SOD活力具有顯著的統(tǒng)計學差異（P＜0.05），并且隨劑量的增

8、加呈增加趨勢。與空白對照組比較，不同劑量的艾葉揮發(fā)油組小鼠肝臟組織中的GSH和GSSG含量具有顯著的統(tǒng)計學差異（P＜0.05），隨著艾葉揮發(fā)油劑量的增大，小鼠肝臟組織中的GSH含量呈降低趨勢，而GSSG的呈增加趨勢；不同劑量艾葉揮發(fā)油組間比較，肝臟組織中的GSH和GSSG含量具有顯著的統(tǒng)計學差異（P＜0.05）。與空白對照組比較，不同劑量的艾葉揮發(fā)油組產生超氧陰離子自由基活力具有顯著的統(tǒng)計學差異（P＜0.05）；不同劑量的艾葉揮發(fā)油組間

9、比較，產生超氧陰離子自由基活力也均具有顯著的統(tǒng)計學差異（P＜0.05），并且隨著劑量的增加呈增加趨勢。
　　3.與空白對照組比較，不同劑量艾葉揮發(fā)油引起小鼠肝臟組織線粒體膜電位變化具有顯著的統(tǒng)計學差異（P＜0.05）；不同劑量艾葉揮發(fā)油組間比較引起小鼠肝臟組織線粒體膜電位變化具有顯著的統(tǒng)計學差異（P＜0.05），隨著劑量增加膜電位呈下降趨勢。與空白對照組比較，不同劑量的艾葉揮發(fā)油ΔA540nm的變化具有顯著的統(tǒng)計學差異（P＜0.0

10、5）；不同劑量艾葉揮發(fā)油組間比較ΔA540nm變化具有顯著的統(tǒng)計學差異（P＜0.05），并且隨著艾葉揮發(fā)油的劑量的增加呈下降趨勢。與空白對照組比較，不同劑量的艾葉揮發(fā)油組對線粒體Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶、Mg2+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活力的影響具有顯著性統(tǒng)計學差異（P＜0.05）；艾葉揮發(fā)油不同劑量組間比較對Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活力的影響具有顯著的統(tǒng)

11、計學差異（P＜0.05），即隨著艾葉揮發(fā)油的劑量增加，Na+-K+-ATP酶、、Ca2+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活力表現為不同程度的抑制；艾葉揮發(fā)油不同劑量組間比較對線粒體Mg2+-ATP酶活力影響無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）
　　結論：
　　1.艾葉揮發(fā)油具有急性肝毒性，其急性肝毒性可能直接或者間接由肝細胞損傷誘發(fā)。
　　2.艾葉揮發(fā)油急性肝毒性的機制可能與氧化應激相關。
　　3.艾葉揮發(fā)油急性